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公开(公告)号：CN101475915B
公开(公告)日：2011-06-08
申请号：CN200910045394.1
申请日：2009-01-15
Applicant: 复旦大学
Abstract: 本发明属于遗传工程和发酵工程领域。本发明将碱性甘露聚糖酶基因的突变体MAN330克隆到分泌表达载体pUKDS上，并转化鹰嘴豆胞克鲁维酵母Y179U，形成分泌表达碱性甘露聚糖酶的鹰嘴豆胞克鲁维酵母基因工程菌株。该酵母基因工程菌株在80世代内保持稳定。发酵时，取上述酵母基因工程菌株在常温常压下发酵，然后去除菌体即可。用本发明提供的方法制备获得的碱性甘露聚糖酶，活性可达1000U/ml以上，发酵产量高，发酵周期短，发酵成本低，适用于推广至工业化生产。
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公开(公告)号：CN102041252A
公开(公告)日：2011-05-04
申请号：CN200910197704.1
申请日：2009-10-26
Applicant: 复旦大学
IPC: C12N9/46 , C12N15/56 , C12N15/63 , C12P19/16 , C12R1/645 , C12R1/01 , C12R1/685 , C12R1/125 , C12R1/84 , C12R1/865 , C12R1/19
Abstract: 本发明属于生物工程领域，涉及一种新型内切葡聚糖酶RuCelB、其编码基因、制备方法与应用。RuCelB含有SEQ ID NO.2的第25-336位的氨基酸残基序列。通过对牦牛瘤胃微生物宏基因组cosmid文库的活性筛选，获得能够水解羧甲基纤维素钠的阳性克隆，进一步通过构建亚克隆、测序、同源比对的方法获得RuCelB的全长cds序列；重组表达获得RuCelB。RuCelB以羧甲基纤维素钠为底物的比活高达158.8U/mg，对滤纸、纤维三糖等底物也具有降解能力。本发明的RuCelB可广泛应用于纤维素的降解，包括纤维素生物转化、化工、纺织、食品、生物能源、饲料添加、医药工业方面应用等领域。
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公开(公告)号：CN119799527A
公开(公告)日：2025-04-11
申请号：CN202411932931.5
申请日：2024-12-26
Applicant: 复旦大学
IPC: C12N1/19 , C12N15/81 , C12N15/60 , C12N15/54 , C12N15/53 , C12N15/52 , C12N15/31 , C12P7/6432 , C12R1/645
Abstract: 本发明属于生物工程技术领域，具体为一种合成二十碳五烯酸的马克斯克鲁维酵母工程菌及其应用。本发明的工程菌，是在马克斯克鲁维酵母FIM1Δura3菌株中依次敲除丙酮酸脱羧酶PDC1基因、乙醇脱氢酶ADH1、ADH2基因；同时在这些基因座上分别插入柠檬酸裂合酶ACL基因、丙酮酸氧化酶PO基因、磷酸转乙酰酶PTA基因，以此强化乙酰辅酶A的合成；然后在马克斯克鲁维酵母基因组依次上插入多种基因，然后转入Δ8去饱和酶Δ8D基因的载体所获得。本发明还提供高效制备EPA的方法，即以所述马克斯克鲁维酵母工程菌株为发酵菌株，以葡萄糖、酵母提取物、蛋白胨等成分为培养基，经培养发酵产生EPA的产量达到8.71 mg/g细胞干重。
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公开(公告)号：CN116103177B
公开(公告)日：2024-03-05
申请号：CN202310217284.9
申请日：2023-03-08
Applicant: 复旦大学
Abstract: 本发明属于生物技术领域，具体为用马克斯克鲁维酵母制备可溶性铁蛋白纳米颗粒的方法。本发明首先提供高效重组表达铁蛋白的马克斯克鲁维酵母工程菌株，是将密码子优化的人重链铁蛋白基因FTH1或幽门螺旋杆菌铁蛋白基因FTNA或幽门螺旋杆菌铁蛋白基因截短体FtnA的表达载体转化马克斯克鲁维酵母所构建获得，分别记为：KM‑Fth1、KM‑Fth1‑14Δ、KM‑FtnA和KM‑FtnA‑3Δ；进一步将构建的马克斯克鲁维酵母工程菌株经发酵培养得到可溶性铁蛋白纳米颗粒。本发明提供的铁蛋白纳米颗粒的制造方法，在5L发酵罐中的产量达到11g/L。
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公开(公告)号：CN116103177A
公开(公告)日：2023-05-12
申请号：CN202310217284.9
申请日：2023-03-08
Applicant: 复旦大学
Abstract: 本发明属于生物技术领域，具体为用马克斯克鲁维酵母制备可溶性铁蛋白纳米颗粒的方法。本发明首先提供高效重组表达铁蛋白的马克斯克鲁维酵母工程菌株，是将密码子优化的人重链铁蛋白基因FTH1或幽门螺旋杆菌铁蛋白基因FTNA或幽门螺旋杆菌铁蛋白基因截短体FtnA的表达载体转化马克斯克鲁维酵母所构建获得，分别记为：KM‑Fth1、KM‑Fth1‑14Δ、KM‑FtnA和KM‑FtnA‑3Δ；进一步将构建的马克斯克鲁维酵母工程菌株经发酵培养得到可溶性铁蛋白纳米颗粒。本发明提供的铁蛋白纳米颗粒的制造方法，在5L发酵罐中的产量达到11g/L。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN108486105B
公开(公告)日：2021-10-26
申请号：CN201810153542.0
申请日：2018-02-22
Applicant: 复旦大学
Abstract: 本发明公开了一种马克斯克鲁维酵母启动子，其包含菊粉酶基因起始密码子上游1136bp的序列，去除了N端的poly‑A序列，并且包含潜在的Zn(II)2Cys6转录因子的结合位点。该启动子至少包括以下核苷酸序列：1)如SEQ ID NO.3所示的核苷酸序列；或2)如SEQ ID No.3所示的核苷酸序列经过取代、缺失或添加一个或几个核苷酸，具有菊粉酶基因启动子活性的衍生核苷酸序列。本发明还公开了含有该启动子的重组表达载体、含有该启动子或重组表达载体的基因工程菌及其应用与制备方法。利用本发明构建的重组载体可以获得阿魏酸酯酶外源蛋白的表达，其表达的活性超过了目前已报道的其他长度的菊粉酶基因启动子。
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公开(公告)号：CN109187774B
公开(公告)日：2021-09-28
申请号：CN201810713760.5
申请日：2018-07-03
Applicant: 复旦大学
IPC: G01N30/02
Abstract: 本发明的目的在于提供一种操作简单、灵敏度高、重复性和适用性高的PCV2病毒样颗粒检测方法，该方法包括如下步骤：步骤S1，稀释待测样品并进行过滤澄清或离心澄清；步骤S2，取蛋白含量已被确定的猪圆环病毒2型病毒样颗粒标准品进行系列稀释，并对稀释后的系列标准品进行HPLC检测，建立以浓度为横坐标、峰高为纵坐标的回归方程；步骤S3，对稀释后的待测样品进行HPLC检测得到对应的样品峰高；步骤S4，根据回归方程及样品峰高计算得到待测样品中的猪圆环病毒2型病毒样颗粒浓度，其中，步骤S2及步骤S3中的HPLC所采用的色谱柱为凝胶色谱柱，采用的检测器为紫外检测器，其检测波长为280nm。
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公开(公告)号：CN108395996B
公开(公告)日：2021-07-23
申请号：CN201810094158.8
申请日：2018-01-31
Applicant: 复旦大学
Abstract: 本发明属生物医药技术领域，具体为一种猪瘟病毒亚单位疫苗及其制备方法和用途。本发明首先提供一株用于制备猪瘟病毒重组亚单位疫苗的马克斯克鲁维酵母重组菌株。该重组菌株是通过截取猪瘟病毒囊膜蛋白E2的抗原表位区域，经密码子优化获得猪瘟病毒mE2蛋白的编码序列，然后将其克隆到马克斯克鲁维酵母表达载体上并转化马克斯克鲁维酵母宿主菌株构建获得。本发明还提供制备猪瘟病毒亚单位疫苗的方法：利用mE2重组表达的马克斯克鲁维酵母重组菌株，经培养、离心、细胞破碎、分离纯化获得猪瘟病毒mE2蛋白抗原，纯化的抗原和佐剂复配制成猪瘟病毒重组亚单位疫苗。该猪瘟病毒mE2蛋白重组亚单位疫苗注射免疫可获得保护性IgG抗体，能够减少和预防猪瘟病毒感染所引起相关性疾病。
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公开(公告)号：CN108048473B
公开(公告)日：2021-06-29
申请号：CN201711086961.9
申请日：2017-11-07
Applicant: 复旦大学
Abstract: 本发明提供了一种阿魏酸酯酶基因，其来源于中国牦牛瘤胃微生物，具有如SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列，编码如SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列。本发明还提供了含有该基因的马克斯克鲁维酵母重组表达载体及基因工程菌株，并提供了制备阿魏酸酯酶的方法和制得的阿魏酸酯酶的用途。将阿魏酸酯酶在马克斯克鲁维酵母表达系统中重组表达，经高密度发酵48小时后胞内和胞外的阿魏酸酯酶的活力分别为686.35U/mL和346.34U/mL。马克斯克鲁维酵母重组表达的阿魏酸酯酶可释放玉米麸皮中的阿魏酸。利用本发明获得的阿魏酸酯酶，可用于食品加工、饲料添加、生物医药、纤维素物质生物转化、生物能源等领域。
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公开(公告)号：CN108864259A
公开(公告)日：2018-11-23
申请号：CN201810713720.0
申请日：2018-07-03
Applicant: 复旦大学
IPC: C07K14/01
Abstract: 本发明的目的在于提供一种操作简单、回收率高的猪圆环病毒2型病毒样颗粒的溶出方法，具体包括如下步骤：步骤S1，将表达猪圆环病毒2型病毒样颗粒的酵母细胞培养液离心，得到表达猪圆环病毒2型病毒样颗粒酵母菌的菌泥；步骤S2，加入破菌缓冲液重悬菌体，得到菌体悬液；步骤S3，菌体悬液经低温高压均质机破碎，得到含猪圆环病毒2型病毒样颗粒的破菌液；步骤S4，将破菌液离心，得到含猪圆环病毒2型病毒样颗粒蛋白的溶出液，其中，步骤S2中的破菌缓冲液为含有预定浓度的NaCl以及亲水性表面活性剂的磷酸盐缓冲液。
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