公开(公告)号：CN102021249A

公开(公告)日：2011-04-20

申请号：CN201010553870.3

申请日：2010-11-22

Applicant: 东北农业大学

Inventor： 任晓峰 ,  李鹏冲 ,  李广兴

IPC: C12Q1/70 ,  C12Q1/68

Abstract: 本发明提供一种反转录-环介导等温扩增检测猪流行性腹泻的方法。根据PEDV N蛋白保守区域基因，设计针对靶基因上6个区域的3对引物，合成两条RT-PCR引物，使用RT-LAMP技术鉴定PED病毒；RT-PCR反应；获得的RNA进行反转录；获得的cDNA用于PCR反应；确保了扩增的特异性，扩增速度快，可在30～60min内获得结果，无需电泳实现肉眼观察扩增效果。使用酶混合物，可在恒温65℃情况下，1h内实现反转录和核酸扩增，RT-LAMP的检测是在LAMP扩增DNA的基础上，加入了反转录酶而实现扩增检测RNA，反转录和扩增一步完成，省去了传统RT-PCR要先进行的反转录步骤。

公开(公告)号：CN103784969A

公开(公告)日：2014-05-14

申请号：CN201310505297.2

申请日：2013-10-18

Applicant: 东北农业大学

Inventor： 任晓峰 ,  李训良 ,  李鹏冲

IPC: A61K48/00 ,  A61K39/225 ,  A61K39/39 ,  A61P1/00 ,  A61P31/14

Abstract: 本发明涉及一种猪传染性胃肠炎核酸疫苗及其免疫增强剂和制备方法，猪传染性胃肠炎核酸疫苗，如序列表SEQ？ID？No.1所示。对猪传染性胃肠炎核酸疫苗的免疫增强剂，序列如序列表SEQ？ID？No.2所示。本发明采用核酸疫苗的方式进行免疫，制备简单，易于保存以及运输，成本低廉适于规模化生产，保证的疫苗的安全性，稳定性。免疫原为主要的抗原位点TGEV-S1，使得此核酸疫苗更加特异。并且应用pIL12作为免疫增强剂，其提高了此核酸疫苗的CD4，CD8的免疫水平，提高了抗体的效价同时也延长了抗体持续的时间，在各方面都提高TGEV-S1核酸疫苗的免疫效果。

公开(公告)号：CN103301476A

公开(公告)日：2013-09-18

申请号：CN201310145903.4

申请日：2013-04-25

Applicant: 东北农业大学

Inventor： 任晓峰 ,  斯琴高娃 ,  李鹏冲 ,  任玉东

IPC: A61K48/00 ,  C12N15/11 ,  C12N15/66

Abstract: 本发明涉及一种猪流行性腹泻病基因重组疫苗及其构建引物和方法，猪流行性腹泻病基因重组疫苗，其序列如序列表Seq No.1所示。用于构建猪流行性腹泻病基因重组疫苗的引物对，上引物P1：如序列表Seq No.2所示；下引物P2：如序列表Seq No.3所示。构建方法，包括如下步骤：根据现有质粒EasyT-S的核苷酸序列设计引物对；进行常规链式聚合酶反应扩增PEDV S基因；构建重组质粒pVAX1-PEDV S。本试验首次将PEDV S基因插入真核载体中构建质粒并将其作为预防猪流行性腹泻病的核酸疫苗。本发明具有制备简单，省时省力，成本低，稳定性好的优点。

公开(公告)号：CN103394097A

公开(公告)日：2013-11-20

申请号：CN201310242648.5

申请日：2013-06-09

Applicant: 东北农业大学

Inventor： 任晓峰 ,  孟凡丹 ,  李鹏冲 ,  李训良 ,  斯琴高娃

IPC: A61K48/00 ,  A61K39/225 ,  A61K39/215 ,  A61P31/14 ,  C12N15/50

Abstract: 本发明涉及一种猪传染性胃肠炎和流行性腹泻两联疫苗的引物及制备方法，猪传染性胃肠炎和流行性腹泻两联疫苗，其序列如序列表Seq No.1所示。其中，用于扩增猪传染性胃肠炎病毒TGEV S2106的引物对，上引物P1：如序列表SeqNo.2所示，下引物P2：如序列表Seq No.3所示；用于扩增猪流行性腹泻病毒的S基因PEDV S4155的引物对，上引物P3：如序列表SeqNo.4所示，下引物P4：如序列表Seq No.5所示。该核酸疫苗制备方法简单，省时省力，成本低，稳定性好，储存和运输方便，而且没有毒力丢失和毒力返祖的现象。

公开(公告)号：CN102021249B

公开(公告)日：2013-01-23

申请号：CN201010553870.3

申请日：2010-11-22

Applicant: 东北农业大学

Inventor： 任晓峰 ,  李鹏冲 ,  李广兴

IPC: C12Q1/70 ,  C12Q1/68

Abstract: 本发明提供一种反转录-环介导等温扩增检测猪流行性腹泻的方法。根据PEDV N蛋白保守区域基因，设计针对靶基因上6个区域的3对引物，合成两条RT-PCR引物，使用RT-LAMP技术鉴定PED病毒；RT-PCR反应；获得的RNA进行反转录；获得的cDNA用于PCR反应；确保了扩增的特异性，扩增速度快，可在30～60min内获得结果，无需电泳实现肉眼观察扩增效果。使用酶混合物，可在恒温65℃情况下，1h内实现反转录和核酸扩增，RT-LAMP的检测是在LAMP扩增DNA的基础上，加入了反转录酶而实现扩增检测RNA，反转录和扩增一步完成，省去了传统RT-PCR要先进行的反转录步骤。