一种表达IBDV VP2蛋白的重组腺病毒及制备与应用

    公开(公告)号:CN113088539A

    公开(公告)日:2021-07-09

    申请号:CN202110217088.2

    申请日:2021-02-26

    Abstract: 本发明属于生物工程技术领域,公开了一种表达IBDV VP2蛋白的重组腺病毒及制备与应用。通过PCR扩增IBDV的VP2基因片段与穿梭质粒pAdtrack‑GOI的双酶切产物进行同源重组得到穿梭质粒pAdTrack‑GOI‑VP2,将穿梭质粒线性化后与携带了腺病毒骨架质粒pAdEasy‑1的BJ5183感受态细胞进行菌内同源重组得到重组腺病毒载体pAd‑VP2;最后将pAd‑VP2线性化后转染HEK293A细胞得到重组腺病毒rAd‑VP2。本发明重组腺病毒rAd‑VP2纯化后滴度可达6.72×109GFU/mL,接种动物后能够有效刺激特异性抗体的产生,为IBDV亚单位疫苗的研发奠定一定的基础。

    一株经过密码子替换的基因Ⅶ型新城疫病毒的拯救方法

    公开(公告)号:CN111926025A

    公开(公告)日:2020-11-13

    申请号:CN202010346610.2

    申请日:2020-04-27

    Abstract: 本发明涉及反向遗传操作技术领域,公开了一株经过密码子替换的基因Ⅶ型新城疫病毒的拯救方法。分别将新城疫病毒的NP、P和L基因以及表达T7 RNA聚合酶的DE3基因克隆进pXJ40载体,获得质粒pXJ40-NP、pXJ40-P、pXJ40-L和pXJ40-DE3;将新城疫病毒的全基因组cDNA克隆进pBR322质粒中得到pBR322-DHN3;将NP基因编码区部分密码子统一替换成使用频率最高的密码子,替换到pBR322-DHN3质粒上,形成新质粒pBR322-mNPDHN3;采用上述5种质粒共转染BHK-21细胞,得到拯救病毒rDHN3-mNP。本发明方法更利于病毒的拯救和病毒致病机制的研究。

    一种质粒粗提的简易方法
    54.
    发明授权

    公开(公告)号:CN107475245B

    公开(公告)日:2020-07-10

    申请号:CN201710786499.7

    申请日:2017-09-04

    Abstract: 本发明提供了一种简易的质粒粗提的方法,具体为:在含有质粒的基因工程菌体中加入PBS溶液重悬;加入20~100ug/ml的RNA酶和1~10mg/ml的溶菌酶;搅拌混匀,搅拌速度为100~5000rpm/min,搅拌的时间为10~50min;反复冻融3~6次,每次冻融后,进行搅拌,搅拌速度和时间同上;3000~10000rpm/min离心20~60min,取上清液;向上清中加入乙醇,乙醇最终浓度为60~80%;混匀后在2~8℃放置10~60min;8000~12000rpm/min离心15~90min,收集沉淀;加入TE溶液,电泳检测。相对于传统方法,本发明提取质粒的方法能够规模化,提取量不受限制,适合产业化;提取仅仅需要反复冻融菌体、乙醇沉淀两个主要步骤,避免了有毒有害试剂的使用;能够提取菌体中80%以上的质粒。

    一种马立克氏病毒的悬浮培养方法

    公开(公告)号:CN107058243A

    公开(公告)日:2017-08-18

    申请号:CN201710179331.X

    申请日:2017-03-23

    CPC classification number: C12N7/00 C12N2710/16351

    Abstract: 本发明公开了一种马立克氏病毒的悬浮培养方法,包括步骤:1)鸡胚源DF‑1细胞系的传代与培养;2)细胞毒种的繁殖:用稀释液将马立克氏病毒种稀释,将病毒和DF‑1细胞一起接入含细胞培养液的培养瓶中培养,收获病毒作为毒种;3)制苗用病毒的吸附培养:将毒种稀释为病毒液,和新的鸡胚源DF‑1细胞一起接入含有微载体和悬浮培养液的培养瓶中,进行悬浮吸附培养;4)病毒的增殖培养及收获:弃去悬浮培养液,加入病毒增殖培养液进行悬浮增殖培养;当接入的细胞病变率达80%以上时,收获病毒液并保存;该方法用微载体结合悬浮的方式对马立克氏病毒进行培养,克服了传统疫苗生产受制于鸡胚的供应的缺点,避免了感染外源病毒的风险。

Patent Agency Ranking