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公开(公告)号：CN105543303A
公开(公告)日：2016-05-04
申请号：CN201610035648.1
申请日：2016-01-19
Applicant: 江南大学
IPC: C12P13/24
CPC classification number: C12P13/24
Abstract: 本发明公开了一种有效提高羟脯氨酸产量的生物合成方法。其中，生物合成法生产羟基-L-脯氨酸的系统是指，在生物细胞内生物体在α-酮戊二酸及亚铁离子存在的情况下利用脯氨酸羟化酶，将游离的L-脯氨酸转化为反式-4-羟基-L-脯氨酸的生产方法。提高羟脯氨酸产量的方法为：切断生物细胞内与L-脯氨酸竞争前体底物谷氨酸的其他代谢途径。其中，其他代谢途径是指，精氨酸代谢途径。通过使用这种方法，反式-4-羟基-L-脯氨酸的产量达到921mg/L。
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公开(公告)号：CN105420269A
公开(公告)日：2016-03-23
申请号：CN201510918697.5
申请日：2015-12-11
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明涉及一种毕赤酵母中共表达血红蛋白VHb和纤维素酶蛋白的构建方法，具体涉及纤维素酶蛋白基因密码子优化及其与透明颤菌血红蛋白(VHb)共表达毕赤酵母体系的构建。本发明利用Gene Designer(DNA2.0,Menlo Park,CA,USA)软件对EG II(GenBank Accession No.DQ178347.1)核苷酸序列进行密码子偏向性优化，构建了pPIC9K-eg2表达载体，并以Pichiapastoris GS115为宿主通过电转化获得重组毕赤酵母菌株。另外，从NCBI中获得VHb(GenBank Accession No.M30794.1)核苷酸序列，通过人工合成基因后构建了pPICZαA-vgb表达载体，以含EG II基因重组毕赤酵母菌株作为宿主，通过电转化获得共表达毕赤酵母菌株。通过检测表明，共表达菌株在菌浓生长与酶活方面均有提高，其中OD600值提高7.2％，酶活提高2.2％。
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公开(公告)号：CN105385703A
公开(公告)日：2016-03-09
申请号：CN201510702317.4
申请日：2015-10-26
Applicant: 江南大学
Abstract: 高产反式-4-羟脯氨酸sucA基因敲除菌的构建。本发明公开了一种利用基因敲除获得反式-4-羟基-L-脯氨酸的生物合成方法。在大肠杆菌BL21(DE3)△putA的基础上敲除基因sucA，打断TCA循环中由α-酮戊二酸生成琥珀酸(由α-酮戊二酸脱氢酶复合体催化的)的过程，同时插入反式-4-羟基-L-脯氨酸羟化酶基因(hyp)，之后转入质粒pUC19-Ptrp2-hyp-vgb。由羟化酶取代α-酮戊二酸脱氢酶的作用，“回补”TCA循环过程，保证TCA循环进行的同时产生羟脯氨酸。本发明还公开了所述重组大肠杆菌在生产反式-4-羟脯氨酸中的应用，摇瓶发酵结果表明，培养基优化后的羟脯氨酸产量为1344.1mg/L，是优化前的5.53倍左右。与同样转入质粒pUC19-Ptrp2-hyp-vgb的原菌相比，在产羟脯氨酸方面具有优势。
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公开(公告)号：CN105018546A
公开(公告)日：2015-11-04
申请号：CN201410189593.0
申请日：2014-04-29
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明提供了一种提取甘蔗渣纤维素的方法，其特征在于：以甘蔗渣为原料，采用循环应用甘油/水预处理的方法，蒸煮温度为200℃-240℃，蒸煮时间1小时-5小时，并运用蒸煮过程中的抽滤、洗涤的甘油可7次循环蒸煮处理甘蔗渣，而蒸发、洗涤、抽滤的水则回收用于沉淀木质素，达到了提取甘蔗渣纤维素的目的，采用美国能源实验室NREL法测定其纤维素组分，纤维素保留率为94％，木质素去除率为55％以上，酶解效率48％，实现了循环应用甘油/水预处理甘蔗汁渣废料为纤维素再利用目标，又节省了大量的甘油/水，为今后大规模乃至工业化生产起到积极的作用。
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公开(公告)号：CN104862344A
公开(公告)日：2015-08-26
申请号：CN201510212735.5
申请日：2015-04-29
Applicant: 江南大学
IPC: C12P7/10
Abstract: 本发明提供了一种农林生物质废弃物浓醪发酵产纤维素乙醇的方法，生物质废弃物甘油溶液混合后加热升温至150～240℃，保温蒸煮0.5～5hr；蒸煮结束后，加入沸水使甘油浓度在30～70％时充分离解15～60min；离解疏散后过滤或者离心即获得粗纤维素，甘油溶液和沸水分别洗涤1～4次后，即获得甘油有机溶剂预处理纤维素；以初始基质浓度10～40％的该纤维素为基质，按10～80FPU/g干基质添加纤维素酶，按6～20g/L添加硫酸铵作氮源，按6～14％质量比接入酿酒酵母种子液后在32～42℃下进行糖化发酵40～120hr产乙醇含量可达80g/L以上。本发明在预处理时使用甘油作蒸煮剂，发酵抑制物少，有希望同时推进生物柴油和纤维素乙醇的工业化，发酵培养基简单经济，乙醇产量高。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN104480172A
公开(公告)日：2015-04-01
申请号：CN201410663050.8
申请日：2014-11-19
Applicant: 江南大学
Abstract: 公开了一种利用重组大肠杆菌生产L-丙氨酰-L-谷氨酰胺的方法，其中，利用重组大肠杆菌生产L-丙氨酰-L-谷氨酰胺是指在一定pH值的水溶液中，作用于游离的L-谷氨酰胺和L-丙氨酸甲酯盐酸盐，生成L-丙氨酰-L-谷氨酰胺的具有氨基酸酯酰基转移酶的蛋白质的基因片段重组到载体里并转入宿主菌，得到带有重组DNA并且使L-丙氨酰-L-谷氨酰胺生物合成系统活性增强的宿主菌。经过以下阶段(1)培养大量表达氨基酸酯酰基转移酶的重组大肠杆菌细胞；(2)过量表达阶段(1)中的氨基酸酯酰基转移酶；(3)将阶段(2)所得作为粗酶源，加入到含有L-谷氨酰胺和L-丙氨酸甲酯盐酸盐底物氨基酸的缓冲溶液中反应，实现L-丙氨酰-L-谷氨酰胺的高效生产。
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公开(公告)号：CN104276990A
公开(公告)日：2015-01-14
申请号：CN201310286354.2
申请日：2013-07-04
Applicant: 江南大学
IPC: C07D207/16 , B01J20/28 , B01D15/08
CPC classification number: C07D207/16
Abstract: 本发明涉及一种利用活性炭对L-羟脯氨酸发酵液脱色的方法，由活性炭的预处理、发酵液的预处理、L-羟脯氨酸发酵液的连续脱色和活性炭的再生等步骤组成。本发明在层析柱内填充粉末状活性炭对L-羟脯氨酸发酵液进行连续脱色，与用粉末状活性炭分批脱色相比，活性炭可以反复多次使用，而且不用反复装柱，脱色后可直接进行再生，降低劳动强度，减少购买活性炭的成本。另外整个过程在室温下进行，在大批量脱色时更加容易操作，避免高温危险，并节约能源和降低成本。本发明主要用于L-羟脯氨酸发酵液中色素的去除，适合工业应用。
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公开(公告)号：CN104212531A
公开(公告)日：2014-12-17
申请号：CN201410497348.6
申请日：2014-09-25
Applicant: 江南大学
IPC: C10L5/44
Abstract: 本发明公开了一种利用外源气体辅助蒸汽爆破生物质废弃物制备固体燃料的生产方法，涉及废弃物资源化利用和生物质能源领域。包括如下步骤：生物质废弃物破碎至2-30×10-150×10-30mm，调湿至含水量15-50％；将物料装入汽爆罐，密封后通入外源气体，通气时间10-90秒至压力0.5-2.0MPa，再通入饱和水蒸气0-60秒直至压力2.0-3.0MPa，维持2-20min后突然卸阀实现物料的瞬间减压释放；汽爆物料通过挤压成型生产生物质固体燃料。本发明：1)汽爆处理可代替部分机械粉碎；2)汽爆打破生物质废弃物致密顽抗性组成结构，使物料变得松散细软，有助于挤压成型；2)外源气体代替水蒸汽可避免汽爆后物料含水量过高。本发明具有简便易行、处理效率高、原料成本低和便于大规模工业化生产的特点。
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公开(公告)号：CN103194440A
公开(公告)日：2013-07-10
申请号：CN201210003952.X
申请日：2012-01-09
Applicant: 江南大学
Abstract: 一种从酿酒酵母细胞中高效提取高分子量基因组的方法，包括采用lyticase破壁、蛋白酶k与RNase除去组蛋白和RNA、氯仿抽提、沉淀、溶解。本发明从影响酿酒酵母基因组提取的质和量入手，将破壁和去除蛋白、RNA的过程分开，分别采用不同的缓冲液及添加还原剂来保证破壁的效率和除去杂质的效果。在工艺过程上进行了更细致的优化，增加了抽提的次数，使基因组更加完整并提高了纯度。
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公开(公告)号：CN103160493A
公开(公告)日：2013-06-19
申请号：CN201110422779.2
申请日：2011-12-16
Applicant: 江南大学
Abstract: 一种快速消除大肠杆菌抗生素抗性质粒的方法，主要用于将大肠杆菌中的抗生素抗性质粒快速有效地从大肠杆菌中消除掉。通过采用将大肠杆菌进行电击的方法获得消除抗生素抗性质粒的大肠杆菌，并采用特殊的电击缓冲液促进抗生素抗性质粒的消除，提高质粒消除率。细胞处于电场中时，电压达到某一临界值，细胞膜局部被击穿，形成瞬时的孔洞，孔径大小可以使质粒从细胞中排出，电击结束后，损伤的细胞膜又可以自我修复；电击缓冲液的碱金属通过与细胞膜结合从而促进细胞膜的击穿，使得胞内质粒更容易泄露出来。最终的质粒消除率可达到93％。
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