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公开(公告)号：CN106084019B
公开(公告)日：2020-04-03
申请号：CN201610277276.3
申请日：2016-05-01
Applicant: 上海大学
IPC: C07K14/415 , C07K1/14
Abstract: 本发明涉及一种玉米胚乳蛋白体的分离方法。步骤如下：将授粉20‑25天的新鲜玉米籽粒液氮研磨至粉末，重悬于溶液A(10 mM Tris‑HCl pH 8.5,10 mM KCl,5 mM MgCl2,7.2%sucrose,add 1 mM DTT,1mM PMSF and罗氏混合蛋白酶抑制剂)，300 g离心30分钟去除细胞碎片，上清经2轮粗级不连续蔗糖密度梯度(1.0 M/L→1.5 M/L→2.0 M/L)离心，取1.5 M→2.0 M蔗糖界面的组分2倍溶液B(10 mM Tris‑HCl pH 8.5,10 mM KCl)稀释后，经2轮细级不连续蔗糖密度梯度(40%w/w→45%→50%→55%→60%)离心，取50%‑55%之间的组分2倍溶液B稀释后，经30‑60%连续密度梯度离心，收集第14层组分10倍溶液B稀释，13000 rpm离心15 min去除蔗糖后，得到高纯活性蛋白体。本方法提取纯度极高且保持生物活性，为利用蛋白体生物反应器生产活性物质提供了重要技术手段。
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公开(公告)号：CN105624323B
公开(公告)日：2019-04-16
申请号：CN201610189558.8
申请日：2016-03-30
Applicant: 上海大学
IPC: C12Q1/6895 , C12N15/11
Abstract: 本发明涉及一种用于检测玉米shrunken4基因的特异性引物组及其应用。该特异性引物组中扩增该shrunken4基因左侧DNA片段的一对特异性引物Indel592的碱基序列为：正向引物从5′端至3′端为：GGAAAGCGAAGCAGGTAA；反向引物从5′端至3′端为：GTGGCTCAATCTGGAAACAT；扩增该shrunken4基因右侧DNA片段的一对特异性引物Indel575的碱基序列为：正向引物从5′端至3′端为：CTGGGACTTCCTATGCCT；反向引物从5′端至3′端为：ACGGGAGATTTTGATTGAG。利用这两个分子标记能对玉米任何时期和任何组织的DNA进行基因型鉴定，检测杂交育种子代各单株中shrunken4基因的存在与否以及杂合或纯合状态。这种检测方法的准确性高，操作简单，为利用shrunken4基因的DNA分子标记辅助育种提供重要的技术手段。
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公开(公告)号：CN107298701A
公开(公告)日：2017-10-27
申请号：CN201710251008.9
申请日：2017-04-18
Applicant: 上海大学
IPC: C07K14/415 , C12N15/29 , C12N15/82 , A01H5/00
Abstract: 本发明涉及一个玉米籽粒转录因子在调控醇溶蛋白方面的应用。该基因为SEQ ID NO：1所示的碱基序列。该序列编码的蛋白ZmbZIP22可直接结合并激活27kDa γ-醇溶蛋白启动子。利用CRISPR-Cas9技术将ZmbZIP22的基因片段SEQ ID NO：2作为guide RNA进行转化玉米幼胚，并获得基因缺失突变体的植株。相对野生型籽粒而言，转基因突变体玉米籽粒出现不规则且较薄的蛋白体外壳，成熟籽粒的醇溶蛋白含量显著下降，常规玉米缺乏的赖氨酸等必需氨基酸含量显著上升，从而提高了玉米的营养品质。
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公开(公告)号：CN105907876A
公开(公告)日：2016-08-31
申请号：CN201610412552.2
申请日：2016-06-13
Applicant: 上海大学
Abstract: 本发明涉及一种用于检测玉米opaque10基因的特异性引物组及其应用。该特异性引物组中扩增该opaque10基因左侧DNA片段的一对特异性引物SSR401的碱基序列为：正向引物从5′端至3′端为：TCACGCCACTTCCCTCATC；反向引物从5′端至3′端为：GCACCACCAGCGGTCAAT；扩增该opaque10基因右侧DNA片段的一对特异性引物SSR456的碱基序列为：正向引物从5′端至3′端为：TAGACGTAAGTTGTTTAAGG；反向引物从5′端至3′端为：GTCGCTTGACCTGATTAC。利用这两对特异性引物组能对玉米任何时期和任何组织的DNA进行基因型鉴定，检测杂交育种子代各单株中opaque10基因的存在与否以及杂合或纯合状态。这种检测方法的准确性高，操作简单，为利用opaque10基因的DNA分子标记辅助育种提供重要的技术手段。
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公开(公告)号：CN105624323A
公开(公告)日：2016-06-01
申请号：CN201610189558.8
申请日：2016-03-30
Applicant: 上海大学
CPC classification number: C12Q1/6895
Abstract: 本发明涉及一种用于检测玉米shrunken4基因的特异性引物组及其应用。该特异性引物组中扩增该shrunken4基因左侧DNA片段的一对特异性引物Indel592 的碱基序列为：正向引物从5′端至3′端为：GGAAAGCGAAGCAGGTAA；反向引物从5′端至3′端为：GTGGCTCAATCTGGAAACAT； 扩增该shrunken4基因右侧DNA片段的一对特异性引物Indel575 的碱基序列为：正向引物从5′端至3′端为：CTGGGACTTCCTATGCCT；反向引物从5′端至3′端为：ACGGGAGATTTTGATTGAG。利用这两个分子标记能对玉米任何时期和任何组织的DNA进行基因型鉴定，检测杂交育种子代各单株中shrunken4基因的存在与否以及杂合或纯合状态。这种检测方法的准确性高，操作简单，为利用shrunken4基因的DNA分子标记辅助育种提供重要的技术手段。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN103966240B
公开(公告)日：2016-04-27
申请号：CN201410130424.X
申请日：2014-04-02
Applicant: 上海大学
Abstract: 本发明涉及一种不动杆菌谷氨酰胺合成酶基因、其编码蛋白及其克隆方法。本发明的基因来源于不动杆菌属细菌，为SEQID NO1所示的碱基序列。该基因编码谷氨酰胺合成酶，能够在大肠杆菌中发挥谷氨酰胺合成酶的功能，能恢复大肠杆菌突变体合成谷氨酰胺的能力，同时也预示了它在其他生物氮高效利用方面的应用价值。
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公开(公告)号：CN105316339A
公开(公告)日：2016-02-10
申请号：CN201510826721.2
申请日：2015-11-25
Applicant: 上海大学
Abstract: 本发明涉及一种玉米胚乳特异表达启动子NRP1启动子、其克隆方法及其应用。本发明首次分离到一个可在玉米胚乳中特异性表达的启动子——NAM related protein 1（NRP1）。该启动子具有SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列，或该序列经取代、缺失和／或添加一个或几个核苷酸且具有同等功能的由其衍生的核苷酸序列。本发明从克隆玉米胚乳特异表达启动子NRP1启动子入手，通过对NRP1启动子的功能分析，从实验水平验证了该启动子适用于启动目标基因在玉米胚乳中特异性表达，而在其他组织中低表达或不表达。为植物基因工程表达载体构建提供了合适的调控元件，为实验室其他课题的研究进行提供了新的材料。
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公开(公告)号：CN103695550B
公开(公告)日：2015-03-25
申请号：CN201310718089.0
申请日：2013-12-24
Applicant: 上海大学
Abstract: 本发明涉及一种玉米Opaque1基因的分子标记及其应用。该分子标记是通过PCR扩增特异性引物，得到的一种共显性分子标记MYO-PD，所述的特异性引物为SEQIDNO.1～SEQIDNO.2所示的碱基序列。利用这个与o1基因完全连锁的分子标记能对玉米任何时期和任何组织的DNA进行基因型鉴定，检测杂交育种子代各单株中o1基因的存在与否以及杂合或纯合状态。同时，利用这个分子标记能区分突变体与10种国内主要育种亲本，能够在任何育种背景群体中准确检测到o1基因的存在，且错选率为0。这种检测方法的准确性高，操作简单，为利用o1基因的DNA分子标记辅助育种提供重要的技术手段。
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公开(公告)号：CN103952408A
公开(公告)日：2014-07-30
申请号：CN201410147180.6
申请日：2014-04-14
Applicant: 上海大学
IPC: C12N15/113 , C12N15/63 , C12N5/10 , C12N15/10
Abstract: 本发明涉及玉米胚乳特异表达启动子14kD zein启动子及其克隆方法。该启动子序列为下列之一：i）SEQIDNO.1所示的核苷酸序列；ii）SEQIDNO.1所示的核苷酸序列经取代、缺失和/或添加一个或几个核苷酸且具有同等功能的由i）衍生的核苷酸序列。本发明从克隆玉米胚乳特异表达启动子14kD zein启动子入手，通过对14kD zein启动子的功能分析，从实验水平验证了该启动子适用于启动目标基因在玉米胚乳中特异性表达，而在其他组织中低表达或不表达。为植物基因工程表达载体构建提供了合适的调控元件，为实验室其他课题的研究进行提供了新的材料。
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公开(公告)号：CN103194462A
公开(公告)日：2013-07-10
申请号：CN201310127835.9
申请日：2013-04-15
Applicant: 上海大学
Abstract: 本发明涉及一种枯草芽孢杆菌谷氨酰胺合成酶基因、其编码蛋白及其克隆方法。本发明的基因来源于枯草芽孢杆菌，为SEQIDNO1所示的碱基序列。该基因编码谷氨酰胺合成酶，能够显著提高模式生物大肠杆菌合成谷氨酰胺的能力。这预示了所公开的全长基因及氨基酸序列，在提高生物体的氮利用效率和增加生物体氮元素含量的基因工程方面具有应用价值。
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