公开(公告)号：CN118879777A

公开(公告)日：2024-11-01

申请号：CN202410983164.4

申请日：2024-07-22

Applicant: 扬州大学

Inventor： 李拓凡 ,  王泽铭 ,  相汝苹 ,  武佳妍 ,  王胜男 ,  谢泉 ,  万志敏 ,  邵红霞 ,  秦爱建 ,  叶建强

IPC: C12N15/85 ,  C12N5/10 ,  C12N15/54 ,  C12Q1/02

Abstract: 本发明公开了一种基于CRISPR‑Cas9敲除鸡EphrinA2基因的细胞系的构建方法，包括如下步骤：设计特异性靶向鸡源EphrinA2基因的sgRNA；构建含有Cas9蛋白基因和特异性靶向鸡源EphrinA2基因的sgRNA的敲除质粒；对细胞进行转染，利用CRISPR‑Cas9系统达到基因沉默，随后通过亚克隆获得鸡源EphrinA2敲除细胞。本发明获得鸡源EphrinA2基因敲除的细胞模型，不仅方法成本低、效率高、简单易用，并且所构建的敲除鸡EphrinA2基因细胞系细胞活性显著降低，为解析EphrinA2在鸡体内中的功能作用及其在某些病毒入侵宿主中的作用与机制提供帮助。

公开(公告)号：CN118406798A

公开(公告)日：2024-07-30

申请号：CN202310045665.3

申请日：2023-01-30

Applicant: 扬州大学

Inventor： 秦爱建 ,  吴少鹏 ,  丁天 ,  钱琨 ,  邵红霞 ,  叶建强

IPC: C12Q1/70 ,  C12Q1/6851 ,  C12N15/11 ,  C12R1/93

Abstract: 本发明公开了一种鉴别不同血清型马立克氏病病毒的方法及其组合物和试剂盒，该组合物含有SEQ ID NO.1‑6所示引物和SEQ ID NO.7‑10所示探针，试剂盒含有该组合物。本发明试剂盒可对I型和III型马立克氏病毒病毒进行定量检测，特异性强，与其他禽源病毒没有交叉反应；检测灵敏度高，在标准品为1×101～1×108拷贝范围内有极好的线性关系，能够同时准确定量马立克氏病病毒血清I型野毒、血清I型疫苗毒CVI988和血清III型疫苗毒HVT的拷贝数，还可用于免疫814或SC9‑1疫苗的鸡场的马立克氏病野毒感染的快速检测。

公开(公告)号：CN118240780A

公开(公告)日：2024-06-25

申请号：CN202410361186.7

申请日：2024-03-27

Applicant: 扬州大学

Inventor： 汤也 ,  武佳妍 ,  蒋蕙如 ,  聂雨晴 ,  叶建强 ,  谢泉 ,  邵红霞 ,  秦爱建 ,  万志敏 ,  李拓凡

IPC: C12N7/01 ,  C12N15/40 ,  C12N15/85 ,  C12N15/90 ,  C12N15/65 ,  C12N15/113 ,  C12R1/93

Abstract: 本发明涉及一种基于CRISPR‑Cas9技术的表达禽传染性法氏囊病毒新型变异株VP2蛋白的重组血清4型禽腺病毒及其构建方法，禽传染性法氏囊病毒新型变异株的VP2蛋白，其序列如SEQ ID NO.1所示；重组血清4型禽腺病毒，使用禽传染性法氏囊病毒新型变异株VP2基因替换血清4型禽腺病毒Fiber‑2基因，替换的是血清4型禽腺病毒Fiber‑2基因的838位核苷酸到1440位核苷酸，FAdV‑4的Fiber‑2基因序列如SEQ ID NO.2所示。本发明利用目前流行的血清4型禽腺病毒作为载体插入禽传染性法氏囊病毒新型变异株VP2基因，成功获得了表达禽传染性法氏囊病毒新型变异株VP2蛋白的重组血清4型禽腺病毒，为研发禽传染性法氏囊病毒和血清4型禽腺病毒的二联疫苗提供了技术支撑。

公开(公告)号：CN118048323A

公开(公告)日：2024-05-17

申请号：CN202410380705.4

申请日：2024-03-31

Applicant: 扬州大学

Inventor： 汤也 ,  汤婷 ,  万志敏 ,  蒋蕙如 ,  刘时 ,  姜文杰 ,  马也 ,  聂雨晴 ,  谢泉 ,  李拓凡 ,  叶建强

IPC: C12N7/01 ,  C12N7/02 ,  C07K14/11 ,  C12N15/113 ,  C12N9/22 ,  C12N15/861 ,  C12N15/44 ,  C12N15/12 ,  A61K39/145 ,  A61K39/235 ,  A61K39/295 ,  A61P31/16 ,  A61P31/20 ,  C12R1/93

Abstract: 本发明涉及一种表达H10N3禽流感病毒禽流感病毒HA蛋白的重组血清4型禽腺病毒及其构建方法，为基于CRISPR‑Cas9技术表达H10N3禽流感病毒禽流感病毒HA蛋白的重组血清4型禽腺病毒；所述的H10N3禽流感病毒HA蛋白，其序列如SEQ ID NO.1所示；所述的重组血清4型禽腺病毒，其中使用H10N3禽流感病毒HA基因替换血清4型禽腺病毒Fiber‑2基因，替换的是血清4型禽腺病毒Fiber‑2基因的253位核苷酸到1440位核苷酸。本发明构建的表达H10N3禽流感病毒HA蛋白的重组血清4型禽腺病毒，为制备血清4型禽腺病毒和H10N3禽流感病毒二联疫苗奠定了基础。因此，本发明具有一定的市场应用价值。

公开(公告)号：CN117603920A

公开(公告)日：2024-02-27

申请号：CN202311597478.2

申请日：2023-11-28

Applicant: 扬州大学

Inventor： 叶建强 ,  刘时 ,  汤也 ,  谢泉 ,  秦爱建 ,  邵红霞 ,  万志敏 ,  李拓凡

IPC: C12N7/01 ,  C07K14/075 ,  C12N15/85 ,  C12N15/64 ,  C12N15/34 ,  A61K39/235 ,  A61K39/295 ,  A61P31/20 ,  A61P1/16 ,  A61P9/00 ,  C12R1/93

Abstract: 本发明提供了一种表达血清11型禽腺病毒Fiber蛋白的重组血清4型禽腺病毒及其构建方法和应用，属于基因工程技术领域。本发明以FAdV‑4为病毒载体，通过CRISPR/Cas9技术和Cre‑loxP重组系统，构建一株靶向敲除FAdV‑4的Fiber‑2蛋白同时表达血清11型禽腺病毒Fiber蛋白的重组禽腺病毒。该重组禽腺病毒不仅能够稳定表达血清11型禽腺病毒Fiber蛋白，而且通过生长曲线测定较血清4型禽腺病毒复制快，效价高，有望对疫苗的生产减少成本。动物试验还表明灭活的重组禽腺病毒FAdV4‑F11能够有效诱导鸡体内针对血清11型禽腺病毒和FAdV4的中和抗体，为同时免疫防控血清4型禽腺病毒和血清11型禽腺病毒提供技术支撑和疫苗候选。

公开(公告)号：CN117511888A

公开(公告)日：2024-02-06

申请号：CN202311497753.3

申请日：2023-11-12

Applicant: 扬州大学

Inventor： 张俊 ,  叶建强 ,  谢泉 ,  邵红霞 ,  万志敏 ,  李拓凡 ,  秦爱建

IPC: C12N7/01 ,  C12N15/85 ,  C12N15/65 ,  C12N15/34 ,  A61K39/12 ,  A61K39/235 ,  A61K39/295 ,  A61P31/20 ,  C12R1/93

Abstract: 本发明涉及一种基于CRISPR‑Cas9技术的表达鸡传染性贫血病病毒T1P6毒株VP2蛋白的重组血清4型禽腺病毒及其制备方法，鸡传染性贫血病病毒T1P6毒株VP2蛋白，其序列如SEQ ID NO.1所示；重组血清4型禽腺病毒，其中使用鸡传染性贫血病病毒T1P6毒株含VP2基因的全编码区替换FAdV‑4的Fiber‑2基因，替换的是FAdV‑4的Fiber‑2基因的253位核苷酸到1440位核苷酸，FAdV‑4的Fiber‑2基因序列如SEQ ID NO.2所示。通过本发明，在血清4型禽腺病毒中寻找到合适的位置插入外源基因；同时利用CRISPR‑Cas9技术在血清4型禽腺病毒中插入含鸡传染性贫血病病毒VP2基因的全编码以及带有LoxP位点的RFP表达盒，利用RFP蛋白进行病毒的纯化，纯化完成后使用Cre重组酶敲除RFP表达盒，最后获得可以稳定表达鸡传染性贫血病病毒VP2蛋白的重组血清4型禽腺病毒。

公开(公告)号：CN117467620A

公开(公告)日：2024-01-30

申请号：CN202210896040.3

申请日：2022-07-27

Applicant: 扬州大学

Inventor： 秦爱建 ,  刘青 ,  吴少鹏 ,  钱琨 ,  邵红霞 ,  叶建强

IPC: C12N5/20 ,  C07K16/28 ,  A61K39/39 ,  A61K39/17 ,  A61P31/14 ,  A61P37/04

Abstract: 本发明公开了一种抗鸡细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4(CTLA‑4)单克隆抗体及其应用，抗鸡CTLA‑4的单克隆抗体，由保藏编号为CCTCCNO:C2022207的杂交瘤细胞株CTLA‑4‑3D7产生，该单克隆抗体能够特异性地识别pCAGGS‑CTLA‑4‑Flag真核表达系统和Bac‑to‑Bac系统中表达的CTLA‑4蛋白，与鸡的PBMC有较好的结合活性，与CD3+T淋巴细胞的结合率约为16％。本发明抗鸡CTLA‑4单克隆抗体通过干扰CTLA‑4负调节T淋巴细胞活化过程，从而增强机体抗病毒作用和提高疫苗的免疫效果，具有重要的应用价值。

公开(公告)号：CN112760320B

公开(公告)日：2023-11-28

申请号：CN202011394290.4

申请日：2020-12-02

Applicant: 扬州大学

Inventor： 金文杰 ,  朱亭帆 ,  钱金涵 ,  沈子君 ,  秦爱建 ,  邵红霞 ,  钱琨 ,  叶建强 ,  刘金彪 ,  王倩倩 ,  王建 ,  王姣 ,  柴文娴 ,  周小兵 ,  邓建中 ,  郑建高

IPC: C12N15/113 ,  C12N5/10 ,  A61K31/713 ,  A61P31/14

Abstract: 本发明属于基因工程和生物制品研究领域，具体涉及有效抑制猪流行性腹泻病毒(PEDV)复制的外源性人工miRNA，所述外源性人工miRNA是下述1)或2)的双链核苷酸：1)正义链和反义链的序列分别如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示；2)正义链和反义链的序列分别如SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示。与针对PEDV蛋白编码基因的siRNA相比，本发明筛选的针对病毒N基因保守序列的人工miRNA能抑制PEDV复制，不仅可作为抗PEDV的新型生物制剂进行开发，而且可用于抗病猪品系培育。

公开(公告)号：CN116463297A

公开(公告)日：2023-07-21

申请号：CN202310238092.6

申请日：2023-03-09

Applicant: 扬州大学

Inventor： 徐贞琦 ,  叶建强 ,  张俊 ,  谢泉 ,  郭艺文 ,  秦爱建 ,  邵红霞 ,  万志敏 ,  李拓凡

IPC: C12N7/01 ,  C12N15/40 ,  C12N15/85 ,  C12N15/65 ,  C12N15/113 ,  C12N15/90 ,  C12R1/93

Abstract: 本发明涉及一种表达鸡传染性贫血病病毒VP1蛋白的重组血清4型禽腺病毒及其制备方法,属于基因工程技术领域。本发明的关键技术是在血清4型禽腺病毒中寻找到合适的位置插入外源基因；同时利用CRISPR‑Cas9技术在血清4型禽腺病毒中插入鸡传染性贫血病病毒VP1基因以及带有LoxP位点的RFP表达盒，利用RFP蛋白进行病毒的纯化，纯化完成后使用Cre重组酶敲除RFP表达盒，最后获得可以稳定表达鸡传染性贫血病病毒VP1蛋白的重组血清4型禽腺病毒。本发明构建的表达鸡传染性贫血病病毒VP1蛋白的重组血清4型禽腺病毒，为血清4型禽腺病毒和鸡传染性贫血病病毒的联防联控提供了二联候选疫苗。因此，本发明具有良好的市场应用价值。

公开(公告)号：CN113061586B

公开(公告)日：2023-07-21

申请号：CN202110332476.5

申请日：2021-03-29

Applicant: 扬州大学

Inventor： 叶建强 ,  路浩 ,  谢泉 ,  连明君 ,  王伟康 ,  李拓凡 ,  秦爱建 ,  邵红霞

IPC: C12N7/01 ,  C12N15/861 ,  C12N15/113 ,  C12N15/34 ,  C12R1/93

Abstract: 本发明涉及表达血清8型禽腺病毒纤突蛋白重组血清4型禽腺病毒及其制备方法，发明的原理和最核心的关键技术是利用sgRNA，替换EGFP后进行病毒纯化，获得可以稳定扩增血清8型禽腺病的纤突蛋白的重组禽腺病毒。利用当下流行的血清4型禽腺病毒作为载体插入的血清8型禽腺病毒纤突蛋白基因F，成功获得了表达血清8型禽腺病毒纤突蛋白的重组FAdV‑4，在体外实验结果显示，FAdV4‑F1‑F‑F2重组病毒与FAdV‑4野毒的复制能力几乎相同，可作为防控FAdV‑4和FAdV‑8的灭活重组多价苗。