公开(公告)号：CN1528894A

公开(公告)日：2004-09-15

申请号：CN03151203.8

申请日：2003-09-25

Applicant: 复旦大学

Inventor： 马端 ,  宋后燕 ,  白浩 ,  张农

IPC: C12N15/12 ,  C12N15/63

Abstract: 本发明属生物技术领域，具体涉及长效组织因子途径抑制物(LTFPI)及其制备方法和应用。本发明对组织因子途径抑制物(TFPI)及其受体低密度脂蛋白受体相关蛋白(LRP)的生物信息学和结构分子生物学分析和实验，确定了TFPI羧基末端与LRP结合并被清除的部位。设计了TFPI羧基末端突变体，通过PCR定点突变构建LTFPI基因后，与原核或真核表达载体重组，转化大肠杆菌或毕赤酵母，筛选高表达工程菌。原核工程菌经发酵扩增，破碎细菌，离心收集包涵体，复性后经分子筛和离子交换二步法纯化LTFPI；真核工程菌直接将上清进行二步纯化。获得的LTFPI半衰期明显延长，具有良好的抗凝功能。

公开(公告)号：CN1245510C

公开(公告)日：2006-03-15

申请号：CN03151203.8

申请日：2003-09-25

Applicant: 复旦大学

Inventor： 马端 ,  宋后燕 ,  白浩 ,  张农

IPC: C12N15/12 ,  C12N15/63

Abstract: 本发明属生物技术领域，具体涉及长效组织因子途径抑制物(LTFPI)及其制备方法和应用。本发明对组织因子途径抑制物(TFPI)及其受体低密度脂蛋白受体相关蛋白(LRP)的生物信息学和结构分子生物学分析和实验，确定了TFPI羧基末端与LRP结合并被清除的部位。设计了TFPI羧基末端突变体，通过PCR定点突变构建LTFPI基因后，与原核或真核表达载体重组，转化大肠杆菌或毕赤酵母，筛选高表达工程菌。原核工程菌经发酵扩增，破碎细菌，离心收集包涵体，复性后经分子筛和离子交换二步法纯化LTFPI；真核工程菌直接将上清进行二步纯化。获得的LTFPI半衰期明显延长，具有良好的抗凝功能。