公开(公告)号：CN110256540A

公开(公告)日：2019-09-20

申请号：CN201910223870.8

申请日：2019-03-22

Applicant: 复旦大学

Inventor： 李继喜 ,  李正阳 ,  战博闻 ,  高宝才

IPC: C07K14/35 ,  C07K1/30 ,  C12N15/70

Abstract: 本发明属于生物技术领域，具体为结核分枝杆菌核糖体蛋白S7的表达纯化、晶体结构及其应用。本发明的蛋白S7含156个氨基酸，分子量约为17.6kDa，等电点约为10.56；在表达菌株Escherichia coli Rosetta(DE3)中具有高度可溶性表达，且纯度及均一性较好。所述核糖体蛋白S7通过X射线衍射的方法获得其三维结构，分辨率达到1.80Å，空间群为P212121。该结构整体上由6个α螺和2个β折叠组成，其中，由α螺旋1-α螺旋5组成的α螺旋束结构与其他核糖体上的其他蛋白具有相互作用，而连接在α3与α4之间的β发卡结构具有RNA识别的功能。该核糖体蛋白S7的三维结构在新型抗结核药物筛选中具有广泛的应用前景。

公开(公告)号：CN105175493B

公开(公告)日：2018-07-20

申请号：CN201510579526.4

申请日：2015-09-12

Applicant: 复旦大学

Inventor： 李继喜 ,  黄静

IPC: C07K5/103 ,  A61K38/07 ,  A61P25/28

Abstract: 本发明属于医药技术领域，具体为一种具有抑制Aβ聚集活性的多肽及其用途。本发明多肽包含下述氨基酸序列：Xaa1‑Xaa2‑Xaa3‑Xaa4，其中，Xaa1和Xaa3为相同的氨基酸，选自I或L;Xaa2选自Q或N;Xaa4选自A,C,D,E,F,G,H,K,M,P,R,S,T,V,W或Y。该多肽具有抑制Aβ的聚集活性，能有效的抑制阿尔茨海默症蛋白Aβ42,Aβ40的聚集，可用于制备Aβ聚集抑制剂，并用于制备阿尔茨海默症以及其他性质痴呆的治疗药物。本发明为治疗阿尔茨海默症提供了新的途径，因此具有广阔的医学应用前景。

公开(公告)号：CN106589104A

公开(公告)日：2017-04-26

申请号：CN201611212468.2

申请日：2016-12-25

Applicant: 复旦大学

Inventor： 李继喜 ,  段树燕 ,  纪锐 ,  陈子珺

IPC: C07K14/47 ,  C12N15/70 ,  C07K1/22 ,  C07K1/16 ,  C12N9/00 ,  C12N9/10 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明属于生物技术领域，具体为一种人源分子伴侣样蛋白及其表达纯化、晶体结构和应用。本发明的人源分子伴侣样蛋白Archease由179个氨基酸组成，分子量为20.7kDa；在大肠杆菌表达菌株Bl21(DE3)plus中可溶性表达且表达量较高。动态光散射表明Archease在结合RNA剪切连接酶辅因子GTP后粒径变大，与其功能发挥紧密相关。Archease的晶体结构分辨率为1.96Å。该结构由7个β折叠和4个α螺旋组成。Archease在辅助同一操纵子蛋白如RNA剪切连接酶、甲基转移酶发挥作用方面起到了重要的催化调节作用，是内质网应激蛋白XBP1 mRNA的成熟加工过程中所必需。解析Archease的三维晶体结构有助于阐明其作用机理，从而更好的发挥并拓宽其作用范围。

公开(公告)号：CN105132392A

公开(公告)日：2015-12-09

申请号：CN201510576927.4

申请日：2015-09-12

Applicant: 复旦大学

Inventor： 李继喜 ,  黄静

IPC: C12N9/18 ,  C12N15/70

CPC classification number: C12N9/18 ,  C12Y301/01001

Abstract: 本发明属于生物技术领域，具体为一种深海沉积物蛋白酯酶的表达纯化、晶体结构及其应用。所述酯酶EST22含344个氨基酸，分子量为36.75kDa；在表达菌株中高度可溶性表达，并且表现出良好的耐盐、耐碱性质。所述酯酶EST22的晶体结构分辨率达到1.4？。该结构由8个β折叠和15个α螺旋组成，其中，第188位丝氨酸，第287位天冬氨酸与第317位组氨酸所构成的催化三连体组成酶学活性中心。晶体结构中包含两个特异性产物分子对硝基苯酚（NPO），一个位于活性中心，另一个位于结构表面。该酯酶EST22的三维结构可在手性药物前体筛选、工业酶制剂中底物改造及提高酶活方面具有广泛的应用前景。

公开(公告)号：CN114634984A

公开(公告)日：2022-06-17

申请号：CN202210115084.8

申请日：2022-02-02

Applicant: 复旦大学

Inventor： 李继喜 ,  高文青 ,  李媛媛

IPC: C12Q1/6886 ,  C12Q1/6851 ,  G01N33/574 ,  G01N33/577 ,  G01N33/68 ,  A61K45/00 ,  A61K31/7105 ,  A61K47/60 ,  A61K47/54 ,  A61P35/00

Abstract: 本发明属于生物医药技术领域，具体为一种脑胶质瘤生物标记物MLKL基因及其应用。本发明研究表明：MLKL在脑胶质瘤中显著高表达；高表达的MLKL基因和蛋白与胶质瘤的不良预后相关；降低MLKL表达可明显抑制恶性胶质瘤细胞的生长；因而MLKL基因和其表达产物可作为预后评估和治疗效果的分子标志物；MLKL还可作为治疗胶质瘤的靶标。本发明还包括：脑胶质瘤诊断、筛查和/或预后的检测试剂盒，siRNA核酸‑脂质颗粒，MLKL基因表达抑制剂siRNA，GalNAc‑siRNA缀合物，以及它们在脑胶质瘤诊断、筛查和/或预后的检测中的应用。

公开(公告)号：CN111647577A

公开(公告)日：2020-09-11

申请号：CN202010442787.2

申请日：2020-05-22

Applicant: 复旦大学

Inventor： 李继喜 ,  陈子珺 ,  李正阳 ,  高文青

IPC: C12N9/14 ,  C12N15/70 ,  A61K38/46 ,  A61P35/00 ,  A61P31/14 ,  A61P31/16

Abstract: 本发明涉及来源于人体的DEAD-box RNA解旋酶DDX21的晶体结构和应用。所述RNA解旋酶DDX21包括野生型全长DDX21和DDX21解旋酶核心区域，均可结合三磷酸腺苷(ATP)和有效解旋双链RNA。DDX21解旋酶核心区域的晶体结构共有四套，RNA解旋的初始状态(DDX21-apo，分辨率，空间群为C2)，结合三磷酸腺苷(β，γ-亚氨基)三磷酸(AMPPNP)和ssRNA的解旋后状态(DDX21-AMPPNP-ssRNA， 分辨率；空间群为P21)，以及结合二磷酸腺苷(ADP)的水解后状态(DDX21-ADP， 分辨率；空间群为P21)，和一套解旋循环以外的结合单磷酸腺苷AMP的结构(DDX21-AMP， 分辨率；空间群为P21)。DDX21的晶体结构及其活性口袋，以及相关结合或作用位点，为抗肿瘤药物的筛选、设计和抗RNA病毒类药物的研发提供有效的结构基础，具有广泛的应用前景。

公开(公告)号：CN106676082B

公开(公告)日：2020-09-01

申请号：CN201611212469.7

申请日：2016-12-25

Applicant: 复旦大学

Inventor： 李继喜 ,  李正阳 ,  赵玉

IPC: C12N9/18 ,  C12N15/70

Abstract: 本发明属于生物技术领域，具体为一种一种来源于海洋细菌E4A9T的嗜低温蛋白酯酶E10及其表达纯化、晶体结构和应用。所述酯酶E10含205个氨基酸，分子量约为22.36kDa；在表达菌株BL21(DE3)中具有高度可溶性表达，嗜低温，并具有良好的耐盐、耐重金属性质。所述酯酶E10通过X射线衍射方法获得了其三维结构，分辨率达到1.9Å。该结构由5个β折叠、9个α螺和3个310‑螺旋组成，其中，第29位丝氨酸、第178位天冬氨酸与第181位组氨酸所构成的催化三连体组成酶学活性中心；第29位丝氨酸、66位甘氨酸及97位天冬酰胺共同组成氧离子通道。该酯酶E10的三维结构可在手性药物前体筛选、工业酶制剂中底物改造及提高酶活力方面具有广泛的应用前景。

公开(公告)号：CN106754831B

公开(公告)日：2020-07-28

申请号：CN201611238728.3

申请日：2016-12-28

Applicant: 复旦大学

Inventor： 李继喜 ,  申彦芳 ,  梅谱成

IPC: C12N9/42 ,  C12N15/56 ,  C12N15/70

Abstract: 本发明涉及生物技术领域，具体为一种深海细菌木糖苷酶CmXynB1及其表达纯化、晶体结构和应用。本发明涉及木糖苷酶基因CmXynB1来自深海细菌E4A9T，其含有485个氨基酸，分子量为53.35kDa，核苷酸序列如SEQ.ID.NO.1所示，其氨基酸序列如SEQ.ID.NO.2所示；在表达菌株中高度可溶性表达，并且表现出良好的耐盐、耐酸的性质。所述木糖苷酶CmXynB1的晶体结构分辨率达到1.8Å。该结构由22个β折叠和10个α螺旋组成，其活性中心是典型的(β/α)8桶型结构，但是在其碳末端由10个β折叠构成缩短的发夹结构，该发夹结构与其底物的作用密切相关。与水解酶家族GH39的结构相比，该木糖苷酶CmXynB1的三维结构可在糖苷类药物制备、工业酶制剂中底物改造及提高酶活方面具有广泛的应用前景。

公开(公告)号：CN110184254A

公开(公告)日：2019-08-30

申请号：CN201910215706.2

申请日：2019-03-21

Applicant: 复旦大学

Inventor： 李继喜 ,  李正阳 ,  鲍路瑶 ,  刘雪鹤

IPC: C12N9/16 ,  C12N15/55 ,  C12R1/01

Abstract: 本发明属于生物技术领域，具体为具有高耐碱性的酯酶突变体及其应用。本发明涉及通过定点突变的方法提高来源于海洋细菌Croceicoccusmarinus E4A9T的酯酶CrmE10耐碱性；由此获得具有高耐碱性的酯酶突变体。所述酯酶CrmE10与其同家族酯酶AlinE4具有相似的三维结构，但耐碱性差异较大。通过序列比对分析结合结构比对分析，找出了五个与耐碱性相关的氨基酸位点。使用定点突变的方法将这五个位点突变，可以提高酯酶CrmE10的耐碱性。本发明的酯酶突变体及能表达酯酶突变体的宿主菌可用于催化酯类水解中。

公开(公告)号：CN109913426A

公开(公告)日：2019-06-21

申请号：CN201910139184.2

申请日：2019-02-25

Applicant: 复旦大学

Inventor： 李继喜 ,  段树燕 ,  陈子珺 ,  李正阳 ,  纪锐

IPC: C12N9/00 ,  C12N15/70

Abstract: 本发明属于生物技术领域，具体为一种嗜热菌RNA连接酶RTCB在低温催化RNA连接和DNA环化中的应用。本发明包括：在70℃~37℃温度条件下，嗜热RTCB用于完成DNA环化激活反应，用于完成RNA环化的激活反应和RNA连接反应。本发明可应用于商业化生产，鉴于嗜热菌蛋白RTCB在纯化上的简便操作及广泛的温度适应性，将极大的拓阔其应用范围。在生物医药工业领域具有广泛的应用前景。