公开(公告)号：CN112359065A

公开(公告)日：2021-02-12

申请号：CN202010994864.5

申请日：2020-09-21

Applicant: 中国医学科学院血液病医院(中国医学科学院血液学研究所)

Inventor： 程涛 ,  张健萍 ,  傅雅文 ,  张孝兵 ,  杨智学 ,  张凤

IPC: C12N15/87 ,  C12N15/864 ,  C12N15/85 ,  C12N5/10

Abstract: 本发明提供了一种提高基因敲入效率的小分子组合物；所述小分子组合物包括非同源末端连接修复途径的抑制剂(NHEJ抑制剂)和组蛋白去乙酰化酶抑制剂(HDAC抑制剂)。最佳的小分子组合物为：M3814+Trichostatin A。本发明还提供了在人原代细胞中实现高效基因敲入的方法，所述方法包括：将基因组编辑组合物引入人原代细胞中，加入所述小分子组合物，使染色质结构松散并且抑制非同源末端连接，提高基因敲入效率。该方法的效率比采用CRISPR/Cas9等RNA引导的核酸内切酶的传统基因组编辑方法的效率显著更高。

公开(公告)号：CN110628816A

公开(公告)日：2019-12-31

申请号：CN201910863564.0

申请日：2019-09-12

Applicant: 中国医学科学院血液病医院(中国医学科学院血液学研究所)

Inventor： 程涛 ,  张健萍 ,  程新新 ,  赵梅 ,  李国华 ,  许静 ,  张凤 ,  张孝兵

IPC: C12N15/85 ,  C12N15/65 ,  C12N15/12 ,  A61K31/7105 ,  A61K48/00 ,  A61K31/675 ,  A61K31/573 ,  A61P7/04

Abstract: 本发明提供一种用于血友病A的双切供体，将BDDF8定位于肝细胞中高度表达的Alb位点，同源臂两侧还设有可被Cas9-sgAlb识别的sgAlb-PAM序列，高压尾静脉注射新型双切HDR供体质粒编码Cas9、sgAlb和pDonor的质粒后，1-2％的肝细胞在Alb位点精确整合了BDDF8。此外，联合使用免疫抑制剂使BDDF8在80％以上的小鼠中终生稳定表达。可以认为血友病A在大多数小鼠中得到了彻底治愈。

公开(公告)号：CN114621920B

公开(公告)日：2023-09-05

申请号：CN202210161500.8

申请日：2022-02-22

Applicant: 中国医学科学院血液病医院(中国医学科学院血液学研究所)

Inventor： 温伟 ,  张孝兵

IPC: C12N5/0783 ,  C12N5/0789

Abstract: 本发明公开了一种由造血干祖细胞向NK细胞分化的方法，在NK细胞分化阶段提高细胞分化培养基的渗透压。本发明方法通过对NK细胞分化过程中渗透压的调节，大幅度提高了NK细胞的生产比例和细胞总数，为后续的NK细胞分化和扩增提供了前期技术基础。同时，本发明方法的改造是在目前科研领域较为成熟的NK细胞分化方案的技术上进行的，技术改造操作简便，几乎不额外增加成本，在目前工业化NK细胞生产过程中具有较强的应用前景和显著的行业竞争力。

公开(公告)号：CN114621920A

公开(公告)日：2022-06-14

申请号：CN202210161500.8

申请日：2022-02-22

Applicant: 中国医学科学院血液病医院(中国医学科学院血液学研究所)

Inventor： 温伟 ,  张孝兵

IPC: C12N5/0783 ,  C12N5/0789

Abstract: 本发明公开了一种由造血干祖细胞向NK细胞分化的方法，在NK细胞分化阶段提高细胞分化培养基的渗透压。本发明方法通过对NK细胞分化过程中渗透压的调节，大幅度提高了NK细胞的生产比例和细胞总数，为后续的NK细胞分化和扩增提供了前期技术基础。同时，本发明方法的改造是在目前科研领域较为成熟的NK细胞分化方案的技术上进行的，技术改造操作简便，几乎不额外增加成本，在目前工业化NK细胞生产过程中具有较强的应用前景和显著的行业竞争力。

公开(公告)号：CN113025659A

公开(公告)日：2021-06-25

申请号：CN202110262182.X

申请日：2021-03-10

Applicant: 中国医学科学院血液病医院(中国医学科学院血液学研究所)

Inventor： 程涛 ,  张健萍 ,  赵梅 ,  殷梦迪 ,  李斯昂 ,  赵娟娟 ,  许静 ,  杨智学 ,  张凤 ,  张孝兵

IPC: C12N15/864 ,  C12N5/10 ,  A61K48/00 ,  A61P7/04

Abstract: 本发明提供了一种治疗A型血友病的基因编辑系统及其应用，所述基因编辑系统包括CRISPR‑SaCas9基因编辑载体和F8供体载体；所述CRISPR‑SaCas9基因编辑载体包括串联的SaCas9编码基因和sgRNA，所述sgRNA的靶基因为Alb基因内含子；所述F8供体载体包括截短型F8基因。本发明利用腺相关病毒将SaCas9、sgRNA和BDDF8导入肝细胞，BDDF8通过NHEJ途径定点插入到Alb内含子位点，剪接形成Alb和BDDF8的融合转录本，自断裂多肽促使形成Alb和BDDF8蛋白两种蛋白，F8在小鼠中稳定表达一年，所述基因编辑系统无毒副作用，是潜在的A型血友病治疗药物。