快速克隆细菌谷氨酰胺合成酶基因的方法

    公开(公告)号:CN102787127A

    公开(公告)日:2012-11-21

    申请号:CN201210184123.6

    申请日:2012-09-07

    Applicant: 上海大学

    Abstract: 本发明涉及一种快速克隆细菌谷氨酰胺合成酶(GS)基因的方法。该方法的主要内容包括:(1)针对细菌类群的GS基因序列设计嵌套式兼并引物;(2)使用嵌套引物中的外引物和内引物下游引物对土壤DNA进行第一轮扩增,扩增产物纯化后作为模版,用内引物上下游引物进行第二轮PCR扩增;(3)对第二轮扩增后的特异片段进行纯化,连接pMD18-T载体,转化大肠杆菌Top10,挑取正确的阳性克隆;(4)对阳性克隆的插入片段进行测序和序列分析,确定基因的正确性;(5)用大肠杆菌GS缺陷型ET6017的功能互补实验来验证所克隆基因的功能。本发明所描述的基因克隆方法具有很高的成功率和较好的准确性。

    玉米转录因子ZmbZIP22及其应用

    公开(公告)号:CN107298701B

    公开(公告)日:2020-10-30

    申请号:CN201710251008.9

    申请日:2017-04-18

    Applicant: 上海大学

    Abstract: 本发明涉及一个玉米籽粒转录因子在调控醇溶蛋白方面的应用。该基因为SEQ ID NO:1所示的碱基序列。该序列编码的蛋白ZmbZIP22可直接结合并激活27kDa γ‑醇溶蛋白启动子。利用CRISPR‑Cas9技术将ZmbZIP22的基因片段SEQ ID NO:2作为guide RNA进行转化玉米幼胚,并获得基因缺失突变体的植株。相对野生型籽粒而言,转基因突变体玉米籽粒出现不规则且较薄的蛋白体外壳,成熟籽粒的醇溶蛋白含量显著下降,常规玉米缺乏的赖氨酸等必需氨基酸含量显著上升,从而提高了玉米的营养品质。

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