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公开(公告)号：CN109593694A
公开(公告)日：2019-04-09
申请号：CN201811318486.8
申请日：2018-11-07
Applicant: 华中农业大学
Abstract: 本发明公开了一种基于Ngpiwi蛋白介导的牛源大肠杆菌基因敲除菌株及其构建方法；所述牛源大肠杆菌基因敲除菌株为在牛源大肠杆菌基因组上缺失潜在毒力相关基因的ORF序列或部分序列的缺失菌株。该方法首先成功构建带有Ngpiwi和待缺失靶基因序列左右同源臂的重组质粒；其次将重组质粒化学转化至牛源大肠杆菌中，在28℃传代诱导双交换重组，PCR筛选出缺失靶基因序列的菌株，之后在无抗生素培养基中37℃诱导质粒丢失，从而获得缺失潜在毒力基因相关序列的菌株。该遗传操作系统质粒较小，操作容易，应用广泛，不存在潜在的脱靶效应，敲除效率较高，无抗性基因筛选标记，为牛源大肠杆菌基因工程疫苗的研发提供了优良工具。
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公开(公告)号：CN105861407A
公开(公告)日：2016-08-17
申请号：CN201610321082.9
申请日：2016-05-16
Applicant: 华中农业大学
CPC classification number: C07K14/315 , A61K39/092 , A61K2039/522 , A61K2039/54
Abstract: 本发明公开了一种猪链球菌2型溶血素溶血活性基因突变株及其疫苗制备和应用。该突变株命名为streptococcus suis type 2mSly(P353L)?SC?19，其保藏编号为：CCTCC M 2016077。所述突变株中溶血素基因碱基序列上1056bp至1059bp的基因序列为TTA。该突变株结合了基因缺失疫苗和毒力因子免疫保护研究的优点，使菌株既缺失猪链球菌II型溶血素的毒性，又具有溶血素蛋白的免疫源性。该菌株特点仍然表达完整的溶血素蛋白，但是不具有溶血活性，该菌株对细胞的毒性大大降低；菌株的溶血素溶血活性突变后，仍然能激活机体产生溶血素蛋白的抗体，具有很好的保护效应。
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公开(公告)号：CN102864157B
公开(公告)日：2014-03-05
申请号：CN201110197503.9
申请日：2011-07-05
Applicant: 华中农业大学 , 武汉科前动物生物制品有限责任公司
IPC: C12N15/31 , C12N1/21 , C12N15/63 , C07K14/285 , A61K39/102 , A61P31/04 , C12R1/19
Abstract: 本发明属于动物传染病亚单位疫苗制备技术领域，具体涉及一种副猪嗜血杆菌保护性抗原的制备及应用。本发明克隆了一种副猪嗜血杆菌外膜蛋白Hbp B基因，其核苷酸序列如SEQID NO：1所示，该基因编码的序列如SEQ ID NO：2所示。构建了一种重组大肠杆菌(Escherichia coli) BL21/pET-28a-Hbp B(保藏号为CCTCC NO：M 2011228)，它包含序列表SEQID NO：1所述的基因。申请人还得到一种副猪嗜血杆菌的抗原蛋白：它是由SEQ ID NO：1所述的基因转化大肠杆菌所表达的。本发明还公开了该重组大肠杆菌的制备方法与应用。本发明制备的副猪嗜血杆菌亚单位疫苗具有良好的安全性，其免疫保护效果达到83％。
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公开(公告)号：CN103421733A
公开(公告)日：2013-12-04
申请号：CN201310040712.1
申请日：2013-01-31
Applicant: 华中农业大学
IPC: C12N1/21 , C12N15/63 , C12N15/31 , A61K39/116 , A61K39/112 , A61K39/102 , A61P31/04 , C12R1/42
Abstract: 本发明属于动物细菌性疾病基因工程疫苗技术领域，具体涉及一种无抗性标记表达副猪嗜血杆菌表面抗原基因HbpB的重组猪霍乱沙门氏菌减毒疫苗的菌株构建、疫苗制备以及应用。获得一株无抗性标记的表达副猪嗜血杆菌表面抗原PalA的猪霍乱沙门氏菌asd-C500/pYA-PalA(保藏号为CCTCC NO：M2013053)。该重组菌缺失了猪霍乱沙门氏菌基因组上的asd基因，含有能在该菌株中表达asd基因和副猪嗜血杆菌外膜抗原PalA基因的重组质粒pYA-PalA。还公开了猪霍乱沙门氏菌asd-C500/pYA-PalA的构建方法与相应弱毒疫苗的制备方法，及在制备猪霍乱沙门氏菌-副猪嗜血杆菌疫苗中的应用。
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公开(公告)号：CN103421732A
公开(公告)日：2013-12-04
申请号：CN201310039113.8
申请日：2013-01-31
Applicant: 华中农业大学
IPC: C12N1/21 , C12N15/74 , A61K39/116 , A61K39/112 , A61K39/102 , A61P31/04 , C12R1/42 , C12R1/21
Abstract: 本发明属于动物细菌性疾病基因工程疫苗领域，具体涉及一种无抗性标记表达副猪嗜血杆菌表面抗原基因HbpB的重组猪霍乱沙门氏菌减毒疫苗株的构建、疫苗制备及应用。获得一株无抗性标记的表达副猪嗜血杆菌表面抗原HbpB的重组猪霍乱沙门氏菌asd-C500/pYA-HbpB(保藏号为CCTCC NO：M2013052)。该重组菌缺失了猪霍乱沙门氏菌基因组上的asd基因，含有能在该菌株中表达asd基因和副猪嗜血杆菌外膜抗原HbpB基因的重组质粒pYA-HbpB。还公开了重组菌株asd-C500/pYA-HbpB的构建方法与相应弱毒疫苗的制备方法，及在制备猪霍乱沙门氏菌-副猪嗜血杆菌疫苗中的应用。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN103409359A
公开(公告)日：2013-11-27
申请号：CN201310317280.4
申请日：2013-07-26
Applicant: 华中农业大学
IPC: C12N1/21 , C07K14/705 , A61K38/17 , A61P31/04 , C12R1/19
Abstract: 本发明属于生物技术领域，具体涉及到一种TREM-1胞外域的原核表达菌株以及在治疗猪链球菌感染引起的败血症中的应用。一种TREM-1胞外域的原核表达菌株，其特征在于：命名为Escherichia coil BL21/PET28a-TREM1，其保藏号为：CTCC M 2013272。菌株BL21/pET28a-TREM1表达小鼠TREM-1蛋白胞外域时，TREM-1蛋白胞外域上同时携带有FLAG和HIS两个标签。应用FLAG亲和树脂和NTA树脂与FLAG和HIS两个标签先后对所得到的蛋白进行纯化，并进行去内毒素处理。可以得到高纯度的TREM-1胞外域重组表达蛋白，其纯度高达90%以上。
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公开(公告)号：CN102864157A
公开(公告)日：2013-01-09
申请号：CN201110197503.9
申请日：2011-07-05
Applicant: 华中农业大学 , 武汉科前动物生物制品有限责任公司
IPC: C12N15/31 , C12N1/21 , C12N15/63 , C07K14/285 , A61K39/102 , A61P31/04 , C12R1/19
Abstract: 本发明属于动物传染病亚单位疫苗制备技术领域，具体涉及一种副猪嗜血杆菌保护性抗原的制备及应用。本发明克隆了一种副猪嗜血杆菌外膜蛋白Hbp B基因，其核苷酸序列如SEQID NO：1所示，该基因编码的序列如SEQ ID NO：2所示。构建了一种重组大肠杆菌(Escherichia coli) BL21/pET-28a-Hbp B(保藏号为CCTCC NO：M2011228)，它包含序列表SEQID NO：1所述的基因。申请人还得到一种副猪嗜血杆菌的抗原蛋白：它是由SEQ ID NO：1所述的基因转化大肠杆菌所表达的。本发明还公开了该重组大肠杆菌的制备方法与应用。本发明制备的副猪嗜血杆菌亚单位疫苗具有良好的安全性，其免疫保护效果达到83％。
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公开(公告)号：CN101935668A
公开(公告)日：2011-01-05
申请号：CN201010231567.1
申请日：2010-07-15
Applicant: 华中农业大学 , 武汉科前动物生物制品有限责任公司
Abstract: 本发明属于动物传染病技术领域，具体涉及一种分泌核酸酶SsnA基因的分离和克隆，将所述的基因通过大肠杆菌表达，获得重组大肠杆菌(Escherichia coli)BL21/pET-28aSsnA)，利用该菌株表达猪链球菌2型分泌核酸酶SsnA，建立酶联免疫吸附试验(ELISA)鉴别诊断方法，用于区分猪链球菌2型灭活疫苗免疫猪与被感染猪。本发明提供含有猪链球菌2型分泌核酸酶SsnA的表达质粒(pET-28a(+))、重组大肠杆菌菌株BL21/pET28a-SsnA、SsnA蛋白的表达和纯化方法以及用该蛋白建立的可区分猪链球菌2型灭活苗免疫猪血清和感染猪血清的鉴别诊断方法。
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公开(公告)号：CN101025420B
公开(公告)日：2010-11-17
申请号：CN200510019512.3
申请日：2005-09-29
Applicant: 华中农业大学
IPC: G01N33/569 , G01N33/544
Abstract: 本发明公开了一种用于快速检测禽流感病毒的乳胶凝集试剂盒。利用水溶性碳化二亚胺将兔抗禽流感病毒核蛋白IgG偶联到羧化聚苯乙烯胶乳颗粒的表面，建立了禽流感病毒乳胶凝集检测方法，再辅以其它配套试剂制备了禽流感病毒乳胶凝集检测试剂盒。禽流感病毒乳胶凝集检测试剂盒由盒体和设在盒体内的乳胶诊断试剂、样本处理液A，样本处理液B，阳性对照样品和阴性对照样品组成。所述的试剂盒能够直接对禽流感病毒进行检测，具有特异性强、灵敏度高、操作简便和诊断快速的显著优点。
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公开(公告)号：CN101418275A
公开(公告)日：2009-04-29
申请号：CN200810225345.1
申请日：2008-10-30
Applicant: 华中农业大学
IPC: C12N1/21 , C07K14/315 , A61K39/09 , A61P31/04 , C12R1/19
Abstract: 本发明属于家畜传染病技术领域。具体涉及一种猪链球菌2型免疫保护性抗原及其制备方法与应用。涉及本发明的核心技术是制备了能够分泌猪链球菌2型抗原蛋白0197的表达菌株Escherichia coli BL21/pET－28a－0197，该菌株保藏在中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏编号为CCTCC NO：M208146。本发明还公开了适用于猪链球菌2型的亚单位疫苗的抗原蛋白的制备方法及用途。
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