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公开(公告)号：CN104745725B
公开(公告)日：2017-08-25
申请号：CN201510103671.5
申请日：2015-03-10
Applicant: 西南大学柑桔研究所
Abstract: 本发明提供了一种同时检测CYVCV和CCDaV的一步法PCR检测引物对、试剂盒及方法。引物对包括CYVCV检测引物对：CYVCV‑4f/CYVCV‑‑4r；CCDaV检测引物对：CCDV‑2f/CCDV‑2r；COX基因检测引物对：Ant1/Sen1。同时检测CYVCV和CCDaV的一步法PCR检测方法，包括步骤：(1)提取柑橘待测样品的总核酸；(2)将提取到的总核酸进行多重PCR扩增；(3)对扩增产物进行检测是否含有CYVCV、CCDaV和COX基因的扩增片段，从而判断样品是否感染CYVCV或CCDaV。本发明方法检测特异性强，灵敏度高，稳定性好，工序简单，节约成本，适用于大规模推广。
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公开(公告)号：CN107014999A
公开(公告)日：2017-08-04
申请号：CN201710333029.5
申请日：2017-05-12
Applicant: 西南大学
IPC: G01N33/577 , G01N33/569 , G01N33/558
CPC classification number: G01N33/577 , G01N33/558 , G01N33/56983 , G01N2333/08
Abstract: 本发明公开了一种柑橘黄化脉明病毒免疫胶体金试纸条，金标垫为玻璃纤维素膜附着胶体金标记的CYVCV鼠源单克隆抗体1E1；检测线包被抗体1E1，质控线包被羊抗鼠IgG。还公开了制备方法：(1)制备胶体金；(2)制备金标抗体：利用胶体金和抗体1E1制备得到胶体金标记抗体1E1复合物；(3)将胶体金标记抗体1E1复合物喷铺于玻璃纤维素膜上，干燥，得金标垫；(4)吸取抗体1E1在硝酸纤维素膜上喷画成检测线；吸取羊抗鼠IgG在硝酸纤维素膜上喷画成质控线；(5)将样品垫、金标垫、有检测线和质控线的硝酸纤维素膜、吸水垫依次粘贴在支持板上。该试纸条特异性强、灵敏度高、快速简便、成本低，检测不需要依赖于特殊仪器。
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公开(公告)号：CN106480231A
公开(公告)日：2017-03-08
申请号：CN201611264705.X
申请日：2016-12-30
Applicant: 西南大学
Abstract: 本发明涉及一种同时检测柑橘黄化脉明病毒和柑橘衰退病毒2种柑橘病毒的多重RT-PCR方法。该方法选用CYCVC和CTV 2种病原外壳蛋白保守序列及内参基因的特异性引物，对影响多重PCR的Mg2+、dNTP浓度、引物浓度和退火温度进行了调整和优化，建立同时检测CYCVC和CTV的一步法多重RT-PCR方法，灵敏度与单一RT-PCR检测灵敏度一致。利用该方法对33个田间样品检测结果表明，CYVCV和CTV感染率分别为54.5％和66.7％，复合侵染的样品高达36.4％。可用于大量田间样品中CYVCV和CTV的同时快速检测，对提高柑橘黄化脉明病毒和衰退病毒的高效准确检测和及时有效防治具有重要意义。
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公开(公告)号：CN101956023B
公开(公告)日：2012-10-31
申请号：CN201010282983.4
申请日：2010-09-16
Applicant: 西南大学
Abstract: 本发明公开了一种检测十种主要柑桔病害病原的基因芯片，包括固相载体和固定在该固相载体上的特异性寡核苷酸探针，其特征在于：固定在所述固相载体上的特异性寡核苷酸探针具有SEQIDNO：1-SEQIDNO：10所示的寡核苷酸序列或者与SEQIDNO：1-SEQIDNO：10所示的寡核苷酸序列互补的DNA或RNA。本发明方法设计合理，能够提高检测柑桔主要病害病原的敏感性、特异性及准确性；高通量，一次检测即能检出十种柑桔病害，十种病毒基本概括了柑桔主要病害病原；能够发现各种柑桔病原物的混合感染。
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公开(公告)号：CN101560577B
公开(公告)日：2011-07-20
申请号：CN200910103937.0
申请日：2009-05-25
Applicant: 西南大学 , 中国农业科学院柑桔研究所
Abstract: 本发明涉及一种用于诊断柑桔碎叶病毒(CTLV)分子变异的快速检测方法。它包括设计特异性引物对CTLV基因组特定区域的核酸序列进行逆转录聚合酶链式反应扩增(RT-PCR)，并用Taq I、Mse I、Hinf I或其它限制性内切酶对其RT-PCR产物进行消化，然后依据电泳图谱诊断CTLV的分子变异。本发明的方法具有速度快、成本低、重复性好、稳定性高、操作性强等特点，适合大规模、高通量的样品分析，适用于田间样品检测CTLV流行监控、脱毒苗木鉴定等多种用途。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN101956023A
公开(公告)日：2011-01-26
申请号：CN201010282983.4
申请日：2010-09-16
Applicant: 西南大学
Abstract: 本发明公开了一种检测十种主要柑桔病害病原的基因芯片，包括固相载体和固定在该固相载体上的特异性寡核苷酸探针，其特征在于：固定在所述固相载体上的特异性寡核苷酸探针具有SEQIDNO：1-SEQIDNO：10所示的寡核苷酸序列或者与SEQIDNO：1-SEQIDNO：10所示的寡核苷酸序列互补的DNA或RNA。本发明方法设计合理，能够提高检测柑桔主要病害病原的敏感性、特异性及准确性；高通量，一次检测即能检出十种柑桔病害，十种病毒基本概括了柑桔主要病害病原；能够发现各种柑桔病原物的混合感染。
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公开(公告)号：CN116837120A
公开(公告)日：2023-10-03
申请号：CN202310523232.4
申请日：2023-05-10
Applicant: 西南大学柑桔研究所
IPC: C12Q1/689 , C12Q1/6844 , C12N15/11 , C12R1/01
Abstract: 本发明属于本发明属于植物病害检测技术领域，具体涉及一种柑橘黄龙病可视化快速检测试剂盒及其应用。本发明要解决的技术问题是为柑橘黄龙病田间可视化快速检测提供一种新选择。本发明的技术方案是一种柑橘黄龙病可视化快速检测试剂盒，包括RPA特异性引物对和exo探针；RPA特异性引物对的核苷酸序列如SEQ ID No.1和SEQ ID No.2所示，exo探针为如SEQ ID No.3所示的单链核苷酸。本发明所提供试剂盒可以满足柑橘黄龙病田间快速检测需求，可为柑橘黄龙病菌早期检测、流行病学调查提供科学依据，具有良好的发展应用前景。
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公开(公告)号：CN115380722A
公开(公告)日：2022-11-25
申请号：CN202211258876.7
申请日：2022-10-14
Applicant: 西南大学
Abstract: 本发明属于植物嫁接技术领域，具体涉及一种提高高温期柑桔带叶嫁接成活率的保湿方法，将老熟柑桔接穗嫁接至砧木苗上，接穗具有叶片，对接穗和砧木进行保湿处理，保湿处理的过程包括：使用保湿件完全包裹接芽叶片和接芽，再使用保湿袋罩住砧木和接穗并密封；用遮阳材料进行遮阳；将砧木和接穗置于日最高气温为35℃以上环境中培养，培养8～15天后解除保湿袋。本发明中，遮阳材料减少阳光热辐射，保湿件完全包裹接芽叶片和接芽，保湿件吸收热量后水分蒸发，降低接芽叶片温度，并且，保湿件能够将高温水蒸汽隔离在外，避免高温水蒸汽直接接触接芽叶片，有效降低高温对叶片造成热伤害，进而大幅度提高高温期柑桔带叶嫁接的成活率。
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公开(公告)号：CN110628725B
公开(公告)日：2022-11-18
申请号：CN201910939750.8
申请日：2019-09-30
Applicant: 西南大学
Abstract: 本发明公开了一种柑橘黄化脉明病毒突变体，是在CYVCV的外壳蛋白基因上进行定点突变或者基因插入/缺失获得，定点突变是指将外壳蛋白基因上的第6817位碱基T突变为C得到，基因插入/缺失是指外壳蛋白基因上C6245至A6730共486个碱基片段被绿色荧光蛋白基因mgfp5序列替换。该突变体的构建方法：(1)质粒酶切：pCY‑CYVCV‑mcp(T→C)突变体构建的酶切反应采用限制性内切酶SalI和Rsrl，pCY‑CYVCV‑△cp‑gfp突变体构建的酶切反应采用Bgl II；(2)PCR扩增突变体构建所需序列片段；(3)PCR产物与质粒酶切产物重组连接构建突变体质粒，测序验证。
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公开(公告)号：CN114317598A
公开(公告)日：2022-04-12
申请号：CN202110957438.9
申请日：2021-08-18
Applicant: 西南大学
Abstract: 本发明提供一种病毒诱导的基因沉默载体及其应用和柑橘病害防控的方法。所述基因沉默载体是基于柑橘叶斑驳病毒的侵染性克隆质粒而构建的。所述基因沉默载体是通过将目的基因片段整合到CLBV侵染性克隆质粒pCLBV201构建得到的重组质粒载体，目的基因片段优选反向连接在所述质粒载体pCLBV201中CLBV基因组cp基因终止子与3’UTR之间。本发明提供的靶向柑橘lob基因的基因沉默载体阻断柑橘溃疡病菌与靶标基因结合，可以达到良好的溃疡病防控效果，并且成本低廉，环境友好。本发明构建的靶向CYVCV基因组不同ORF的基因沉默载体能够有效抑制CYVCV在植株内转录表达，进而实现对柑橘黄脉病的预防和控制。
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