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公开(公告)号：CN109593694B
公开(公告)日：2022-04-22
申请号：CN201811318486.8
申请日：2018-11-07
Applicant: 华中农业大学
Abstract: 本发明公开了一种基于Ngpiwi蛋白介导的牛源大肠杆菌基因敲除菌株及其构建方法；所述牛源大肠杆菌基因敲除菌株为在牛源大肠杆菌基因组上缺失潜在毒力相关基因的ORF序列或部分序列的缺失菌株。该方法首先成功构建带有Ngpiwi和待缺失靶基因序列左右同源臂的重组质粒；其次将重组质粒化学转化至牛源大肠杆菌中，在28℃传代诱导双交换重组，PCR筛选出缺失靶基因序列的菌株，之后在无抗生素培养基中37℃诱导质粒丢失，从而获得缺失潜在毒力基因相关序列的菌株。该遗传操作系统质粒较小，操作容易，应用广泛，不存在潜在的脱靶效应，敲除效率较高，无抗性基因筛选标记，为牛源大肠杆菌基因工程疫苗的研发提供了优良工具。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN101691526B
公开(公告)日：2012-11-28
申请号：CN200910272305.7
申请日：2009-09-30
Applicant: 华中农业大学
CPC classification number: Y02E50/13
Abstract: 本发明属于生物柴油制备技术领域，具体涉及一种利用生物甲壳固体碱催化剂制备生物柴油的方法。本发明的特征是：先制备生物甲壳固体碱做催化剂，该催化剂是按照不完全碳化，化学改性剂浸渍和活化处理步骤制得；按甲醇与菜籽油的摩尔比为3∶1-18∶1，化学改性剂用量为原料油质量的1-7％配备反应原料，将反应原料置于常压，反应温度为40-80℃的反应装置中，搅拌反应1-5h，然后将反应液趁热过滤，将滤液蒸馏蒸出甲醇，回收甲醇，得到生物柴油和甘油。本发明为生物柴油的生产提供了一条新途径。
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公开(公告)号：CN109593694A
公开(公告)日：2019-04-09
申请号：CN201811318486.8
申请日：2018-11-07
Applicant: 华中农业大学
Abstract: 本发明公开了一种基于Ngpiwi蛋白介导的牛源大肠杆菌基因敲除菌株及其构建方法；所述牛源大肠杆菌基因敲除菌株为在牛源大肠杆菌基因组上缺失潜在毒力相关基因的ORF序列或部分序列的缺失菌株。该方法首先成功构建带有Ngpiwi和待缺失靶基因序列左右同源臂的重组质粒；其次将重组质粒化学转化至牛源大肠杆菌中，在28℃传代诱导双交换重组，PCR筛选出缺失靶基因序列的菌株，之后在无抗生素培养基中37℃诱导质粒丢失，从而获得缺失潜在毒力基因相关序列的菌株。该遗传操作系统质粒较小，操作容易，应用广泛，不存在潜在的脱靶效应，敲除效率较高，无抗性基因筛选标记，为牛源大肠杆菌基因工程疫苗的研发提供了优良工具。
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公开(公告)号：CN109266593B
公开(公告)日：2021-08-24
申请号：CN201810970024.8
申请日：2018-08-24
Applicant: 华中农业大学
Abstract: 本发明公开了一种基于Ngpiwi蛋白介导的禽多杀性巴氏杆菌基因敲除菌株及其构建方法和应用；所述禽多杀性巴氏杆菌基因敲除菌株为在禽多杀性巴氏杆菌基因组上缺失潜在毒力相关基因的ORF序列或部分序列的缺失菌株。该方法首先成功构建带有Ngpiwi和待缺失靶基因序列左右同源臂的重组质粒；其次将重组质粒电转入禽多杀性巴氏杆菌中，在28℃传代诱导双交换重组，PCR筛选出缺失靶基因序列的菌株，之后在42℃诱导质粒丢失，从而获得缺失潜在毒力基因相关序列的菌株。该遗传操作系统质粒较小，操作容易，应用广泛，不存在潜在的脱靶效应，敲除效率较高，无抗性基因筛选标记，为禽多杀性巴氏杆菌基因工程疫苗的研发提供了优良工具。
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公开(公告)号：CN101691526A
公开(公告)日：2010-04-07
申请号：CN200910272305.7
申请日：2009-09-30
Applicant: 华中农业大学
CPC classification number: Y02E50/13
Abstract: 本发明属于生物柴油制备技术领域，具体涉及一种利用生物甲壳制备催化剂制备生物柴油的方法。本发明的特征是：先制备生物甲壳固体碱做催化剂，该催化剂是按照不完全碳化，化学改性剂浸渍和活化处理步骤制得；按甲醇与菜子油的摩尔比为3∶1-18∶1，生物甲壳固体碱催化剂为原料油质量的1-7％配备反应原料，将反应原料置于常压，反应温度为40-80℃的反应装置中，搅拌反应1-5h，然后将反应液趁热过滤，将滤液蒸馏蒸出甲醇，回收甲醇，得到生物柴油和甘油。本发明为生物柴油的生产提供了一条新途径。
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公开(公告)号：CN109266593A
公开(公告)日：2019-01-25
申请号：CN201810970024.8
申请日：2018-08-24
Applicant: 华中农业大学
Abstract: 本发明公开了一种基于Ngpiwi蛋白介导的禽多杀性巴氏杆菌基因敲除菌株及其构建方法和应用；所述禽多杀性巴氏杆菌基因敲除菌株为在禽多杀性巴氏杆菌基因组上缺失潜在毒力相关基因的ORF序列或部分序列的缺失菌株。该方法首先成功构建带有Ngpiwi和待缺失靶基因序列左右同源臂的重组质粒；其次将重组质粒电转入禽多杀性巴氏杆菌中，在28℃传代诱导双交换重组，PCR筛选出缺失靶基因序列的菌株，之后在42℃诱导质粒丢失，从而获得缺失潜在毒力基因相关序列的菌株。该遗传操作系统质粒较小，操作容易，应用广泛，不存在潜在的脱靶效应，敲除效率较高，无抗性基因筛选标记，为禽多杀性巴氏杆菌基因工程疫苗的研发提供了优良工具。
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