公开(公告)号：CN106084019B

公开(公告)日：2020-04-03

申请号：CN201610277276.3

申请日：2016-05-01

Applicant: 上海大学

Inventor： 王桂凤 ,  王佳佳 ,  孙晓亮 ,  韩亮 ,  王刚 ,  宋任涛

IPC: C07K14/415 ,  C07K1/14

Abstract: 本发明涉及一种玉米胚乳蛋白体的分离方法。步骤如下：将授粉20‑25天的新鲜玉米籽粒液氮研磨至粉末，重悬于溶液A(10 mM Tris‑HCl pH 8.5,10 mM KCl,5 mM MgCl2,7.2%sucrose,add 1 mM DTT,1mM PMSF and罗氏混合蛋白酶抑制剂)，300 g离心30分钟去除细胞碎片，上清经2轮粗级不连续蔗糖密度梯度(1.0 M/L→1.5 M/L→2.0 M/L)离心，取1.5 M→2.0 M蔗糖界面的组分2倍溶液B(10 mM Tris‑HCl pH 8.5,10 mM KCl)稀释后，经2轮细级不连续蔗糖密度梯度(40%w/w→45%→50%→55%→60%)离心，取50%‑55%之间的组分2倍溶液B稀释后，经30‑60%连续密度梯度离心，收集第14层组分10倍溶液B稀释，13000 rpm离心15 min去除蔗糖后，得到高纯活性蛋白体。本方法提取纯度极高且保持生物活性，为利用蛋白体生物反应器生产活性物质提供了重要技术手段。

公开(公告)号：CN108034743A

公开(公告)日：2018-05-15

申请号：CN201711280730.1

申请日：2017-12-06

Applicant: 上海大学

Inventor： 王桂凤 ,  帅碧莲 ,  倪嘉成 ,  马雪霞 ,  宋建东 ,  韩亮 ,  王刚

IPC: C12Q1/6895 ,  C12N15/11

CPC classification number: C12Q1/6895 ,  C12Q2600/13 ,  C12Q2600/156

Abstract: 本发明涉及一种用于检测玉米Dek6基因的特异性引物及其应用。该特异性引物扩增dek6基因DNA片段的碱基序列为：正向引物从5′端至3′端为：TGGCATACATCCCACTACAGAGCA；反向引物从5′端至3′端为：ATGATCTGAGCACAACGATCTCCGA。利用这个与Dek6基因完全连锁的分子标记能对玉米任何时期和任何组织的DNA进行基因型鉴定，检测杂交育种子代各单株中Dek6基因的存在与否以及杂合或纯合状态。这种检测方法的准确性高，操作简单，为利用Dek6基因的DNA分子标记辅助育种提供重要的技术手段。

公开(公告)号：CN104862398A

公开(公告)日：2015-08-26

申请号：CN201510251306.9

申请日：2015-05-18

Applicant: 上海大学

Inventor： 王刚 ,  秦洪利 ,  王超 ,  徐楠 ,  王桂凤 ,  韩亮 ,  宋任涛

IPC: C12Q1/68 ,  C12N15/11

CPC classification number: C12Q1/6895 ,  C12Q2600/13 ,  C12Q2600/156

Abstract: 本发明涉及一种用于检测玉米Proline1基因的引物组及其应用。该引物组的第一对碱基序列为：正向引物从5′端至3′端为：CGGTGTCACACACTCCGCATAC；反向引物从5′端至3′端为：GAAGGATAGGGCGTTCTTCGAT；该引物组的第二对碱基序列为：正向引物从5′端至3′端为：GGCCGAGGAGGGATACATCA；反向引物从5′端至3′端为：CAGCCCTCAGGGAAGCGATA。利用这两个分子标记能对玉米任何时期和任何组织的DNA进行基因型鉴定，检测杂交育种子代各单株中Proline1基因的存在与否以及杂合或纯合状态。这种检测方法的准确性高，操作简单，为利用Proline1基因的DNA分子标记辅助育种提供重要的技术手段。

公开(公告)号：CN106084019A

公开(公告)日：2016-11-09

申请号：CN201610277276.3

申请日：2016-05-01

Applicant: 上海大学

Inventor： 王桂凤 ,  王佳佳 ,  孙晓亮 ,  韩亮 ,  王刚 ,  宋任涛

IPC: C07K14/415 ,  C07K1/14

Abstract: 本发明涉及一种玉米胚乳蛋白体的分离方法。步骤如下：将授粉20‑25天的新鲜玉米籽粒液氮研磨至粉末，重悬于溶液A(10 mM Tris‑HCl pH 8.5,10 mM KCl,5 mM MgCl2,7.2% sucrose,add 1 mM DTT,1mM PMSF and 罗氏混合蛋白酶抑制剂)，300 g离心30分钟去除细胞碎片，上清经2轮粗级不连续蔗糖密度梯度(1.0 M/L→1.5 M/L→2.0 M/L)离心，取1.5 M→2.0 M蔗糖界面的组分2倍溶液B(10 mM Tris‑HCl pH 8.5,10 mM KCl)稀释后，经2轮细级不连续蔗糖密度梯度(40% w/w → 45% → 50% → 55% → 60%)离心，取50%‑55%之间的组分2倍溶液B稀释后，经30‑60%连续密度梯度离心，收集第14层组分10倍溶液B稀释，13 000 rpm 离心15 min去除蔗糖后，得到高纯活性蛋白体。本方法提取纯度极高且保持生物活性，为利用蛋白体生物反应器生产活性物质提供了重要技术手段。

公开(公告)号：CN108034743B

公开(公告)日：2021-01-12

申请号：CN201711280730.1

申请日：2017-12-06

Applicant: 上海大学

Inventor： 王桂凤 ,  帅碧莲 ,  倪嘉成 ,  马雪霞 ,  宋建东 ,  韩亮 ,  王刚

IPC: C12Q1/6895 ,  C12N15/11

Abstract: 本发明涉及一种用于检测玉米Dek6基因的特异性引物及其应用。该特异性引物扩增dek6基因DNA片段的碱基序列为：正向引物从5′端至3′端为：TGGCATACATCCCACTACAGAGCA；反向引物从5′端至3′端为：ATGATCTGAGCACAACGATCTCCGA。利用这个与Dek6基因完全连锁的分子标记能对玉米任何时期和任何组织的DNA进行基因型鉴定，检测杂交育种子代各单株中Dek6基因的存在与否以及杂合或纯合状态。这种检测方法的准确性高，操作简单，为利用Dek6基因的DNA分子标记辅助育种提供重要的技术手段。