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公开(公告)号：CN109913565A
公开(公告)日：2019-06-21
申请号：CN201910281743.3
申请日：2019-04-09
Applicant: 中国农业科学院上海兽医研究所 , 南京农业大学
IPC: C12Q1/689 , C12Q1/6844 , C12Q1/6804 , C12Q1/04 , C12N15/11 , C12R1/63
Abstract: 本发明公开了一种用于检测副溶血弧菌的试剂盒、引物对、探针及方法。所述的试剂盒包括RPA反应体系，所述的RPA反应体系包括RPA引物探针混合液，所述RPA引物探针混合液包括一引物对和探针，所述引物对中上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，所述探针的核苷酸序列如SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示。本发明引物特异性强、灵敏度高、检测结果准确。将检测副溶血弧菌的RPA技术与胶体金测流层析试纸条结合能够实现副溶血弧菌的快速检测，能最少检测到10pg的副溶血弧菌DNA。
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公开(公告)号：CN109913565B
公开(公告)日：2020-06-19
申请号：CN201910281743.3
申请日：2019-04-09
Applicant: 中国农业科学院上海兽医研究所 , 南京农业大学
IPC: C12Q1/689 , C12Q1/6844 , C12Q1/6804 , C12Q1/04 , C12N15/11 , C12R1/63
Abstract: 本发明公开了一种用于检测副溶血弧菌的试剂盒、引物对、探针及方法。所述的试剂盒包括RPA反应体系，所述的RPA反应体系包括RPA引物探针混合液，所述RPA引物探针混合液包括一引物对和探针，所述引物对中上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，所述探针的核苷酸序列如SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示。本发明引物特异性强、灵敏度高、检测结果准确。将检测副溶血弧菌的RPA技术与胶体金测流层析试纸条结合能够实现副溶血弧菌的快速检测，能最少检测到10pg的副溶血弧菌DNA。
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公开(公告)号：CN101955530B
公开(公告)日：2012-09-12
申请号：CN201010529394.1
申请日：2010-11-02
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明涉及鲫鱼IgM提取纯化工艺，一种将鲫鱼IgM从鲫鱼血清中与其它化合物相分离，从而获得高纯度鲫鱼IgM的方法。包括制备鲫鱼血清；通过33%到50%饱和硫酸铵分级沉淀法对鲫鱼血清进行粗提；通过Macro-prephighQ强阴离子交换柱从鲫鱼血清饱和硫酸铵分离沉淀提取物中进一步提取鲫鱼IgM；经离子交换层析获得的样品进一步通过SephacrylTMS-300葡聚糖凝胶层析柱进行精细分离纯化。从5mL鲫鱼血清（蛋白浓度60mg/mL)中纯化得到4.4mgIgM，得率为1.4%，经SDS-PAGE检测、蛋白扫描仪分析，纯度达96%以上。
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公开(公告)号：CN102012429A
公开(公告)日：2011-04-13
申请号：CN201010530132.7
申请日：2010-11-02
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明提供了嗜水气单胞菌重组气溶素Dot-ELISA检测方法，属于生物技术领域。以硝酸纤维素（NC）膜为固相载体，以嗜水气单胞菌重组气溶素兔抗血清为一抗，HRP-羊抗兔IgG为二抗。本发明一次可进行多个样本的测定，可显著缩短检测样本所需要的时间，且操作简便快速，同时可满足在非实验室条件下进行的要求，能够快速、方便地用于致病性嗜水气单胞菌的检测。
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公开(公告)号：CN112522213B
公开(公告)日：2022-11-01
申请号：CN202011576998.1
申请日：2020-12-28
Applicant: 南京农业大学
IPC: C12N7/00 , C12N5/071 , A61K39/145 , A61P31/16 , G01N33/68 , G01N33/569 , C12R1/93
Abstract: 本发明公开了一种分离的H3N2流感病毒株及其应用，所述病毒的HA蛋白的氨基酸序列如SEQ ID No.2所示，NA蛋白的氨基酸序列如SEQ ID No.3所示。本发明的目的是提供一株复制增强的H3N2流感病毒CP15，该病毒骨架全部来源于其母本A/Canine/Jiangsu/06/2010病毒株，仅在HA和NA蛋白分别出现K156E和R201K的氨基酸突变，抗CP15病毒的血清抗体对CP15及亲本JS/10均具有一定的中和活性，为将该病毒株应用于犬流感的防治奠定基础。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN112522213A
公开(公告)日：2021-03-19
申请号：CN202011576998.1
申请日：2020-12-28
Applicant: 南京农业大学
IPC: C12N7/00 , C12N5/071 , A61K39/145 , A61P31/16 , G01N33/68 , G01N33/569 , C12R1/93
Abstract: 本发明公开了一种分离的H3N2流感病毒株及其应用，所述病毒的HA蛋白的氨基酸序列如SEQ ID No.2所示，NA蛋白的氨基酸序列如SEQ ID No.3所示。本发明的目的是提供一株复制增强的H3N2流感病毒CP15，该病毒骨架全部来源于其母本A/Canine/Jiangsu/06/2010病毒株，仅在HA和NA蛋白分别出现K156E和R201K的氨基酸突变，抗CP15病毒的血清抗体对CP15及亲本JS/10均具有一定的中和活性，为将该病毒株应用于犬流感的防治奠定基础。
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公开(公告)号：CN104531607B
公开(公告)日：2017-11-07
申请号：CN201410836765.9
申请日：2014-12-29
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明提供了一种犬原代细支气管上皮细胞及其在制备永生化细胞中的应用，属于生物技术领域。所述犬原代细支气管上皮细胞，取至45日龄的清洁级雄性比格犬。分离犬气管组织，剪碎后加入胶原酶及胰酶消化，得到完整的细支气管组织后培养所获细胞进一步通过间接免疫荧光试验检测角蛋白18表达，证实成功获得犬原代细支气管上皮细胞。构建含端粒酶基因（hTERT）的真核表达载体pEGFP‑hTERT，转染犬原代细支气管上皮细胞后，hTERT基因高表达，细支气管上皮细胞能够稳定传代培养至少20代。本发明制备的犬永生化细支气管上皮细胞，为研究犬流感病毒等犬类病原的感染机制提供了重要的生物材料。
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公开(公告)号：CN104293739A
公开(公告)日：2015-01-21
申请号：CN201410535918.6
申请日：2014-10-11
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明提供了一种针对H3N2犬流感病毒HA2蛋白的单克隆抗体，属于生物技术领域。利用2010年分离的H3N2犬流感病毒江苏分离株JS/10，接种10日龄SPF鸡胚，收集血凝效价大于等于6的尿囊液，纯化病毒接种MDCK细胞，皮内多点注射接种小鼠，细胞融合后，经三次ELISA检测已生成细胞集落的细胞上清，筛选出抗H3亚型杂交瘤细胞株mAbD7，中和抗体效价达1:12800，识别抗原鉴定证实其针对保守的HA2蛋白，抗体亚类为IgG2b。本发明制备针对H3N2犬流感病毒株JS/10的保守的HA2蛋白单克隆抗体，为H3N2犬流感病毒感染的治疗提供了重要的免疫制剂，具有潜在的应用前景。
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公开(公告)号：CN102012429B
公开(公告)日：2013-04-10
申请号：CN201010530132.7
申请日：2010-11-02
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明提供了嗜水气单胞菌重组气溶素Dot-ELISA检测方法，属于生物技术领域。以硝酸纤维素（NC）膜为固相载体，以嗜水气单胞菌重组气溶素兔抗血清为一抗，HRP-羊抗兔IgG为二抗。本发明一次可进行多个样本的测定，可显著缩短检测样本所需要的时间，且操作简便快速，同时可满足在非实验室条件下进行的要求，能够快速、方便地用于致病性嗜水气单胞菌的检测。
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公开(公告)号：CN118620841A
公开(公告)日：2024-09-10
申请号：CN202410884151.1
申请日：2024-07-02
Applicant: 连云港海关综合技术中心 , 南京农业大学
IPC: C12N5/079
Abstract: 本发明提供了一种金鱼脑细胞系GFB的体外培养方法和应用，所述培养方法包括采用灭菌铜网覆盖法使所述金鱼脑组织块贴附于灭菌铜网的表面，构建得到所述金鱼脑细胞系，所述灭菌铜网覆盖法将灭菌铜网覆盖至所述金鱼组织块的表面，使所述金鱼脑组织块贴附生长，促进所述金鱼脑细胞的迁出和金鱼脑原代细胞的生长，构建得到所述金鱼脑细胞系。本发明通过体外培养方法成功建立了一株金鱼脑细胞系，采用灼烧法对铜网进行灭菌，并结合灭菌铜网覆盖法来提高金鱼脑组织块的细胞迁出率和生长率，为鲤疱疹病毒2型等危害金鱼养殖的病毒病研究提供了一种敏感性好、易于操作的实验材料。
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