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公开(公告)号：CN104498420B
公开(公告)日：2019-03-01
申请号：CN201410738381.3
申请日：2014-12-04
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种产肝素前体的重组枯草芽孢杆菌及其应用，属于生物工程技术领域。本发明将α‑糖基转移酶编码基因和β‑糖基转移酶编码基因整合于枯草芽孢杆菌基因组上表达，同时，对枯草芽孢杆菌中UDP‑GlcA和UDP‑GlcNAc合成途径的基因，进行模块化组装表达分析，通过控制不同的UDP‑GlcA和UDP‑GlcNAc浓度，实现枯草芽孢杆菌产不同分子量范围的肝素前体。本发明为食品级微生物高效生产制备肝素前体奠定了一定的基础，适合于工业化生产应用。
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公开(公告)号：CN105087456B
公开(公告)日：2019-01-11
申请号：CN201510573851.X
申请日：2015-09-10
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种产特定分子量透明质酸的重组枯草芽孢杆菌的构建方法，属于生物工程技术领域。本发明采用兽疫链球菌来源的透明质酸合酶hasA整合于枯草芽孢杆菌实现了透明质酸的生产；同时，对HA的合成途径关键基因进行过表达实现HA在枯草芽孢杆菌的高产。在此基础上，引入水蛭来源的透明质酸酶整合至枯草芽孢杆菌基因组上，从基因表达翻译水平上对核糖体结合位点RBS序列进行突变文库构建，高通量筛选获得了一系列透明质酸酶表达水平不同的突变体。实现了透明质酸高达制备19.38g/L的产量，分子量范围从103到106道尔顿，为高效制备小分子透明质酸奠定了一定的基础，适合于工业化生产应用。
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公开(公告)号：CN108865913A
公开(公告)日：2018-11-23
申请号：CN201810708252.8
申请日：2018-07-02
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种构建高效分泌表达硫酸软骨素水解酶重组菌的方法，属于酶工程技术领域。本发明采用毕赤酵母表达系统，构建一种表达硫酸软骨素水解酶的方法。本发明在毕赤酵母表达系统中实现了硫酸软骨素水解酶的分泌表达，对硫酸软骨素水解酶的工业化生产起到了重要的推动作用。
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公开(公告)号：CN108841738A
公开(公告)日：2018-11-20
申请号：CN201810709044.X
申请日：2018-07-02
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种构建高效分泌表达人源肝素水解酶重组菌的方法，属于酶工程技术领域。本发明采用毕赤酵母表达系统，构建一种表达肝素水解酶的方法，在毕赤酵母表达系统中实现了肝素水解酶的分泌表达。本发明是一种发酵产肝素水解酶的方法，对肝素水解酶的工业化生产起到了重要的推动作用。
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公开(公告)号：CN104312935B
公开(公告)日：2018-07-06
申请号：CN201410568277.4
申请日：2014-10-22
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种构建重组酵母发酵生产葡萄糖二酸的方法，属于代谢工程领域。本发明通过在酵母中表达肌醇‑1‑磷酸合成酶基因(Ino1)、肌醇加氧酶基因(MIOX)，实现葡萄糖醛酸的生成途径，同时表达来源于恶臭假单胞菌(Pseudomonas putida)的醛酸脱氢酶(Udh)，成功构建了葡萄糖二酸的合成途径。其中，重组毕赤酵母在YPD发酵培养基中生成葡萄糖二酸40mg/L，在YPD‑MI(YPD培养基中加入60mM肌醇)发酵培养基中生成葡萄糖二酸60mg/L。本发明提出的重组酵母发酵生成葡萄糖二酸的方法，具有广阔的发展前景，为生物合成葡萄糖二酸奠定了基础。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN104805508B
公开(公告)日：2017-07-14
申请号：CN201510213073.3
申请日：2015-04-29
Applicant: 江南大学
IPC: C40B50/06
Abstract: 本发明一种基于合成单链DNA文库进化代谢途径的方法，属于基因工程技术领域。本发明采用合成的DNA单链文库，以PCR技术介导重组突变文库的构建。突变文库重组表达载体后转化宿主进行高通量筛选进化突变株。本发明采用此技术，成功对代谢途径进行体外改造，获得了性质非常优异的突变株。本方法实现了基因的快速体外进化，操作简单，特别适合于对基因内部引入丰富的突变多样性，进行快速定向进化。
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公开(公告)号：CN106282084A
公开(公告)日：2017-01-04
申请号：CN201610865126.4
申请日：2016-09-29
Applicant: 江南大学
CPC classification number: C12N9/0006 , C12N15/74 , C12N2800/101 , C12P7/60 , C12Y101/99012 , C12Y101/99032
Abstract: 本发明公开了一种生产2-酮基-L-古龙酸的氧化葡萄糖酸杆菌的基因工程菌，属于代谢工程领域。本发明采用分子生物学手段引入sdh、sndh，并通过SH3lig和SH3支架结构使SDH和SNDH空间位置上接近并调节两酶比例，从而实现山梨醇通过氧化葡萄糖酸杆菌生产2-KLG，简化了2-KLG生产工艺，摇瓶水平2-KLG产量最高可达45.39g·L-1，具有很好的应用前景。
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公开(公告)号：CN106222190A
公开(公告)日：2016-12-14
申请号：CN201610722886.X
申请日：2016-08-25
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种枯草芽孢杆菌对数期表达系统，属于基因工程领域。本发明的表达系统包括一种作为宿主的枯草芽孢杆菌和一种对数期启动的质粒表达载体。重组菌进行培养的过程中，只有进入对数期以后，且在稳定期之前，质粒上携带的目的基因才表达。利用本发明表达系统表达了角蛋白酶基因(ker)，通过发酵培养，与利用传统的强启动系统相比，菌体浓度和角蛋白酶活分别提高10.4～15.2％和27.8～41.5％。
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公开(公告)号：CN106148265A
公开(公告)日：2016-11-23
申请号：CN201610561891.7
申请日：2016-07-15
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种产硫酸软骨素裂解酶的重组枯草芽孢杆菌及其应用，属于生物工程技术领域。本发明将普通变形杆菌来源的硫酸软骨素裂解酶在枯草芽孢杆菌中进行异源表达，选取信号肽amyX，采用3种强组成型启动子和pP43NMK载体本身的强RBS，并加入组氨酸标签以利于后续纯化，实现了硫酸软骨素裂解酶在枯草芽孢杆菌中表达酶活的提高。本发明为食品级微生物高效生产制备硫酸软骨素裂解酶奠定了一定的基础，适合于工业化生产应用。
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公开(公告)号：CN104109658B
公开(公告)日：2016-06-29
申请号：CN201410359141.2
申请日：2014-07-25
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种肌酸水解酶及其编码基因和应用，属于生物医疗诊断技术领域。本发明提供的肌酸水解酶基因核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示，通过构建重组质粒pET20b-cre，该基因工程菌为将重组质粒转化入大肠杆菌E.coliBL21，得到高效表达肌酸水解酶的基因工程菌，应用该菌种可实现肌酸水解酶的高效生产。本发明中工程菌的成功构建为降低肌酸水解酶的生产成本和扩大应用范围奠定基础。
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