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公开(公告)号：CN107522793A
公开(公告)日：2017-12-29
申请号：CN201710825987.4
申请日：2017-09-14
Applicant: 东北农业大学
IPC: C08B37/00
CPC classification number: C08B37/0003
Abstract: 本发明公开了一种用于超声波辅助复合酶提取的榛蘑多糖的纯化方法，属于纯化多糖的制备领域。该纯化方法包括以下步骤：选择Sevage法脱蛋白，优化的工艺条件为样液与sevage试剂体积比5：1、氯仿与正丁醇体积比5：1、振摇时间30min,脱蛋白次数为三次；再用过氧化氢进行脱色，优化的工艺条件为脱色温度50℃、溶液pH值8.0、脱色时间3h，H2O2添加量为40％；利用乙醇分级沉淀获得两种组分的多糖Z1、Z2；最后利用SephadexG-150凝胶层析柱进一步纯化，收集两种不同组分的榛蘑多糖洗脱液，经减压浓缩后，冻干处理后，得到纯净的两个多糖组分。
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公开(公告)号：CN106442769A
公开(公告)日：2017-02-22
申请号：CN201610800938.0
申请日：2016-09-05
Applicant: 东北农业大学
IPC: G01N30/02
CPC classification number: G01N30/02
Abstract: 本发明公开了一种采用高效液相色谱法同时检测乳中克拉维酸和他唑巴坦的方法，属于食品检测技术领域。该方法是将样品进行前处理后按照如下色谱条件利用高效液相色谱进行测定；所述色谱条件为：色谱柱为C18色谱柱；检测波长为210nm-220nm；流动相为磷酸溶液-甲醇；流速为0.7mL/min-1.2mL/min；进样量为10μL；洗脱时间为10min。结果表明克拉维酸和他唑巴坦的含量在12.5～200μg/mL的浓度范围内具有良好的线性关系，且相关系数是0.9990和0.9992，采用空白基质匹配标准溶液的方法进行标准校正，显示克拉维酸和他唑巴坦的平均回收率在81％～92％之间，相对标准偏差小于1.650％。该方法适用于乳中β-内酰胺酶抑制剂克拉维酸和他唑巴坦的同时检测。
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公开(公告)号：CN106153778A
公开(公告)日：2016-11-23
申请号：CN201610800939.5
申请日：2016-09-05
Applicant: 东北农业大学
IPC: G01N30/02
CPC classification number: G01N30/02 , G01N2030/027
Abstract: 本发明公开了一种采用高效液相色谱法检测乳中他唑巴坦的方法，属于食品检测技术领域。该方法是将样品进行前处理后按照如下色谱条件利用高效液相色谱进行测定；所述色谱条件为：色谱柱为C18色谱柱；检测波长为210nm‑220nm；流动相为四丁基氢氧化铵‑磷酸二氢钾溶液‑乙腈；流速为0.7mL/min‑1.2mL/min；进样量为10μL；洗脱时间为10min。结果表明他唑巴坦的含量在12.5～200μg/mL的浓度范围内具有良好的线性关系，且相关系数是0.9993，采用空白基质匹配标准溶液的方法进行标准校正，显示他唑巴坦的平均回收率在86％～92％之间，相对标准偏差小于1.573％。该方法具有操作简单，灵敏度高，结果准确等特点，适用于乳中β‑内酰胺酶抑制剂他唑巴坦的检测。
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公开(公告)号：CN105784876A
公开(公告)日：2016-07-20
申请号：CN201610317021.5
申请日：2016-05-12
Applicant: 东北农业大学
IPC: G01N30/02
CPC classification number: G01N30/02 , G01N2030/027
Abstract: 本发明公开了一种采用高效液相色谱法检测乳中克拉维酸的方法及应用，属于食品检测技术领域。该方法是将样品进行前处理后按照如下色谱条件利用高效液相色谱进行测定；所述色谱条件为：色谱柱为C18色谱柱；检测波长为210nm?220nm；流动相为磷酸二氢钾溶液?甲醇；流速为0.7mL/min?1.2mL/min；进样量为10μL；洗脱时间为10min。结果表明克拉维酸的含量在5～200μg/mL的浓度范围内具有良好的线性关系，且相关系数是0.9992，采用空白基质匹配标准溶液的方法进行标准校正，显示克拉维酸的平均回收率在83％～92％之间，相对标准偏差小于1.185％。该方法具有操作简单，灵敏度高，结果准确等特点，适用于乳中β?内酰胺酶抑制剂克拉维酸的检测。
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公开(公告)号：CN107490694A
公开(公告)日：2017-12-19
申请号：CN201710341429.0
申请日：2017-05-16
Applicant: 东北农业大学
IPC: G01N33/68 , G01N33/558
CPC classification number: G01N33/68 , G01N33/558 , G01N2333/986
Abstract: 本发明公开了一种利用胶体金免疫层析试纸条检测乳中TEM型β-内酰胺酶的方法，用于检测牛奶中的β-内酰胺酶，具体制备方法如下：采用Frens方法制备胶体金，利用目测法、紫外扫描、透射电镜鉴定胶体金颗粒的大小、均匀度、分散性；通过Mey氏稳定化实验确定最适抗体添加量及最适pH值；低温高速离心法制备金标抗体，利用目测法、紫外扫描、斑点金免疫渗滤试验进行鉴定；确定检测线和质控线上一抗、二抗的稀释倍数；筛选制备试纸条的材料及处理液；对制备好的试纸条进行灵敏度及稳定性检测，确定最低检测限及保存时间；本发明适用于大规模检测的初筛工作，检测可在15min内完成。
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公开(公告)号：CN107365393A
公开(公告)日：2017-11-21
申请号：CN201710604809.9
申请日：2017-07-24
Applicant: 东北农业大学
IPC: C08B37/00
CPC classification number: C08B37/0003
Abstract: 本发明公开了一种亚临界水萃取法得到的薏米多糖的除蛋白方法，属于纯化多糖的制备领域。一种采用酶和Sevage试剂结合去除亚临界水萃取法得到的薏米粗多糖中的蛋白的方法，包括：将亚临界水萃取法得到的薏米粗多糖配制成溶液，向溶液中分别加入四种蛋白酶，进行筛选，再分别控制蛋白酶添加量、温度、pH、作用时间后，100℃沸水中煮5min灭酶，3000r/min离心5min除去沉淀，保留上清液，向上清液中加入一定体积的氯仿与正丁醇溶液后，静置15min，振摇25min，3500r/min离心15min除去沉淀，上清液浓缩至原体积1/4后，加入4倍体积95％乙醇，静置24h后离心，冻干，得到产品。
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公开(公告)号：CN107561263A
公开(公告)日：2018-01-09
申请号：CN201710604785.7
申请日：2017-07-24
Applicant: 东北农业大学
IPC: G01N33/531
Abstract: 本发明公开了一种快速检测乳制品中青霉素/β-内酰胺酶的试剂盒的制备方法，用于检测乳制品中的青霉素/β-内酰胺酶，具体制备方法如下：首先采用碳二亚胺法将青霉素与牛血清蛋白(BSA)偶联合成包被原，用紫外扫描鉴定偶联效果；优化胶体金标记的最适抗体浓度及最适pH值，低温高速离心制备金标抗体(抗青霉素单克隆抗体)，优化金标抗体的制备过程；确定检测线和质控线上包被抗原及二抗的稀释倍数；试纸条的组装、划线、烘干处理；制备青霉素样品瓶，先用制备好的试纸条确定青霉素的最低检测线，从而合理选择样品瓶中青霉素的含量，优化保护剂的添加量，检测试纸条的灵敏度检测及稳定性，确定最低检测限及保存时间。
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公开(公告)号：CN106220751A
公开(公告)日：2016-12-14
申请号：CN201610800639.7
申请日：2016-09-05
Applicant: 东北农业大学
IPC: C08B37/00
CPC classification number: C08B37/0003
Abstract: 本发明公开了一种超声波辅助复合酶提取榛蘑多糖的方法，属于提取多糖的制备领域。该制备方法包括以下步骤：将榛蘑洗净、晾干、粉碎后过60目筛，得到榛蘑粉末；按照不同的条件进行酶解，100℃灭酶，冷却；将上述提取液再经过不同条件的超声处理后，离心，上清液即为多糖提取液。通过单因素试验，最终确定了提取榛蘑多糖的最适液料比、酶解时间、酶解温度、复合酶比例、加酶量、超声时间、超声功率。本发明研究了不同反应条件对榛蘑多糖提取率的影响，优化得出提取榛蘑多糖的最适条件。
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公开(公告)号：CN106093403A
公开(公告)日：2016-11-09
申请号：CN201610356629.9
申请日：2016-05-26
Applicant: 东北农业大学
IPC: G01N33/577 , G01N33/543
CPC classification number: G01N33/577 , G01N33/543
Abstract: 本发明提供一种优化的用双抗体夹心ELISA法检测β‑内酰胺酶的方法，β‑内酰胺酶抗原40U/mL包被酶标板，0.8mg/ml的Rabbit Anti‑LACTB按体积比1:800稀释，包被，体积分数5％BSA封闭酶标板，加待测样品，设阴性对照，100ug/ml的β‑lactamase‑Antibody按体积比1:3000稀释，孵育；1mg/ml羊抗鼠lgG‑HRP体积比1:5000稀释加入，孵育；TMB单组份显色液显色；终止反应，测OD450nm，通过待测样品平均OD值与阴性对照组OD值比判定样品中β‑内酰胺酶浓度阴性或阳性。该方法具有检测速度快、灵敏度高、操作简单等优点。
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公开(公告)号：CN105918611A
公开(公告)日：2016-09-07
申请号：CN201610308451.0
申请日：2016-05-11
Applicant: 东北农业大学
Abstract: 本发明公开了一种复合酶改性乳清蛋白制备可溶性聚合物的制备方法，属于蛋白制备的技术领域。本发明要解决现有酶改性诱导的凝胶随着冷藏时间的延长，粘度变化不显著或增速慢，胶凝能力差导致不适合应用的技术问题。本发明的方法：将乳清蛋白溶液搅拌预热，添加蛋白酶水解，水解之后用保鲜膜封口，立即加热使酶失活，用水冷却至50℃，加入mTGase 5.0U/g，反应1h，之后85℃、5min使酶灭活，样品冷却至室温，得到可溶性聚合物。本发明方法所生产的乳清蛋白可溶性聚合物表观透明，粘度适宜易于应用，稳定且具有高凝胶性。
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