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公开(公告)号：CN113957164B
公开(公告)日：2023-05-23
申请号：CN202111270244.8
申请日：2021-10-29
Applicant: 上海市质量监督检验技术研究院
IPC: C12Q1/689 , C12Q1/6844 , C12N15/113
Abstract: 本发明公开了一种婴儿配方乳粉中克罗诺杆菌属的CRISPR One Pot检测方法，包括：婴儿配方乳粉中克罗诺杆菌属增菌培养；取增菌液提取DNA；以此DNA为模板加入CRISPR One Pot反应体系，同时进行LAMP扩增和CRISPR反应；动态检测CRISPR反应荧光强度值，根据荧光强度变化曲线判读待检测样品中是否存在克罗诺杆菌属核酸。本发明还公开了一种用于检测婴儿配方乳粉中克罗诺杆菌属的CRISPR One Pot试剂盒及其应用。采用本发明的CRISPR One Pot检测方法，操作更加便捷，实现了现场恒温检测，同时可以提高克罗诺杆菌属检测特异性、灵敏度，缩短检测时间。
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公开(公告)号：CN112795673A
公开(公告)日：2021-05-14
申请号：CN202110181076.9
申请日：2021-02-09
Applicant: 上海市质量监督检验技术研究院
Abstract: 本发明公开了一种食品中克罗诺杆菌属的CRISPR检测方法，包括：步骤一、以待测样品的DNA为模板进行PCR扩增，获得PCR扩增产物；用于PCR扩增的反应体系中含有扩增克罗诺杆菌属成分的特异性引物对；步骤二、将PCR扩增产物加入CRISPR反应体系进行CRISPR反应，CRISPR反应体系包括Cas12b蛋白、Cas12b‑tracrRNA、crRNA和探针；步骤三、检测CRISPR反应荧光强度变化，根据曲线判读待检测样品中是否存在克罗诺杆菌属核酸。本发明还公开了一种用于检测食品中克罗诺杆菌属的CRISPR试剂盒及其应用。采用本发明的CRISPR检测方法，可以提高克罗诺杆菌属检测特异性。
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公开(公告)号：CN117987517A
公开(公告)日：2024-05-07
申请号：CN202410332332.3
申请日：2024-03-22
Applicant: 上海市质量监督检验技术研究院
IPC: C12Q1/6851 , C12N15/11
Abstract: 本发明公开了一种乳制品中耐热蛋白酶基因双重ddPCR定量检测方法，使用针对耐热蛋白酶编码基因AT03_15745基因和CNY62_09470基因作为靶序列设计的引物和探针的组合。本发明的乳制品中耐热蛋白酶AT03_15745基因和CNY62_09470基因的双重ddPCR定量检测方法具有良好的特异性，同其他乳制品常见乳酸菌和食源性致病菌均无交叉反应，适用于乳原料及其加工品中耐热蛋白酶基因的快速定量检测。
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公开(公告)号：CN113957164A
公开(公告)日：2022-01-21
申请号：CN202111270244.8
申请日：2021-10-29
Applicant: 上海市质量监督检验技术研究院
IPC: C12Q1/689 , C12Q1/6844 , C12N15/113
Abstract: 本发明公开了一种婴儿配方乳粉中克罗诺杆菌属的CRISPR One Pot检测方法，包括：婴儿配方乳粉中克罗诺杆菌属增菌培养；取增菌液提取DNA；以此DNA为模板加入CRISPR One Pot反应体系，同时进行LAMP扩增和CRISPR反应；动态检测CRISPR反应荧光强度值，根据荧光强度变化曲线判读待检测样品中是否存在克罗诺杆菌属核酸。本发明还公开了一种用于检测婴儿配方乳粉中克罗诺杆菌属的CRISPR One Pot试剂盒及其应用。采用本发明的CRISPR One Pot检测方法，操作更加便捷，实现了现场恒温检测，同时可以提高克罗诺杆菌属检测特异性、灵敏度，缩短检测时间。
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公开(公告)号：CN118600054A
公开(公告)日：2024-09-06
申请号：CN202410757160.4
申请日：2024-06-13
Applicant: 上海市质量监督检验技术研究院
Abstract: 本发明公开了一种发酵乳中活性益生菌的三重数字PCR定量检测方法，所述活性益生菌为嗜酸乳杆菌、鼠李糖乳杆菌、和动物双歧杆菌，所述三重数字PCR定量检测方法使用的引物和探针序列为：嗜酸乳杆菌的引物和探针序列如SEQ ID NO.1‑3所示；鼠李糖乳杆菌的引物和探针序列如SEQ ID NO.4‑6所示；动物双歧杆菌的引物和探针序列如SEQ ID NO.7‑9所示。本发明的三重数字PCR定量检测方法所使用的引物和探针对于这三种活性益生菌具有很好的特异性，相互之间无交叉反应，并且灵敏度高、重复性好。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN112795673B
公开(公告)日：2022-03-01
申请号：CN202110181076.9
申请日：2021-02-09
Applicant: 上海市质量监督检验技术研究院
Abstract: 本发明公开了一种食品中克罗诺杆菌属的CRISPR检测方法，包括：步骤一、以待测样品的DNA为模板进行PCR扩增，获得PCR扩增产物；用于PCR扩增的反应体系中含有扩增克罗诺杆菌属成分的特异性引物对；步骤二、将PCR扩增产物加入CRISPR反应体系进行CRISPR反应，CRISPR反应体系包括Cas12b蛋白、Cas12b‑tracrRNA、crRNA和探针；步骤三、检测CRISPR反应荧光强度变化，根据曲线判读待检测样品中是否存在克罗诺杆菌属核酸。本发明还公开了一种用于检测食品中克罗诺杆菌属的CRISPR试剂盒及其应用。采用本发明的CRISPR检测方法，可以提高克罗诺杆菌属检测特异性。
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公开(公告)号：CN117248042A
公开(公告)日：2023-12-19
申请号：CN202311140058.1
申请日：2023-09-06
Applicant: 上海市质量监督检验技术研究院
IPC: C12Q1/689 , C12Q1/6851 , C12N15/11 , C12R1/225
Abstract: 本发明公开了一种乳制品中副干酪乳杆菌活菌数字PCR定量检测方法，使用以下引物和探针序列：正向引物cad A‑F：CCGGGTGCATTGGTGATT和CCTGGTGCATTGGTGATT的混合物；反向引物cad A‑R：CACATCCCCGCCTTTGATC；探针cad A‑P：CGCCCCCGTCAGCAATGTTGTC。本发明的乳制品中副干酪乳杆菌ddPCR定量检测方法具有良好的特异性，同其他常见乳酸菌和食源性致病菌均无交叉反应，最低定量限为9拷贝/20μL。采用本发明的引物和探针组用于检测时，样品中菌浓度在105CFU/g～107CFU/g范围内的变异系数CV均小于25％，满足国际上对核酸定量方法的验证要求，具有良好的重复性。
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公开(公告)号：CN117165699A
公开(公告)日：2023-12-05
申请号：CN202311140241.1
申请日：2023-09-06
Applicant: 上海市质量监督检验技术研究院
IPC: C12Q1/689 , C12Q1/6851 , C12N15/11 , C12R1/225
Abstract: 本发明公开了一种乳制品中鼠李糖乳杆菌活菌数字PCR定量检测方法，使用以下引物和探针序列：正向引物LRCDS17F：TCTTGGCAGTGGCGTCACT；反向引物LRCDS17R：AAATCGAAGCAGCTAACACTGAAGT；探针LRCDS17P：TTTCGCCATTCTTTGCATCAATCTGCTT。本发明的乳制品中鼠李糖乳杆菌活菌数字PCR定量检测方法对于鼠李糖乳杆菌具有良好的特异性，与其他常见乳酸菌及食源性致病菌检测均无交叉反应，且ddPCR定量检测结果与GB 4789.35计数结果无显著统计学差异，适用于添加鼠李糖乳杆菌的乳制品中鼠李糖乳杆菌的快速定量检测。
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公开(公告)号：CN116926219A
公开(公告)日：2023-10-24
申请号：CN202311140124.5
申请日：2023-09-06
Applicant: 上海市质量监督检验技术研究院
IPC: C12Q1/689 , C12Q1/6851 , C12N15/11 , C12R1/23
Abstract: 本发明公开了一种乳制品中嗜酸乳杆菌活菌数字PCR定量检测方法，使用以下引物和探针序列：正向引物NCFM P F2：TGCCGCCCTTGTAGTCTTTA；反向引物NCFM P R2：GGCAACTTGATCGCTTTACT；探针NCFM P2：TCGCATTAGTGTGCAACCCATCTGGA。本发明的乳制品中嗜酸乳杆菌ddPCR定量检测方法具有良好的特异性，同其他常见乳酸菌和食源性致病菌均无交叉反应。采用本发明的引物和探针组用于检测时，在整个定量检测动态范围内，针对嗜酸乳杆菌polA基因的测定结果变异系数CV均小于25％，满足国际上对核酸定量方法的验证要求，具有良好的重复性。
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公开(公告)号：CN110791568A
公开(公告)日：2020-02-14
申请号：CN201810875293.6
申请日：2018-08-03
Applicant: 上海市质量监督检验技术研究院
IPC: C12Q1/6888 , C12Q1/6844 , C12N15/11
Abstract: 本发明公开了一种快速检测牛羊肉中鸡肉源性成分的LAMP引物组，所述的LAMP引物组包括序列如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示的外引物Cb-F3和Cb-B3、序列如SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示的扩增交叉引物Cb-FIP和Cb-BIP、以及序列如SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6所示的成环引物Cb-FLP和Cb-BLP。本发明还公开了含有所述LAMP引物组的LAMP检测试剂盒及其应用以及公开了采用LAMP引物组进行恒温扩增的检测方法。采用本发明的LAMP引物组，可以快速准确的检测深加工牛羊肉制品中是否含有鸡肉源性成分，具有良好的应用前景。
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