公开(公告)号：CN110129315A

公开(公告)日：2019-08-16

申请号：CN201910460240.2

申请日：2019-05-30

Applicant: 北华大学

Inventor： 孙丽媛 ,  陈思秀 ,  刘玟妍 ,  艾金霞 ,  李明成 ,  赵云冬 ,  王艳双 ,  高丽君 ,  王雪松 ,  段思琪 ,  李盈诺 ,  王天添

IPC: C12N15/10

Abstract: 本发明公开了一种从阿胶中快速提取DNA的优化方法。本方法使用DNA纯化柱代替酚、氯仿等有毒的有机溶剂，并经过数次优化，确定了提取阿胶中驴源性基因组DNA的最适条件，有效去除阿胶中的蛋白质成分，最高效率的从深加工的阿胶及阿胶制品中提取出严重降解的DNA。本方法所需试剂安全无毒害，操作简单、省时，可在90min内完成阿胶基因组DNA提取，经聚合酶链式反应、2％琼脂糖凝胶电泳后在78bp处出现特异性条带，克隆测序比对后，与GenBank中已登记的驴物种相似性为100％。本方法提取的DNA纯度高、浓度大，解决了阿胶及阿胶制品DNA难以提取的问题，为分子生物学鉴定提供了关键的技术支持。

公开(公告)号：CN108977552A

公开(公告)日：2018-12-11

申请号：CN201810922068.3

申请日：2018-08-14

Applicant: 北华大学

Inventor： 艾金霞 ,  孙丽媛 ,  高丽君 ,  李明成 ,  周亭亭 ,  王艳双 ,  张丽华 ,  段思琪 ,  刘玟妍

IPC: C12Q1/6888 ,  C12Q1/6806

Abstract: 本发明涉及一种食用肉类鉴别阳性对照品及其制备办法和应用，属于PCR鉴别技术领域。该对照品的制备方法包括以下步骤：S1扩增：取经确证的牛、羊、猪、鸡、鸭和驴肉中的至少一种，分别用对应的引物对进行PCR扩增，以琼脂糖凝胶电泳分析扩增结果，分别回收特异性DNA条带；S2纯化：上述特异性DNA条带以吸附柱进行纯化；S3连接：纯化DNA产物与载体进行连接；S4转化：连接产物分别转化至大肠杆菌感受态细胞，获得转化细菌；S5培养：转化细菌涂板培养后进行阳性克隆菌落的筛选，挑取阳性菌落进行扩增，即得阳性对照品。上述食用肉类鉴别阳性对照品与常规肉类鉴别时采用的经鉴定阳性对照品相比，具有DNA信息明确、稳定、便于保存的优点，可作为标准物质使用。

公开(公告)号：CN111118176A

公开(公告)日：2020-05-08

申请号：CN202010074289.7

申请日：2020-01-22

Applicant: 北华大学

Inventor： 李明成 ,  段思琪

IPC: C12Q1/6888 ,  C12Q1/686

Abstract: 本发明涉及食品检测技术领域，是一种袋鼠肉、豚鼠肉与褐家鼠肉多重PCR检测试剂盒，其特点是，它包含：动物组织线粒体DNA提取体系和鉴定反应体系(同阳性对照反应体系、阴性对照液反应体系)。鉴定反应总体系为50μL，其中含有反应缓冲液5μL，dNTP 2-5μL，MgCl23μL，Taq DNA聚合酶1-5μL，袋鼠引物2.25μL、豚鼠引物3μL和褐家鼠引物2μL，待检样本DNA 2-6μL，余为双蒸馏水；袋鼠肉、豚鼠肉与褐家鼠肉多重PCR鉴定方法是利用细胞色素b具有的种属特异性设计三种特异寡核苷酸引物、确定反应程序和结果判定等步骤，能够同时区别三种鼠肉的特异性；具有快速、检测结果可靠等优点。

公开(公告)号：CN109988849A

公开(公告)日：2019-07-09

申请号：CN201910320851.7

申请日：2019-04-21

Applicant: 北华大学

Inventor： 段思琪 ,  李明成 ,  艾金霞 ,  徐岩 ,  崔琳 ,  王贺 ,  刘佳琳 ,  刘亚晗 ,  陈堃

IPC: C12Q1/6888 ,  C12Q1/686

Abstract: 本发明涉及食品检测技术领域，是一种鼠肉、山羊肉与绵羊肉多重PCR检测试剂盒，其特点是，它包含：动物组织线粒体DNA提取体系和三种多重PCR反应体系(阳性对照反应体系、阴性对照反应体系和鉴定反应体系)。PCR反应总体系为50μL，其中含有反应缓冲液5μL，dNTP 2‑5μL，MgCl23μL，Taq DNA聚合酶1‑5μL，每种引物0.5‑2μL，待检样本DNA 1‑3μL，余为双蒸馏水。鼠肉、山羊肉与绵羊肉多重PCR鉴定方法是利用细胞色素b具有的种属特异性设计三种特异寡核苷酸引物、确定反应程序和结果判定等步骤，能够同时区别鼠肉、山羊肉及绵羊肉的特异性；具有简便、快速、检测结果可靠等优点。