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公开(公告)号：CN104611366A
公开(公告)日：2015-05-13
申请号：CN201410857205.1
申请日：2014-12-26
Applicant: 东北农业大学
Abstract: 本发明涉及一种鸡堆型艾美耳球虫基因重组疫苗及其引物和应用。鸡堆型艾美耳球虫基因重组疫苗，其序列如序列表Seq No.1所示。用于构建鸡堆型艾美耳球虫基因重组疫苗的引物对，上引物P1：如序列表Seq No.2所示；下引物P2：如序列表Seq No.3所示。构建方法，包括如下步骤：根据现有质粒pMD18-T-Hsp90的核苷酸序列设计引物对；进行常规链式聚合酶反应扩增Hsp90基因；构建重组质粒pVAX1-Hsp90。最后进行雏鸡免疫实验，证明重组基因疫苗具有较好的保护雏鸡免受球虫侵害的效果。该核酸疫苗制备简单，省时省力，成本低，稳定性好。
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公开(公告)号：CN102816788A
公开(公告)日：2012-12-12
申请号：CN201210302585.3
申请日：2012-08-23
Applicant: 东北农业大学
Abstract: 一种在乳酸乳球菌中表达鸡堆型艾美耳球虫3-1E蛋白的方法，涉及一种表达鸡堆型艾美耳球虫3-1E蛋白的方法。本发明是要解决目前乳酸乳球菌中无法表达鸡艾美耳球虫子孢子/裂殖子阶段表面抗原3-1E的问题。方法：将鸡堆型艾美耳球虫3-1E基因序列依照乳酸乳球菌的密码子偏好性进行优化，插入克隆载体并转化大肠杆菌感受态细胞，得阳性转化子；将阳性转化子和乳酸菌表达载体酶切后连接，构建重组表达载体；转化乳酸菌感受态细胞，鉴定；进行重组菌培养及诱导，即完成在乳酸乳球菌NZ9000中表达3-1E蛋白。本发明将密码子优化后的经人工合成的3-1E蛋白成功的在乳酸乳球菌中进行了表达。本发明方法用于球虫病的预防领域。
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公开(公告)号：CN102021249A
公开(公告)日：2011-04-20
申请号：CN201010553870.3
申请日：2010-11-22
Applicant: 东北农业大学
Abstract: 本发明提供一种反转录-环介导等温扩增检测猪流行性腹泻的方法。根据PEDV N蛋白保守区域基因，设计针对靶基因上6个区域的3对引物，合成两条RT-PCR引物，使用RT-LAMP技术鉴定PED病毒；RT-PCR反应；获得的RNA进行反转录；获得的cDNA用于PCR反应；确保了扩增的特异性，扩增速度快，可在30～60min内获得结果，无需电泳实现肉眼观察扩增效果。使用酶混合物，可在恒温65℃情况下，1h内实现反转录和核酸扩增，RT-LAMP的检测是在LAMP扩增DNA的基础上，加入了反转录酶而实现扩增检测RNA，反转录和扩增一步完成，省去了传统RT-PCR要先进行的反转录步骤。
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公开(公告)号：CN104694670B
公开(公告)日：2017-09-19
申请号：CN201510122293.5
申请日：2015-03-20
Applicant: 东北农业大学
Abstract: 本发明公开了一种猪轮状病毒反转录环节导等温扩增检测方法及应用。所述检测方法步骤如下：（1）建立RT‑LAMP反应体系，同时设立阴性对照；所述RT‑LAMP反应体系共25μL，包括：模板2μL，0.8μM FIP和BIP引物各0.5μL，0.2μM的F3和B3引物各0.25μL，2μL dNTP，5 mM MgS04，8 U Bst DNA polymerase和1×ThermoPol Buffer，1μL MLV反转录酶，用灭菌水体积补足至25μL；所述阴性对照的模板为灭菌水；（2）在恒温水浴锅中61‑65℃反应20‑60 min后，80℃终止20 min，扩增产物经琼脂糖凝胶电泳鉴定或加入2μL SYBR Green I染料，紫外灯下或肉眼观察结果。本发明为PRV的临床诊断与流行病学调查提供了一种简单、快速和准确的分子生物学诊断方法。
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公开(公告)号：CN104515854B
公开(公告)日：2017-02-01
申请号：CN201510004752.X
申请日：2015-01-06
Applicant: 东北农业大学
IPC: G01N33/577 , G01N33/569
Abstract: 本发明公开了一种产气荚膜梭菌α毒素单克隆抗体阻断ELISA检测方法，用于α毒素的早期检测，为产气荚膜梭菌的早期诊断、传播预防、后续研究提供有效检测工具。所述方法包括以下两个步骤：一、单克隆抗体阻断ELISA检测方法的建立；二、结果判定标准的确定。本发明首次建立了特异性好、灵敏度高、稳定性好，快速、简便，高效检测α毒素的单克隆抗体阻断ELISA检测方法，该方法操作简单、检测速度快、可定量检测和大批量检测。总之，该单克隆抗体阻断ELISA有望在产气荚膜梭菌病的防治中发挥重要作用。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN104807992A
公开(公告)日：2015-07-29
申请号：CN201510201521.8
申请日：2015-04-25
Applicant: 东北农业大学
IPC: G01N33/569 , G01N33/577
CPC classification number: G01N33/56911 , G01N33/56916 , G01N33/577 , G01N2333/33
Abstract: 本发明公开了一种检测产气荚膜梭菌NetB毒素抗体的阻断ELISA方法，用于产NetB毒素产气荚膜梭菌感染的早期检测，为产气荚膜梭菌病的特异性诊断和综合防治及后续科学研究提供有效的检测工具。所述阻断ELISA方法包括以下两个步骤：一、阻断ELISA检测方法的建立；二、结果判定标准的确定。本发明建立了一种快速、敏感和特异的阻断ELISA方法来检测产气荚膜梭菌感染血清中NetB毒素的特异性抗体，有望成为临床产气荚膜梭菌病快速诊断和免疫检测的重要工具，必将在产气荚膜梭菌病的诊断和防治中发挥重要作用，具有很好的应用价值。
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公开(公告)号：CN104515854A
公开(公告)日：2015-04-15
申请号：CN201510004752.X
申请日：2015-01-06
Applicant: 东北农业大学
IPC: G01N33/577 , G01N33/569
CPC classification number: G01N33/577
Abstract: 本发明公开了一种产气荚膜梭菌α毒素单克隆抗体阻断ELISA检测方法，用于α毒素的早期检测，为产气荚膜梭菌的早期诊断、传播预防、后续研究提供有效检测工具。所述方法包括以下两个步骤：一、单克隆抗体阻断ELISA检测方法的建立；二、结果判定标准的确定。本发明首次建立了特异性好、灵敏度高、稳定性好，快速、简便，高效检测α毒素的单克隆抗体阻断ELISA检测方法，该方法操作简单、检测速度快、可定量检测和大批量检测。总之，该单克隆抗体阻断ELISA有望在产气荚膜梭菌病的防治中发挥重要作用。
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公开(公告)号：CN103145804A
公开(公告)日：2013-06-12
申请号：CN201310028148.1
申请日：2013-01-25
Applicant: 东北农业大学
Abstract: 本发明涉及一种猪细小病毒VP2亲和肽A和B及其编码核苷酸，猪细小病毒VP2亲和肽A，氨基酸序列如序列表SEQ ID No.1所示，其核苷酸序列如序列表SEQ ID No.2所示。猪细小病毒VP2亲和肽B，氨基酸序列如序列表SEQ ID No.3所示，其核苷酸序列如序列表SEQ ID No.4所示。还涉及到一对引物VP2-3和VP2-4的核苷酸序列。本发明的多肽由于分子量较小，易穿透进入组织，比大蛋白渗透能力更强；半衰期短，在组织中蓄积很少；结构稳定且生产成本较低。
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公开(公告)号：CN102021249B
公开(公告)日：2013-01-23
申请号：CN201010553870.3
申请日：2010-11-22
Applicant: 东北农业大学
Abstract: 本发明提供一种反转录-环介导等温扩增检测猪流行性腹泻的方法。根据PEDV N蛋白保守区域基因，设计针对靶基因上6个区域的3对引物，合成两条RT-PCR引物，使用RT-LAMP技术鉴定PED病毒；RT-PCR反应；获得的RNA进行反转录；获得的cDNA用于PCR反应；确保了扩增的特异性，扩增速度快，可在30～60min内获得结果，无需电泳实现肉眼观察扩增效果。使用酶混合物，可在恒温65℃情况下，1h内实现反转录和核酸扩增，RT-LAMP的检测是在LAMP扩增DNA的基础上，加入了反转录酶而实现扩增检测RNA，反转录和扩增一步完成，省去了传统RT-PCR要先进行的反转录步骤。
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公开(公告)号：CN104774249B
公开(公告)日：2018-04-10
申请号：CN201510190932.1
申请日：2015-04-21
Applicant: 东北农业大学
Abstract: 本发明公开了一种猪流行性腹泻病毒M蛋白亲和肽及其筛选方法，所述M蛋白亲和肽的氨基酸序列为AGWYCTEVLCVQ或AYCTRHVCYLDN。本发明利用噬菌体展示技术获得能特异性结合PEDV及其重组蛋白M的短肽，并对该短肽人工合成，分析其抗病毒的生物学功能，结果表明本发明首次筛选合成的2种PEDV M蛋白的亲和多肽均能够有效的抑制PEDV的复制，这为今后对PEDV小分子诊断和治疗制剂的开发提供了一定的理论基础和试验依据。
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