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公开(公告)号：CN109207397A
公开(公告)日：2019-01-15
申请号：CN201811088534.9
申请日：2018-09-18
Applicant: 山东省滨州畜牧兽医研究院
Abstract: 本发明属于农业微生物技术领域，尤其涉及一种副猪嗜血杆菌培养基及高密度发酵培养方法。本发明得到利于副猪嗜血杆菌培养的培养基组分：葡萄糖2.5 g/L，蛋白胨10.0 g/L，酵母粉10.0 g/L，K2HPO4 2.5 g/L，NaCl 5.0 g/L，三甲基甘氨酸1.5 g/L，氯化胆碱1.0 mL/L，VB1 30.0 mg/L，VH 10.0 mg/L，NAD 50 mg/L，3.0%牛血清，余量是水；本发明还提供了基于上述培养基组分的副猪嗜血杆菌发酵培养方法，在不含辅酶培养基中以牛血清作为限制性生长因子，建立电容值与牛血清消耗的线性关系，则可实时调节牛血清补加速率并维持在一定浓度。采用该方法，副猪嗜血杆菌活菌数目均达到x1010 CFU/mL以上，实现了其高密度发酵，且该方法可应用于多种情形副猪嗜血杆菌的规模化生产。
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公开(公告)号：CN107129934A
公开(公告)日：2017-09-05
申请号：CN201710357560.6
申请日：2017-05-19
Applicant: 山东省滨州畜牧兽医研究院
Abstract: 本发明属于微生物领域，具体涉及快速筛选好氧微生物最适pH调节剂以及确定上述的好氧微生物最适生长pH值的方法。本发明的方法包括下述的步骤：（1）选择好氧微生物培养所适宜的碱性及酸性pH调节剂；（2）验证最适pH调节剂和确定好氧微生物的生长稳定期；（3）筛选最适生长pH值；（4）验证该微生物的最适生长pH值。通过本发明的方法筛选及确定，得到了好氧微生物最适pH调节剂和以及确定了好氧微生物生长最适的pH值，采用本发明的方法具有操作简单、快速，且准确度高的特点。
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公开(公告)号：CN106868212A
公开(公告)日：2017-06-20
申请号：CN201710159937.7
申请日：2017-03-17
Applicant: 山东省滨州畜牧兽医研究院
Abstract: 本发明公开了一种Ⅰ亚群禽腺病毒通用型PCR检测引物及检测方法，属于禽类病毒检测技术领域。本发明Ⅰ亚群禽腺病毒通用型PCR检测引物由上游引物和下游引物组成；所述上游引物如SEQ ID NO.1所示，所述下游引物如SEQ ID NO.2所示。Ⅰ亚群禽腺病毒检测方法，包括使用所述的Ⅰ亚群禽腺病毒通用型PCR检测引物进行PCR扩增反应。所述PCR扩增反应产物出现494bp片段时为阳性，否则为阴性。本发明方法为能够检测Ｉ亚群禽腺病毒A、B、C、D、E等5个种共12个血清型的通用方法，具有通用性好、特异性强、敏感性高、操作方便、快速准确等特点。
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公开(公告)号：CN106754981A
公开(公告)日：2017-05-31
申请号：CN201710049003.8
申请日：2017-01-23
Applicant: 山东省滨州畜牧兽医研究院
Abstract: 本发明涉及一种利用大肠杆菌系统可溶性表达小鹅瘟VP2蛋白制备小鹅瘟病毒样颗粒方法，一种可溶性表达小鹅瘟病毒VP2蛋白的方法，对鹅细小病毒VP2基因进行密码子优化，定点突变包括将密码子AGA突变为CGC和GGA突变为GGT,并克隆到pET‑Sumo载体上，构建重组表达载体pET‑Sumo‑VP2，并将pET‑Sumo‑VP2转化至原核表达菌，通过IPTG在37℃下诱导，获得可溶性重组VP2重组蛋白；将重组蛋白用ULP酶酶切后通过Ni柱纯化得到纯化的VP2蛋白。电镜结果显示酶切后的VP2蛋白可形成小鹅瘟病毒样颗粒，并且纯化后的VP2蛋白具有良好的反应原性，可用于小鹅瘟病毒基因工程亚单位疫苗的制备。
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公开(公告)号：CN104017856A
公开(公告)日：2014-09-03
申请号：CN201410233471.7
申请日：2014-05-29
Applicant: 山东省滨州畜牧兽医研究院
Abstract: 本发明属于兽医生物学技术领域，涉及一种猪肺炎支原体选择性分离培养基及其制备方法。本发明提供的一种猪肺炎支原体选择性分离培养基，其主要成分为水解乳蛋白，酵母浸粉，MEM培养基，Hank’s液，0.1％酚红溶液，健康马血清，青霉素和去离子水，特异性生长抑制血清。本发明的猪肺炎支原体选择性培养基能够用于猪肺炎支原体的快速分离鉴定，配制方法简单可行，试验结果可靠，分离时间缩短为103h～122h，时间缩短17%～23%，分离成功率高达75%以上，是现有培养基分离成功率的10倍以上。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN116239656B
公开(公告)日：2024-07-19
申请号：CN202310091251.4
申请日：2023-02-09
Applicant: 山东省滨州畜牧兽医研究院
Abstract: 本发明涉及发酵工程技术领域，具体涉及一种高效表达禽法氏囊病毒VP2蛋白的方法。方法为将表达菌株的种子液接种至发酵罐中，于32‑37℃下开始发酵，待发酵液OD600值≥3时，加入培养保护液，提高发酵温度至40‑42℃，开始升温诱导，直至发酵结束；培养保护液包括100g/L海藻糖和100g/L谷氨酸钠。本发明在升温诱导时添加培养保护液，可高效表达可溶性VP2蛋白，蛋白效价可得到3‑4倍的提高，且培养基成本低廉，发酵工艺简单易行，为工业化生产VP2疫苗奠定了坚实的基础。
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公开(公告)号：CN114934020A
公开(公告)日：2022-08-23
申请号：CN202210113778.8
申请日：2022-01-30
Applicant: 山东省滨州畜牧兽医研究院
IPC: C12N5/10 , C12N15/85 , C12N15/34 , C12N7/00 , C12Q1/02 , A61K39/12 , A61K39/245 , A61K39/215 , A61P31/20 , A61P31/22 , A61P31/14 , A01N1/02 , C12R1/91 , C12R1/93
Abstract: 本发明公开了猪视网膜上皮细胞系(WWX04‑PR)及其建立方法和应用，该细胞系于2020年7月27日，本发明猪视网膜上皮细胞易于培养，生长速度较快，能稳定传代，细胞活率高、纯度高且能很好保藏；通过无菌获取猪眼球组织分离获得高活力的原代猪视网膜细胞，然后导入含有猪腺病毒E1基因的真核表达质粒pCI‑neo‑E1，筛选和扩大培养，获得一株可稳定传代猪视网膜上皮细胞系；得到的细胞系能够用于生产猪圆环病毒、猪伪狂犬病毒、猪流行性腹泻病毒等疫苗抗原，还可用于临床野毒分离鉴定。该细胞系可作为人类视网膜相关疾病研究的细胞模型，也是研究中枢神经系统发育和功能的经典模型。
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公开(公告)号：CN111849990B
公开(公告)日：2022-06-21
申请号：CN202010770696.1
申请日：2020-08-03
Applicant: 山东省滨州畜牧兽医研究院 , 山东绿都生物科技有限公司
IPC: C12N15/113 , C12N15/63 , C12N15/90 , C12N15/39 , C12N7/01 , C07K14/065 , C12Q1/70 , C12Q1/686 , G01N33/569 , A61K39/275 , A61P31/20
Abstract: 本发明公开了一种gRNA，所述gRNA序列如SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：2所示，本发明还公开了重组质粒、ORF016基因缺失型山羊痘病毒株及其制备方法和应用。本发明首次通过基因敲除方法获得了ORF016基因缺失型山羊痘病毒株，该方法是首次将CRISPR技术在山羊痘病毒中进行应用，同时本发明采用了反向转染方法对ORF016基因进行了敲除，该方法的敲除效率达到了31.6%，远远高于现有技术中的敲除效率。同时，本发明所获得的SDLVDUORF016毒株是一株仅缺失ORF016的毒株，基因的缺失对其生长特性没有影响，该毒株可用于山羊痘疫苗、检测试剂、山羊痘病毒鉴定等用途。
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公开(公告)号：CN114539379A
公开(公告)日：2022-05-27
申请号：CN202210214020.3
申请日：2022-03-03
Applicant: 山东省滨州畜牧兽医研究院 , 山东绿都生物科技有限公司
IPC: C07K14/465 , C12N15/12 , C12N15/85 , C12N5/10 , C12N15/113 , A61K39/12
Abstract: 本发明公开了鸡AQP1突变型基因，突变型蛋白、该基因突变细胞系及其在细胞悬浮培养中的应用。本发明还公开了AQP1突变型细胞系的制备方法。本发明通过敲除了鸡胚成纤维细胞系DF‑1细胞AQP1蛋白第一个跨膜区后间隔序列，获得的AQP1突变型细胞系更易于悬浮驯化，且遗传性状稳定，不具有致瘤性，增殖病毒能力不受影响，应用到家禽病毒疫苗生产中，替代固相培养的疫苗生产工艺，可大幅度提高生产效率。
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公开(公告)号：CN111848772B
公开(公告)日：2022-03-18
申请号：CN202010770180.7
申请日：2020-08-03
Applicant: 山东绿都生物科技有限公司 , 山东省滨州畜牧兽医研究院
Abstract: 本发明公开了SAMD9突变型蛋白，所述SAMD9突变型蛋白的氨基酸序列缺少第61~448位氨基酸。本发明还公开了编码该蛋白的基因、细胞系及其在制备山羊痘病毒疫苗中的应用。本发明还公开了SAMD9突变型蛋白的Vero细胞系的制备方法。本发明通过基因编辑技术敲除了Vero细胞SAMD9基因的AlbA_2结构域及其两侧序列，以降低Vero细胞的病毒抑制功能，获得的SAMD9突变型蛋白Vero细胞对山羊痘病毒具有更高的易感性，且遗传性状稳定，能够应用到山羊痘病毒等病毒疫苗生产中，替代原代细胞疫苗生产工艺，大幅度降低生产成本，并提高疫苗的安全性。
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