新型重组人组织因子途径抑制物活性肽及其制备方法

    公开(公告)号:CN1367176A

    公开(公告)日:2002-09-04

    申请号:CN01126949.9

    申请日:2001-10-08

    Applicant: 复旦大学

    Inventor: 马端 宋后燕

    Abstract: 本发明属生物技术领域,具体涉及具有抗凝和抗栓活性的重组人组织因子途径抑制物活性肽和制备方法及其应用。本发明根据对全长组织因子途径抑制物的结构及其生化特性的分析,设计了新型rhTFPI-AP1和rhTFPI-AP2结构。将突变后组织因子途径抑制物结构域1和结构域2基因与真核表达载体pPIC9K重组,转化甲醇营养型酵母GS115,筛选高表达工程菌。工程菌经发酵扩增,离心收集上清液,经三步法纯化rhTFPI-AP1和rhTFPI-AP2。所得产品冻干后,具有抗凝和抗栓活性,对于预防血栓性疾病的发生有明显的作用。

    重组纳豆激酶口服制剂及其制备方法和应用

    公开(公告)号:CN101314034B

    公开(公告)日:2012-11-14

    申请号:CN200710041457.7

    申请日:2007-05-30

    Applicant: 复旦大学

    Abstract: 本发明属药剂学领域,具体涉及重组纳豆激酶特殊口服制剂的制备方法及其应用。本发明利用超临界CO2流体包衣技术,以异丁烯酸-丙烯酸乙酯共聚物(L100-55)为包衣材料包覆重组纳豆激酶药物颗粒,制成口服制剂,本发明所制备重组纳豆激酶制剂颗粒规则,表面光滑,外观均匀,无粘连,平均粒径在135±30μm,载药量、包封率高。通过实验,结果表明,本发明实现了重组纳豆激酶口服制剂的抵抗胃酸和缓释作用。

    一种体外诱导、分化胚胎干细胞的方法

    公开(公告)号:CN101768571B

    公开(公告)日:2012-06-06

    申请号:CN200910044958.X

    申请日:2009-01-07

    Applicant: 复旦大学

    Inventor: 宋后燕 周鸣鸣

    Abstract: 本发明属生物技术领域,涉及一种诱导分化细胞的方法。具体涉及一种胚胎干细胞体外诱导分化为肝细胞的方法。更具体地,本发明涉及小鼠胚胎干细胞体外经细胞因子和丁酸钠联合诱导高效分化为肝细胞的新方法。本发明方法经试验结果显示,其分化效率高达74%,分化效率高于现有技术文献报道的单纯以细胞因子为主或单纯以丁酸钠的诱导方法。

    一种测定人血浆和/或血清中重组双功能水蛭素的方法

    公开(公告)号:CN101162228B

    公开(公告)日:2011-02-16

    申请号:CN200710170415.3

    申请日:2007-11-14

    Applicant: 复旦大学

    Abstract: 本发明属医学检验领域,涉及体内药物的分析测定方法,具体涉及一种测定人血浆/血清中重组双功能水蛭素的分析方法。本方法采用超滤法分离蛋白,解决了水溶性的水蛭素和蛋白的分离问题;采用冷冻干燥技术,使血样中微量的水蛭素得以富集;采用质谱检测器,明显提高了检测的选择性和灵敏度;整个色谱分析过程时间为15min以内。本方法样品取样少,前处理简单、快速、灵敏,分析周期短,可使水蛭素测定的选择性提高,灵敏度提高两个数量级,适合于重组双功能水蛭素体内药物的浓度测定。本方法还可对游离重组双功能水蛭素的浓度进行测定。

    斑马鱼卵黄蛋白原-1基因调控序列

    公开(公告)号:CN1904048B

    公开(公告)日:2010-11-10

    申请号:CN200510028154.2

    申请日:2005-07-26

    Applicant: 复旦大学

    Inventor: 宋后燕 陈浩 杨健

    Abstract: 本发明属于生命科学领域。提供了序列1的斑马鱼卵黄蛋白原-1(vitellogeninl,vtgl)基因表达的调控序列。本发明利用转基因斑马鱼实验,证明该序列在斑马鱼体内具有启动子活性,能够在雌激素诱导下,启动下游基因在肝脏特异性表达。采用本发明提供的zfvtgl-1.7序列与报告基因(荧光蛋白)连接,可以在转基因斑马鱼的活体内观察荧光,从而快速直观地反映vtg1的表达。可以通过观察鱼体的荧光判断水体中是否存在雌激素样物质。本发明为构建检测雌激素水平的荧光斑马鱼奠定了基础。

    一种新型双功能水蛭素及其制备方法和应用

    公开(公告)号:CN1240719C

    公开(公告)日:2006-02-08

    申请号:CN01105798.X

    申请日:2001-03-28

    Applicant: 复旦大学

    Abstract: 本发明属生物技术领域,具体涉及一种兼具抗凝血酶活性和抗血小板聚集活性的双功能水蛭素(Bifunctional RecombinantHirudin)的蛋白质结构和制备方法及其应用。根据对野生型水蛭素的结构及其生化特性的分析,设计了新型双功能水蛭素分子结构。化学合成突变体基因,然后与真核表达载体pPIC9K重组,转化甲醇营养型酵母GS115,筛选高表达工程菌。工程菌经发酵扩增,离心收集上清液,经三步法纯化双功能水蛭素。所得产品冻干后,具有抗凝血酶活性并能显著抑制ADP诱导的血小板聚集,对于预防血栓性疾病的发生有明显的作用。

    新型重组人组织因子途径抑制物活性肽及其制备方法

    公开(公告)号:CN1176943C

    公开(公告)日:2004-11-24

    申请号:CN01126949.9

    申请日:2001-10-08

    Applicant: 复旦大学

    Inventor: 马端 宋后燕

    Abstract: 本发明属生物技术领域,具体涉及具有抗凝和抗栓活性的重组人组织因子途径抑制物活性肽的制备方法及其应用。本发明根据对全长组织因子途径抑制物的结构及其生化特性的分析,设计了新型rhTFPI-AP1和rhTFPI-AP2结构。将突变后组织因子途径抑制物结构域1和结构域2基因与真核表达载体pPIC9K重组,转化甲醇营养型酵母GS115,筛选高表达工程菌。工程菌经发酵扩增,离心收集上清液,经三步法纯化rhTFPI-AP1和rhTFPI-AP2。所得产品冻干后,具有抗凝和抗栓活性,对于预防血栓性疾病的发生有明显的作用。

    长效重组组织因子途径抑制物及其制备方法

    公开(公告)号:CN1528894A

    公开(公告)日:2004-09-15

    申请号:CN03151203.8

    申请日:2003-09-25

    Applicant: 复旦大学

    Abstract: 本发明属生物技术领域,具体涉及长效组织因子途径抑制物(LTFPI)及其制备方法和应用。本发明对组织因子途径抑制物(TFPI)及其受体低密度脂蛋白受体相关蛋白(LRP)的生物信息学和结构分子生物学分析和实验,确定了TFPI羧基末端与LRP结合并被清除的部位。设计了TFPI羧基末端突变体,通过PCR定点突变构建LTFPI基因后,与原核或真核表达载体重组,转化大肠杆菌或毕赤酵母,筛选高表达工程菌。原核工程菌经发酵扩增,破碎细菌,离心收集包涵体,复性后经分子筛和离子交换二步法纯化LTFPI;真核工程菌直接将上清进行二步纯化。获得的LTFPI半衰期明显延长,具有良好的抗凝功能。

    重组可溶性组织因子及其制备方法和应用

    公开(公告)号:CN1496992A

    公开(公告)日:2004-05-19

    申请号:CN01132127.X

    申请日:2001-11-06

    Applicant: 复旦大学

    Abstract: 本发明属生物技术领域,涉及重组可溶性组织因子(r-sTF)及其制备方法,和采用.r-sTF与磷脂等制备成新型凝血酶原时间(PT)检测试剂盒。本发明根据对全长组织因子的结构及其生化特性的分析,设计了新型r-sTF。将突变后可溶性组织因子基因与原核表达载体重组,转化大肠杆菌,筛选高表达工程菌,经发酵扩增,离心收集发酵工程菌后,匀浆泵破菌,离心收集包涵体,包涵体溶解,r-sTF复性后经一步法纯化r-sTF。所得产品与磷脂及Cd2+充分混匀,冻干后,与Ca2+制成PT检测试剂盒。

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