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公开(公告)号：CN102747053A
公开(公告)日：2012-10-24
申请号：CN201210257003.4
申请日：2012-07-24
Applicant: 浙江大学宁波理工学院
Abstract: 本发明公开了一种细胞色素P450BM-3变体酶及其编码基因和用途，该变体酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，它在细胞色素P450BM-3(F87V/A74G/L188Q)变体酶的基础上增加了三个突变位点，即第168位的天冬氨酸(GAT)突变为亮氨酸(CTT)，第435位的谷氨酸(GAA)突变为苏氨酸(ACG)，第445位的缬氨酸(GTG)突变为丙氨酸(GCG)。与父本酶和原始酶相比，本发明变体酶具有与底物更高的亲和力，催化吲哚生成靛蓝的效率更高。
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公开(公告)号：CN102747052A
公开(公告)日：2012-10-24
申请号：CN201210256898.X
申请日：2012-07-24
Applicant: 浙江大学宁波理工学院
Abstract: 本发明公开了一种细胞色素P450BM-3(L148S/Q229R)变体酶及其编码基因和用途，该变体酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，它在细胞色素P450BM-3(F87V/A74G/L188Q)变体酶的基础上增加了两个突变位点，即第148位的亮氨酸(L)突变为丝氨酸(S)，第229位的谷氨酰胺(Q)突变为精氨酸(R)。与父本相比较，本发明变体酶具有与底物更高的亲和力和热稳定性。
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公开(公告)号：CN107312787B
公开(公告)日：2020-04-14
申请号：CN201710586367.X
申请日：2017-07-18
Applicant: 浙江大学宁波理工学院
Abstract: 本发明公开了一种融合蛋白基因、工程菌及其在制备9α‑羟基‑雄烯二酮中的应用，其中，所述融合蛋白基因包括编码3‑甾酮‑9α‑羟基化酶的基因和编码细胞色素P450 BM‑3酶中黄素域的基因。本发明将3‑甾酮‑9α‑羟基化酶在大肠杆菌中异源表达，并通过基因重组技术，将3‑甾酮‑9α‑羟基化酶与细胞色素P450 BM‑3酶的黄素域进行融合表达，得到融合蛋白KshA‑P450，并使用含有该融合蛋白的重组工程菌催化底物雄烯二酮制备9α‑羟基‑雄烯二酮，不仅提高了比活力，同时也提高了转化率。
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公开(公告)号：CN103031323B
公开(公告)日：2014-10-08
申请号：CN201110297904.1
申请日：2011-09-30
Applicant: 浙江大学宁波理工学院
Abstract: 本发明涉及一种谷氨酸脱羧酶热稳定变体G56P基因，其核苷酸序列在第56位有定点突变。研究发现，此位点突变后得到的变体基因编码的谷氨酸脱羧酶的热稳定性有所增强。本发明通过在编码野生GAD酶基因基础上进行定点突变，提高了其对应变体酶在在60℃和70℃下的热稳定性。随着酶热稳定性的提高，在工业生产过程中可以采用更高的操作温度，以提高反应速率、增加底物溶解度，有利于利用该酶通过生物转化生产GABA。
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公开(公告)号：CN103789246A
公开(公告)日：2014-05-14
申请号：CN201410005932.5
申请日：2014-01-03
Applicant: 浙江大学宁波理工学院
Abstract: 本发明公开了一种透性化谷氨酸脱羧酶工程菌及其制备方法，所述方法包括：将已表达谷氨酸脱羧酶的谷氨酸脱羧酶工程菌菌体悬浮于水或缓冲液中，50～70℃处理5～40min后，收集菌体，得到所述的透性化谷氨酸脱羧酶工程菌；其中，所述的谷氨酸脱羧酶工程菌包括宿主细胞和转入宿主细胞的谷氨酸脱羧酶基因，所述的宿主细胞为大肠杆菌。本发明还提供了所述方法得到的透性化谷氨酸脱羧酶工程菌。本发明的方法，简便、成本低，易于操作，可有效提高菌体的谷氨酸脱羧酶表观催化活力。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN103773731A
公开(公告)日：2014-05-07
申请号：CN201410005648.8
申请日：2014-01-03
Applicant: 浙江大学宁波理工学院
Abstract: 本发明公开了一种提高谷氨酸脱羧酶重组工程菌表观催化活力的方法，包括：将谷氨酸脱羧酶重组工程菌接种至培养基中，振荡培养，获得种子液；将种子液接种至培养基中，振荡培养至OD600为0.6～0.8时，加入诱导剂进行诱导培养，加入诱导剂的同时向培养基中加入细胞壁合成抑制剂或者表面活性剂来干扰重组菌细胞壁或（和）细胞膜的合成，达到增强菌体通透性、提高菌体表观催化活力的目的；诱导培养结束后收集菌体，即得到表观催化活力提高的谷氨酸脱羧酶重组工程菌。本发明避免了常规菌体培养后再进行透性化处理所需的多步工艺步骤，为改善高谷氨酸脱羧酶重组工程菌表观催化活力提供一种简便、高效和低成本的方法。
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公开(公告)号：CN102925368B
公开(公告)日：2014-01-01
申请号：CN201210441085.8
申请日：2012-11-07
Applicant: 浙江大学宁波理工学院 , 宁波美诺华药业股份有限公司
Abstract: 本发明公开了一种可催化不对称还原反应的球孢白僵菌(Beauveriabassiana)，该菌株保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物保藏中心，保存号为：CGMCC NO.6345，保藏时间2012年7月12日。本发明的菌株可以表达高立体选择性的羰基还原酶，利用该菌株进行4-氯乙酰乙酸乙酯的全细胞催化时，产物中S-4-氯-3-羟基丁酸乙酯的对映体过量值达到100％e.e.；利用该菌株进行N，N-二甲基-3-氧代-3-(2-噻吩)-1-丙胺盐酸盐的全细胞催化时，产物中(S)-N，N-二甲基-3-羟基-3-(2-噻吩)-1-丙胺盐酸盐的对映体过量值达到100％e.e.。
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公开(公告)号：CN103013898A
公开(公告)日：2013-04-03
申请号：CN201210440849.1
申请日：2012-11-07
Applicant: 宁波美诺华药业股份有限公司 , 浙江大学宁波理工学院
Abstract: 本发明公开了一种表达羰基还原酶的重组工程菌及其应用，该工程菌包括宿主细胞和转入宿主细胞的重组载体，所述重组载体由原始载体及接入原始载体的目的基因构成，所述宿主细胞为大肠杆菌(Escherichiacoli)Rosetta(DE3)，所述的目的基因为羰基还原酶基因，碱基序列如SEQ ID NO.1所示。本发明重组工程菌羰基还原酶表达水平较高，利用诱导培养的菌体细胞将氮，氮-二甲基-3-氧基-3-(2-噻吩)-l-丙胺盐酸盐转化为(S)-氮，氮-二甲基-3-羟基-3-(2-噻吩)-l-丙胺；或将4-氯乙酰乙酸乙酯转化为(S)-4-氯-3-羟基丁酸乙酯，两种产物的光学纯度及转化率均较高。
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公开(公告)号：CN102925368A
公开(公告)日：2013-02-13
申请号：CN201210441085.8
申请日：2012-11-07
Applicant: 浙江大学宁波理工学院 , 宁波美诺华药业股份有限公司
Abstract: 本发明公开了一种可催化不对称还原反应的球孢白僵菌(Beauveriabassiana)，该菌株保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物保藏中心，保存号为：CGMCC NO.6345，保藏时间2012年7月12日。本发明的菌株可以表达高立体选择性的羰基还原酶，利用该菌株进行4-氯乙酰乙酸乙酯的全细胞催化时，产物中S-4-氯-3-羟基丁酸乙酯的对映体过量值达到100％e.e.；利用该菌株进行N，N-二甲基-3-氧代-3-(2-噻吩)-1-丙胺盐酸盐的全细胞催化时，产物中(S)-N，N-二甲基-3-羟基-3-(2-噻吩)-1-丙胺盐酸盐的对映体过量值达到100％e.e.。
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公开(公告)号：CN103773819B
公开(公告)日：2016-05-18
申请号：CN201410005905.8
申请日：2014-01-03
Applicant: 浙江大学宁波理工学院
Abstract: 本发明公开了一种生产乳酸同时耦合制备GABA的方法，包括：将米根霉接入发酵培养基中进行发酵，当发酵液的pH小于4.8时，向发酵液中加入谷氨酸脱羧酶、磷酸吡哆醛和L-谷氨酸钠，之后持续向发酵液中加入L-谷氨酸钠，利用谷氨酸脱羧酶催化谷氨酸生成GABA的活力，消耗环境中的H+，使发酵液的pH维持在4.8～6.0，达到解除酸抑制对乳酸发酵的抑制、实现乳酸与GABA的同时生产的目的。本发明为乳酸发酵提供了一种新的解除底物抑制的方法，并且在发酵过程中耦合产生功能化合物γ-氨基丁酸，不仅增加了乳酸的产量，而且提高了过程的经济性。
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