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公开(公告)号：CN113122655A
公开(公告)日：2021-07-16
申请号：CN201911389185.9
申请日：2019-12-30
Applicant: 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心哈尔滨分中心)
IPC: C12Q1/70 , C12Q1/6851 , C12N15/63 , C12N15/11 , C12R1/93
Abstract: 本发明公开了非洲猪瘟病毒EP402R基因TaqMan荧光定量PCR检测方法。本发明选择目前中国流行的ASFV重要毒力相关因子EP402R基因(CD2v)基因为靶标，构建了阳性质粒标准品并设计了检测非洲猪瘟病毒EP402R基因的实时荧光定量PCR引物和探针，在此基础上，本发明进一步建立了非洲猪瘟病毒EP402R基因TaqMan荧光定量PCR检测方法。本发明所建立的非洲猪瘟病毒EP402R基因TaqMan荧光定量PCR检测方法特异性强、灵敏度高、重复性好，与已有的经典检测方法符合率高，不仅丰富了ASFV现有检测靶标，在ASFV疫苗毒与野毒的检测上也有重要的应用前景。
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公开(公告)号：CN113736746B
公开(公告)日：2023-07-14
申请号：CN202110788781.5
申请日：2021-07-13
Applicant: 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心哈尔滨分中心)
Abstract: 本发明公开了在传代细胞系中良好复制的非洲猪瘟病毒(ASFV)适应毒株及其应用。本发明通过不同传代细胞系的感染实验发现ASFV野毒株(ASFV‑WT)可在HEK293T细胞中低水平复制。将ASFV‑WT在HEK293T细胞中连续传代适应获得了可在HEK293T细胞高效增殖的ASFV适应毒株ASFV‑P61，其病毒滴度最高可以达到107.5TCID50/mL，该适应毒株的微生物保藏编号是CCTCC NO：V202153。此外，该适应毒株基因组5’端的多基因家族缺失基因(包含多个毒力相关基因)序列达20kb左右，表明其毒力可能已经致弱，具有研制成为非洲猪瘟疫苗候选株的潜能。
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公开(公告)号：CN116355863A
公开(公告)日：2023-06-30
申请号：CN202310278967.5
申请日：2023-03-21
Applicant: 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心哈尔滨分中心)
IPC: C12N7/00 , G01N33/569 , A61K39/12 , A61P31/14 , C12R1/93
Abstract: 本发明公开了适应传代细胞培养的猪非典型瘟病毒分离株及其用途。本发明从确定为APPV感染的死亡仔猪中分离到一株适应传代细胞培养的APPV分离株，其微生物保藏编号是：CGMCC No.45417。该分离株可以在PK‑15细胞中连续稳定传代和增殖，且传代过程中病毒滴度逐渐增高。病毒中和试验(VNT)表明基于该分离株进行的VNT能够有效区分APPV抗体阳性血清和阴性血清。本发明提供的APPV分离株为APPV的生物学和致病性研究以及疫苗和诊断试剂的开发提供关键材料，对APPV引起的疾病诊断、感染监测体系的完善和所致疾病流行的控制等具有重要应用前景，同时还可用于制备诊断或防治APPV感染的检测试剂或疫苗。
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公开(公告)号：CN113122654A
公开(公告)日：2021-07-16
申请号：CN201911389079.0
申请日：2019-12-30
Applicant: 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心哈尔滨分中心)
IPC: C12Q1/70 , C12Q1/6851 , C12N15/11
Abstract: 本发明公开了非洲猪瘟病毒的检测靶标以及荧光定量PCR检测引物。本发明以ASFV中国流行毒株为对象，选择多基因家族中相对保守又具研究和应用前景的MGF360‑13L基因为靶标，建立了ASFV MGF360‑13L TaqMan实时荧光定量PCR检测方法。本发明方法可实现对最低15.6拷贝/μL ASFV核酸的检测，与多种病原不存在交叉反应，相比常规PCR检测方法，本发明检测方法在敏感性上高出3个数量级。本发明所建立的检测方法特异性强、灵敏度高、重复性好，与已有的经典检测方法符合率高，能够对可疑样品进行二次确认，不仅丰富了ASFV现有检测靶标，也能鉴别ASFV MGF基因趋势疫苗毒与野毒感染。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN113106071A
公开(公告)日：2021-07-13
申请号：CN202010033003.0
申请日：2020-01-13
Applicant: 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心哈尔滨分中心)
IPC: C12N7/00 , C12N15/63 , C12N5/10 , A61K39/187 , A61P31/14
Abstract: 本发明公开了HQ06表位突变的猪瘟候选标记疫苗株及其应用。本发明以C株为骨架，单个点突变E2蛋白HQ06抗原表位的3个关键氨基酸117F、119G和122P，构建了3株突变体病毒。本发明所构建的3株突变体病毒均失去了与单克隆抗体(mAb)HQ06的反应性，保留了与CSFV E2蛋白其他抗原位点的反应性，生物学特性与C株保持一致；其中，rHCLV‑E2P122A在体外可达到亲本病毒的生长滴度，在家兔和家猪体内均能够诱导机体产生针对CSFV E2的抗体和针对CSFV的中和抗体，但失去了诱导机体产生针对HQ06抗原表位的特异性抗体，本发明的rHCLV‑E2P122A毒株能够开发成猪瘟标记疫苗。
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公开(公告)号：CN119020260A
公开(公告)日：2024-11-26
申请号：CN202411130700.2
申请日：2024-08-16
Applicant: 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心哈尔滨分中心)
IPC: C12N5/071 , C12N5/10 , C12N15/40 , C07K19/00 , C12N15/867 , A61K39/187 , A61P31/14 , A61K39/385 , C12R1/91
Abstract: 本发明公开了表达猪瘟病毒E2蛋白的悬浮CHO细胞系及其在制备猪瘟疫苗中的应用。本发明提供了一株稳定表达猪瘟病毒E2蛋白的悬浮CHO细胞系，其微生物保藏编号是CGMCC No.45825。本发明进一步提供了Fe‑E2NPs纳米颗粒疫苗，包括：由ST‑E2蛋白和铁蛋白偶联得到，所述铁蛋白是将△N‑SpyCatcher蛋白融合到铁蛋白的N‑末端。本发明提供的纳米颗粒疫苗在兔体内诱导比C株疫苗更好的免疫保护，不仅可以诱导IFN‑γ以提供对猪瘟的早期保护，而且更快地诱导有效的体液免疫，兼顾了减毒活疫苗和亚单位疫苗的优点，提供DIVA特性，可为猪瘟的有效替代疫苗、在控制和根除CSF方面发挥重要作用。
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公开(公告)号：CN116218912A
公开(公告)日：2023-06-06
申请号：CN202211592113.6
申请日：2022-12-12
Applicant: 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心哈尔滨分中心)
IPC: C12N15/867 , C12N15/40 , C12N5/10 , G01N33/569 , G01N33/68
Abstract: 本发明公开了稳定表达APPV E2蛋白的哺乳动物细胞系、诊断APPV抗体的ELISA试剂盒。本发明首先构建了稳定表达APPV E2蛋白的哺乳动物悬浮细胞系，成功获得表达水平高、纯度高、抗原性良好的重组APPV E2蛋白，大大降低了生产成本。在此基础上采用所表达的重组APPV E2蛋白建立了诊断猪非典型瘟病毒抗体的间接ELISA试剂盒，其具有高敏感性和特异性，与其它病毒抗体阳性血清无交叉反应，与VNT的符合率为93.7％，可用于APPV抗体的特异性检测；在此基础上，从中国9个省采集猪血清样品利用所建立的试剂盒检测猪群中APPV的血清流行率，结果表明，APPV总血清流行率为73.9％。
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公开(公告)号：CN115704819A
公开(公告)日：2023-02-17
申请号：CN202110904538.5
申请日：2021-08-06
Applicant: 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心哈尔滨分中心)
IPC: G01N33/569 , G01N33/68 , G01N33/543 , G01N33/58 , A61K39/12 , A61P31/20
Abstract: 本发明公开了p34蛋白作为诊断抗原在检测非洲猪瘟病毒中的用途。本发明首先对p34蛋白的抗原性进行了分析，发现原核及真核表达的p34蛋白均能同ASFV阳性血清发生反应，其中原核表达的p34蛋白产量和纯度高，其抗体可有效抑制ASFV复制，表明其可作为ASFV的候选保护性抗原。本发明以p34蛋白为诊断抗原建立了检测非洲猪瘟病毒间接ELISA方法，其敏感性为1:800，且同其他常见猪源病毒血清无交叉反应。批间及批内的变异系数在2.13％‑8.83％之间，与法国ID.VET ASFV抗体检测试剂盒符合率为96.83％，该间接ELISA检测方法敏感性、特异性以及稳定性良好，可应用于ASFV感染血清的检测。
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公开(公告)号：CN113736746A
公开(公告)日：2021-12-03
申请号：CN202110788781.5
申请日：2021-07-13
Applicant: 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心哈尔滨分中心)
Abstract: 本发明公开了在传代细胞系中良好复制的非洲猪瘟病毒(ASFV)适应毒株及其应用。本发明通过不同传代细胞系的感染实验发现ASFV野毒株(ASFV‑WT)可在HEK293T细胞中低水平复制。将ASFV‑WT在HEK293T细胞中连续传代适应获得了可在HEK293T细胞高效增殖的ASFV适应毒株ASFV‑P61，其病毒滴度最高可以达到107.5TCID50/mL，该适应毒株的微生物保藏编号是CCTCC NO：V202153。此外，该适应毒株基因组5’端的多基因家族缺失基因(包含多个毒力相关基因)序列达20kb左右，表明其毒力可能已经致弱，具有研制成为非洲猪瘟疫苗候选株的潜能。
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