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公开(公告)号：CN106754479B
公开(公告)日：2019-11-08
申请号：CN201611053173.5
申请日：2016-11-24
Applicant: 浙江大学宁波理工学院
IPC: C12N1/20 , A61K35/747 , A61P19/06 , A23L33/135 , C12R1/225
Abstract: 本发明公开了一种弯曲乳杆菌及其应用，该菌株被命名为弯曲乳杆菌(Lactobacillus curvatus)5‑1，保藏号为CGMCC No.12891。该菌株具有高效降解嘌呤核苷的能力，同时可以耐受人体正常条件下的酸性环境和胆盐浓度，可以在肠道内分解摄入食物中的嘌呤核苷，从而减少小肠对嘌呤核苷的吸收。因此弯曲乳杆菌(Lactobacillus curvatus)5‑1是开发辅助治疗高尿酸血症的微生态菌剂的良好菌株。
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公开(公告)号：CN107312787B
公开(公告)日：2020-04-14
申请号：CN201710586367.X
申请日：2017-07-18
Applicant: 浙江大学宁波理工学院
Abstract: 本发明公开了一种融合蛋白基因、工程菌及其在制备9α‑羟基‑雄烯二酮中的应用，其中，所述融合蛋白基因包括编码3‑甾酮‑9α‑羟基化酶的基因和编码细胞色素P450 BM‑3酶中黄素域的基因。本发明将3‑甾酮‑9α‑羟基化酶在大肠杆菌中异源表达，并通过基因重组技术，将3‑甾酮‑9α‑羟基化酶与细胞色素P450 BM‑3酶的黄素域进行融合表达，得到融合蛋白KshA‑P450，并使用含有该融合蛋白的重组工程菌催化底物雄烯二酮制备9α‑羟基‑雄烯二酮，不仅提高了比活力，同时也提高了转化率。
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公开(公告)号：CN103789246A
公开(公告)日：2014-05-14
申请号：CN201410005932.5
申请日：2014-01-03
Applicant: 浙江大学宁波理工学院
Abstract: 本发明公开了一种透性化谷氨酸脱羧酶工程菌及其制备方法，所述方法包括：将已表达谷氨酸脱羧酶的谷氨酸脱羧酶工程菌菌体悬浮于水或缓冲液中，50～70℃处理5～40min后，收集菌体，得到所述的透性化谷氨酸脱羧酶工程菌；其中，所述的谷氨酸脱羧酶工程菌包括宿主细胞和转入宿主细胞的谷氨酸脱羧酶基因，所述的宿主细胞为大肠杆菌。本发明还提供了所述方法得到的透性化谷氨酸脱羧酶工程菌。本发明的方法，简便、成本低，易于操作，可有效提高菌体的谷氨酸脱羧酶表观催化活力。
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公开(公告)号：CN103773731A
公开(公告)日：2014-05-07
申请号：CN201410005648.8
申请日：2014-01-03
Applicant: 浙江大学宁波理工学院
Abstract: 本发明公开了一种提高谷氨酸脱羧酶重组工程菌表观催化活力的方法，包括：将谷氨酸脱羧酶重组工程菌接种至培养基中，振荡培养，获得种子液；将种子液接种至培养基中，振荡培养至OD600为0.6～0.8时，加入诱导剂进行诱导培养，加入诱导剂的同时向培养基中加入细胞壁合成抑制剂或者表面活性剂来干扰重组菌细胞壁或（和）细胞膜的合成，达到增强菌体通透性、提高菌体表观催化活力的目的；诱导培养结束后收集菌体，即得到表观催化活力提高的谷氨酸脱羧酶重组工程菌。本发明避免了常规菌体培养后再进行透性化处理所需的多步工艺步骤，为改善高谷氨酸脱羧酶重组工程菌表观催化活力提供一种简便、高效和低成本的方法。
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公开(公告)号：CN103773819B
公开(公告)日：2016-05-18
申请号：CN201410005905.8
申请日：2014-01-03
Applicant: 浙江大学宁波理工学院
Abstract: 本发明公开了一种生产乳酸同时耦合制备GABA的方法，包括：将米根霉接入发酵培养基中进行发酵，当发酵液的pH小于4.8时，向发酵液中加入谷氨酸脱羧酶、磷酸吡哆醛和L-谷氨酸钠，之后持续向发酵液中加入L-谷氨酸钠，利用谷氨酸脱羧酶催化谷氨酸生成GABA的活力，消耗环境中的H+，使发酵液的pH维持在4.8～6.0，达到解除酸抑制对乳酸发酵的抑制、实现乳酸与GABA的同时生产的目的。本发明为乳酸发酵提供了一种新的解除底物抑制的方法，并且在发酵过程中耦合产生功能化合物γ-氨基丁酸，不仅增加了乳酸的产量，而且提高了过程的经济性。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN104694524A
公开(公告)日：2015-06-10
申请号：CN201510097873.3
申请日：2015-03-05
Applicant: 浙江大学宁波理工学院
CPC classification number: C12N9/88 , C12P13/00 , C12Y401/01015
Abstract: 本发明公开了一种利用拉氏图信息制备谷氨酸脱羧酶突变体的方法及其突变体，该方法包括：构建谷氨酸脱羧酶的三维结构模型，进行二面角合理性评价，生成拉氏图，从拉氏图中确定处于构象不合理区的氨基酸残基位点；针对该位点设计定点突变引物，以谷氨酸脱羧酶基因为模板，进行定点PCR扩增，获得定点突变文库；从所述定点突变文库中筛选谷氨酸脱羧酶突变体。该方法通过拉氏图提供的结构信息对酶进行理性设计，并结合定点突变技术，有效提高突变概率，节省时间，提高实验效率，并筛选得到催化活力优于野生型酶的突变酶，该突变酶可提高催化L-谷氨酸或其钠盐生成γ-氨基丁酸的反应速率，有利于GABA的工业化生产。
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公开(公告)号：CN103773819A
公开(公告)日：2014-05-07
申请号：CN201410005905.8
申请日：2014-01-03
Applicant: 浙江大学宁波理工学院
Abstract: 本发明公开了一种生产乳酸同时耦合制备GABA的方法，包括：将米根霉接入发酵培养基中进行发酵，当发酵液的pH小于4.8时，向发酵液中加入谷氨酸脱羧酶、磷酸吡哆醛和L-谷氨酸钠，之后持续向发酵液中加入L-谷氨酸钠，利用谷氨酸脱羧酶催化谷氨酸生成GABA的活力，消耗环境中的H+，使发酵液的pH维持在4.8～6.0，达到解除酸抑制对乳酸发酵的抑制、实现乳酸与GABA的同时生产的目的。本发明为乳酸发酵提供了一种新的解除底物抑制的方法，并且在发酵过程中耦合产生功能化合物γ-氨基丁酸，不仅增加了乳酸的产量，而且提高了过程的经济性。
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公开(公告)号：CN107177642B
公开(公告)日：2019-10-29
申请号：CN201710438866.4
申请日：2017-06-12
Applicant: 浙江大学宁波理工学院
Abstract: 本发明公开了一种咪唑‑4‑乙酸的生物合成方法，该方法包括以下步骤：以L‑组氨酸为底物，在膜联L‑氨基酸脱氨酶的催化下，进行脱氨反应，得到含有中间产物3‑(4‑咪唑)‑2‑氧丙酸的反应液；向所述反应液中加入过氧化氢溶液，进行反应，反应结束后，得到咪唑‑4‑乙酸。本发明方法步骤简单，反应条件温和，原料来源广泛、生物催化剂易于制备、设备要求低，底物转化率高，且不需要使用有机溶剂和有毒试剂，相对于现有的化学法具有高效、成本低和环境友好的特点。
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公开(公告)号：CN103789246B
公开(公告)日：2016-08-17
申请号：CN201410005932.5
申请日：2014-01-03
Applicant: 浙江大学宁波理工学院
Abstract: 本发明公开了一种透性化谷氨酸脱羧酶工程菌及其制备方法，所述方法包括：将已表达谷氨酸脱羧酶的谷氨酸脱羧酶工程菌菌体悬浮于水或缓冲液中，50～70℃处理5～40min后，收集菌体，得到所述的透性化谷氨酸脱羧酶工程菌；其中，所述的谷氨酸脱羧酶工程菌包括宿主细胞和转入宿主细胞的谷氨酸脱羧酶基因，所述的宿主细胞为大肠杆菌。本发明还提供了所述方法得到的透性化谷氨酸脱羧酶工程菌。本发明的方法，简便、成本低，易于操作，可有效提高菌体的谷氨酸脱羧酶表观催化活力。
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公开(公告)号：CN105462949A
公开(公告)日：2016-04-06
申请号：CN201510952734.4
申请日：2015-12-17
Applicant: 浙江大学宁波理工学院
CPC classification number: C12N9/88 , C12P13/00 , C12Y401/01015
Abstract: 本发明公开了一种谷氨酸脱羧酶突变体及其制备方法和用途，该突变体的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示，核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明还公开了一种包含编码谷氨酸脱羧酶突变体基因的表达单元、重组质粒和转化子。本发明根据与嗜热古细菌(Thermococcus kodakarensis)GAD氨基酸序列的比对信息，采用定点突变的方法在短乳杆菌GAD对应的氨基酸位点引入脯氨酸残基，通过理性设计提高GAD的热稳定性，该突变酶在催化L-谷氨酸或其钠盐生成γ-氨基丁酸的过程中具有更好的热稳定性，有利于GABA的工业化生产。
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