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公开(公告)号：CN116023505A
公开(公告)日：2023-04-28
申请号：CN202211010185.5
申请日：2022-08-23
Applicant: 兰州大学
IPC: C07K19/00 , C07K1/30 , C12N15/62 , C12N15/70 , A61K39/04 , A61K9/107 , A61K47/18 , A61K47/28 , A61P31/06
Abstract: 本发明公开了结核分枝杆菌融合蛋白BfrB‑GrpE及制备方法和应用，该结核分枝杆菌融合蛋白BfrB‑GrpE，由结核分枝杆菌复制和休眠期免疫优势抗原BfrB和休眠期免疫优势抗原GrpE联合构建而成；本发明利用基因工程技术，成功构建、表达和纯化了不带有任何标签的结核分枝杆菌融合蛋白BG，解决了融合蛋白所带有的标签可能会影响到动物实验以及后期临床试验的后续问题，并且通过盐析与疏水层析相结合的方法使该无标签融合蛋白得到了有效的纯化；而且其具有表达产量高，表达稳定，对温度及盐离子浓度不敏感且在上清表达等优点，能进行工业发酵；本发明中的新型融合蛋白BG和佐剂联合构建结核亚单位疫苗诱导了偏向Th1型细胞免疫反应。
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公开(公告)号：CN112979825A
公开(公告)日：2021-06-18
申请号：CN202110155163.7
申请日：2021-02-04
Applicant: 兰州大学
Abstract: 本发明公开了结核分枝杆菌融合蛋白LT29的表达纯化方法，将结核分枝杆菌活动期抗原EAST6和结核分支杆菌潜伏期抗原Rv2626c进行融合，中间以柔性肽段连接，构建了融合蛋白ESAT6‑linker‑Rv2626c。将该融合蛋白在大肠埃希菌B21工程菌中进行表达纯化，与佐剂DP联合构建结核亚单位疫苗。该融合蛋白在大肠杆菌中成功得到表达纯化；在小鼠体内可以诱导产生较强的针对结核杆菌特定抗原(ESAT6和Rv2626c)的特异性细胞免疫反应，并促进较长期的记忆性T细胞的产生，具有较强的免疫原性。本发明成功构建、表达和纯化了不带标签的新型融合蛋白LT29，该蛋白融合了结核菌活动期抗原和潜伏期抗原，可诱导产生抗原特异性细胞免疫和体液免疫，有望成为结核病预防和治疗的有效候选疫苗。
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公开(公告)号：CN112250738B
公开(公告)日：2023-05-12
申请号：CN202010912170.2
申请日：2020-09-02
Applicant: 兰州大学
IPC: C07K14/165 , C12N15/70 , C12N1/21 , C12R1/19
Abstract: 本发明提供严重急性呼吸综合征冠状病毒2病毒样颗粒的制备方法，包括以下步骤：将pFastBacDual双表达载体改造为三表达载体，将SARS‑CoV‑2的M、S、E基因进行密码子优化，然后将密码子优化的M、S基因依次分别构建至多角体蛋白pPH启动子后，将E基因构建至pP10启动子后，获得表达EMS重组质粒；将EMS重组质粒转化至DH10 BacTM大肠杆菌中，经蓝白筛选挑取白色阳性克隆，提取杆粒转染ExpiSf9TM细胞，胞内共表达E、M、S结构蛋白，自组装形成病毒样颗粒。本发明成功构建了EMS三表达载体，并利用杆状昆虫系统在ExpiSf9TM细胞内成功表达了SARS‑CoV‑2VLPs。
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公开(公告)号：CN112111462B
公开(公告)日：2022-08-23
申请号：CN202010963441.7
申请日：2020-09-14
Applicant: 兰州大学
Abstract: 本发明提供两株分泌烯醇化酶ENO1单克隆抗体的杂交瘤细胞株，其保藏编号分别为：CCTCCNO:C2020150和CCTCCNO:C2020151，保藏日期为：2020年9月6日。本发明还提供由上述的杂交瘤细胞株产生的烯醇化酶ENO1单克隆抗体，在制备抑制宫颈癌迁移或宫颈癌细胞增殖的药物中的应用。本发明首次将ENO1基因克隆入真核表达载体，表达和纯化出ENO1蛋白。应用ENO1蛋白免疫小鼠，通过杂交瘤技术成功制备并筛选出高效价ENO1mAb，并测序获得其可变区基因序列。本发明的ENO1mAb具有较好的安全性和抗宫颈癌效果，有望应用于临床肿瘤治疗。
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公开(公告)号：CN112972673A
公开(公告)日：2021-06-18
申请号：CN202110142607.3
申请日：2021-02-02
Applicant: 兰州大学
Abstract: 本发明公开了PLGA‑PEG‑PolyI：C纳米颗粒的制备方法，先用化学合成的方法使PLGA和NH2‑PEG形成PLGA‑PEG共聚物，然后用复乳溶剂挥发法(W/O/W)将本实验构建的两个结核分枝杆菌融合蛋白ESAT6‑Rv2626c和Mtb10.4‑HspX(简称为M4)包裹在纳米颗粒中，进而应用聚多巴胺和PolyI:C进行修饰，形成包裹结核分枝杆菌融合蛋白M4的PLGA‑PEG‑PolyI：C(简称为NP)纳米颗粒结核亚单位疫苗NP/M4。采用本发明所提供的纳米颗粒结核亚单位疫苗免疫小鼠后，NP/M4组在HspX蛋白、Rv2626c蛋白刺激后，脾脏淋巴细胞分泌IFN‑γ和IL‑2的水平明显高于PBS组和BCG组，表明NP/M4组可产生较高水平的IFN‑γ和IL‑2；此外，NP/M4组HpsX和Rv2626c特异性IgG和sIgA抗体水平明显高于PBS、BCG和融合蛋白M4组。PLGA‑PEG‑PolyI：C纳米颗粒可辅助抗原诱导细胞免疫和体液免疫，是结核亚单位疫苗理想的佐剂。
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公开(公告)号：CN112250738A
公开(公告)日：2021-01-22
申请号：CN202010912170.2
申请日：2020-09-02
Applicant: 兰州大学
IPC: C07K14/165 , C12N15/70 , C12N1/21 , C12R1/19
Abstract: 本发明提供严重急性呼吸综合征冠状病毒2病毒样颗粒的制备方法，包括以下步骤：将pFastBacDual双表达载体改造为三表达载体，将SARS‑CoV‑2的M、S、E基因进行密码子优化，然后将密码子优化的M、S基因依次分别构建至多角体蛋白pPH启动子后，将E基因构建至pP10启动子后，获得表达EMS重组质粒；将EMS重组质粒转化至DH10 BacTM大肠杆菌中，经蓝白筛选挑取白色阳性克隆，提取杆粒转染ExpiSf9TM细胞，胞内共表达E、M、S结构蛋白，自组装形成病毒样颗粒。本发明成功构建了EMS三表达载体，并利用杆状昆虫系统在ExpiSf9TM细胞内成功表达了SARS‑CoV‑2VLPs。
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公开(公告)号：CN109022376A
公开(公告)日：2018-12-18
申请号：CN201810963640.0
申请日：2018-08-23
Applicant: 兰州大学
IPC: C12N7/01 , C12N15/861 , A61K39/39 , A61K39/04 , A61P31/06
CPC classification number: C12N7/00 , A61K39/04 , A61K39/39 , A61K2039/5256 , A61K2039/55527 , A61P31/06 , C07K14/5418 , C07K14/5443 , C07K2319/00 , C12N15/86 , C12N2710/10021 , C12N2710/10043
Abstract: 本发明公开了一种重组融合细胞因子IL‑7‑Linker‑IL‑15腺病毒的构建方法，首先构建pDC316‑IL‑7‑Linker载体，然后将IL‑15片段通过基因克隆的方法连到pDC316‑IL‑7‑Linker上，构建pDC316‑IL‑7‑Linker‑IL‑15；最后将pDC316‑IL‑7‑Linker‑IL‑15和骨架载体pBHGlox△E1、3Cre共转染HEK293细胞进行包装，得到表达融合细胞因子IL‑7‑Linker‑IL‑15的腺病毒。重组IL‑7‑Linker‑IL‑15腺病毒作为佐剂应用在结核亚单位疫苗中，调控疫苗免疫后记忆性T细胞的分化，增强了疫苗诱导的中央记忆性T细胞介导的免疫应答，提高了结核亚单位疫苗的免疫保护作用。
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公开(公告)号：CN104151433A
公开(公告)日：2014-11-19
申请号：CN201410390880.8
申请日：2014-08-11
Applicant: 兰州大学
Abstract: 本发明提供一种结核分枝杆菌融合蛋白，是序列表中序列2和序列4中的蛋白质。并提供了其制备方法和应用。本发明将融合蛋白LT70与佐剂DDA+PolyI:C进行联合构建结核亚单位疫苗，实验结果显示该疫苗可以在小鼠体内有效诱导结核抗原特异性的细胞和体液免疫应答，并且在小鼠毒力株攻击保护效率试验中具有较强的免疫保护力，保护时间较为持久，保护效果强于BCG，亦具有强化BCG免疫的作用，是一有效的结核病候选疫苗。
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公开(公告)号：CN102247595B
公开(公告)日：2013-06-05
申请号：CN201110199072.X
申请日：2011-07-15
Applicant: 兰州大学
Abstract: 本发明公开了一种聚肌胞联合二甲基三十六烷基铵混合佐剂在制备结核亚单位疫苗中的应用。本发明的有益效果为：本发明提供的混合佐剂DDA/PolyI:C，能够有效增强融合蛋白AMM的抗原特异性IFN-γ的分泌水平，减轻H37Rv感染造成的病理损伤，是预防肺结核疫苗的有效佐剂。
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公开(公告)号：CN102180974A
公开(公告)日：2011-09-14
申请号：CN201110068820.0
申请日：2011-03-22
Applicant: 兰州大学
CPC classification number: A61K39/04 , C07K14/35 , C07K2319/00
Abstract: 本发明公开了一种结核杆菌融合蛋白，是序列表中序列2的蛋白质，并提供了其制备方法和制备疫苗的应用。本发明所提供的构建并表达纯化去标签融合蛋白ESAT6-Ag85B-Mpt64190-198-Mtb8.4(EAMM)，目的是建立针对结核杆菌的免疫应答，以提高疫苗保护效果。本发明所构造的融合蛋白EAMM和佐剂混合作为结核亚单位疫苗，诱导Th1型细胞免疫为主的免疫反应和体液免疫反应，具有较强的免疫原性并且有很好的抗结核保护效果。
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