一种植物高效胞嘧啶单碱基编辑器及其构建与应用

    公开(公告)号:CN112266420B

    公开(公告)日:2022-08-09

    申请号:CN202011189809.5

    申请日:2020-10-30

    Abstract: 本发明提供了一种植物高效胞嘧啶单碱基编辑器及其构建与应用。该编辑器包含SpCas9变体融合蛋白PeCBE‑NG,从N端到C端,依次包含1个核定位bpNLS功能元件,1个脱氨酶eCBE功能元件,1个SpCas9变体Cas9n‑NG编码序列,2个串联的尿嘧啶糖基化酶抑制蛋白UGI功能元件,以及1个核定位bpNLS功能元件。相比现有植物胞嘧啶单碱基编辑器,本发明构建的胞嘧啶单碱基编辑器具有高效、无靶序列偏好性、编辑窗口适中、自靶向sgRNA效率低、脱靶效率低、以及广靶向识别NG‑PAM的特点,将有利于植物基因功能研究和作物遗传改良的发展,在植物单碱基替换与饱和突变筛选等方面具有广泛的应用前景。

    一种高效的大片段DNA合成与扩增的PCR引物、方法及应用

    公开(公告)号:CN113832147A

    公开(公告)日:2021-12-24

    申请号:CN202111051247.2

    申请日:2021-09-08

    Abstract: 本发明公开了一种高效、特异地合成与扩增大片段DNA的PCR引物、方法及应用。本发明通过特别设计扩增引物,在正向引物和反向引物5'端添加相同的任意短序列,使扩增序列的单链DNA末端形成反向重复序列并配对产生发夹结构,对引物二聚体和短小的非特异DNA片段的扩增有良好的抑制效果;而较大的目标DNA片段末端难以相互配对不产生发夹结构,因而可避免非特异产物的竞争而被高效地特异性扩增。进一步,本发明使用嵌套式交错变温内循环,可优化目标序列的不同GC含量区间的有效延伸,与上述抑制效果的倍加效应最终提高PCR的扩增效率和特异性;本发明可提高大片段DNA序列从头合成的能力,从不同物种的基因组等各种模板扩增大片段目标DNA,扩增的DNA片段可应用于载体克隆、表达和基因组测序等目的,在分子生物学、合成生物学和生物技术领域具有重要的应用价值。

    百草枯抗性基因EiKCS及其应用

    公开(公告)号:CN113755508A

    公开(公告)日:2021-12-07

    申请号:CN202110962351.0

    申请日:2021-08-20

    Abstract: 本发明公开了百草枯抗性基因EiKCS及其应用。本发明从具有百草枯抗性的牛筋草植株中发现了百草枯抗性基因EiKCS,并通过构建植物表达载体以及农杆菌介导的遗传转化与再生体系的构建,成功将EiKCS基因的表达载体转化至牛筋草和水稻中,发现EiKCS基因赋予其对百草枯的抗性,且抗性提升效果显著,同时还可以提高转基因植物的抗氧化能力。此外,本发明还发现EiKCS可以促进转基因植物中多胺的合成,通过调控植物多胺的代谢提高其对百草枯抗性,为培育抗除草剂的农作物品种提供了理论和技术基础。

    一种短小型小核RNA启动子及其构建方法和在基因组编辑中的应用

    公开(公告)号:CN111019946A

    公开(公告)日:2020-04-17

    申请号:CN201911338845.0

    申请日:2019-12-23

    Abstract: 本发明提供了一种短小型小核RNA启动子及其构建方法和应用。所述短小型小核RNA启动子的长度为150-300bp,3’端至5’端方向依次含有1个TATA box保守元件,1个USE保守元件,以及至少一个MSP保守元件。相比现有野生型小核RNA基因启动子,本发明所构建的短小型小核RNA启动子转录活性更强,具有明显更高的驱动sgRNA的编辑效率,而且长度较短,可以减少每个sgRNA表达盒的长度,提高多靶点sgRNA克隆构建载体的效率,利于进行多靶点多基因的同时编辑,在基因组编辑方面具有很好的应用前景。

    水稻mTERF转录终止因子基因V14及其应用

    公开(公告)号:CN107641152A

    公开(公告)日:2018-01-30

    申请号:CN201710954813.8

    申请日:2017-10-13

    Abstract: 本发明公开了一种水稻mTERF转录终止因子基因V14,其籼稻型V14-I的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示,编码的氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示;其粳稻型V14-J的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示,编码的氨基酸序列如SEQ ID NO:4所示;V14基因的正常表达保证了水稻叶绿体发育,V14-J和V14-I均能回复v14突变体白化表型;另外,V14是一个新的水稻响应环境温度基因,该基因可以调控水稻耐冷能力,所述基因对培育耐冷植物新品种,特别是培育耐冷水稻新品种具有重要意义;为水稻育种及发育机制研究提供了新的基因资源,在调控水稻籼稻耐冷方面具有应用价值。

    水稻杂种花粉育性基因及其应用

    公开(公告)号:CN101492682A

    公开(公告)日:2009-07-29

    申请号:CN200810132341.9

    申请日:2008-07-11

    Abstract: 本发明涉及植物基因工程技术领域,具体涉及水稻杂种花粉育性基因座Sa的2个命名为SaM和SaF的基因的分离克隆和应用。细菌双杂交实验证明籼稻和粳稻的SaM和SaF的特定等位基因编码的蛋白发生特异的相互作用。遗传分析和转基因功能互补实验表明,在杂种中杂合的SaM和来源于籼稻的SaF即3个等位基因的相互作用产生杂种花粉不育,缺少它们中的任何一个或抑制其表达时产生杂种亲和性即花粉可育。本发明还涉及利用所述基因培育水稻杂种育性亲和系的方法和应用,以及鉴定水稻杂种育性基因型的分子标记及其应用。

    一种在种子胚乳生产藏红花素的转基因育种方法

    公开(公告)号:CN118546994B

    公开(公告)日:2025-01-28

    申请号:CN202410782253.2

    申请日:2024-06-18

    Abstract: 本发明公开了一种在种子胚乳生产藏红花素的转基因育种方法。本发明根据水稻密码子偏好性,对玉米黄素前体合成相关基因CrtI、PSY、BHY、ORH、DXS、藏红花来源的CsCCD2L、CsUGT74AD1、CsUGT91P3、CsALDH3I1基因及栀子来源的GjCCD4a、GjUGT94E13、GjUGT74F8、GjALDH2C3基因进行优化,将优化所得玉米黄素前体合成相关基因分别与藏红花来源基因或栀子来源基因组合构建植物转化载体并转化水稻,获得能在水稻种子胚乳产藏红花素的转基因水稻,实现了藏红花素在水稻种子胚乳中的合成,其产品既可直接食用,也可作为藏红花素生产原料,有利于藏红花素的生产。

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