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公开(公告)号：CN103642768A
公开(公告)日：2014-03-19
申请号：CN201310666412.4
申请日：2013-12-10
Applicant: 江南大学
CPC classification number: C12N9/18 , C12N15/815 , C12Y301/01072
Abstract: 本发明提出了一种源于Aspergillus usamii E001的新型乙酰木聚糖酯酶成熟肽cDNA序列的克隆及表达方法，其核苷酸序列为SEQ ID NO：1，相应的氨基酸序列为SEQ ID NO：2，相应的基因命名为Auaxe。本发明还公开了产乙酰木聚糖酯酶工程菌的构建以及重组乙酰木聚糖酯酶的高效表达方法，该酶能有效地消除乙酰基团对木聚糖酶作用时的空间阻碍作用，在提高纤维资源的生物降解性，开发为饲料酶制剂投入工业化生产及生物漂白等方面显示出良好的效果，具有较大的工业化生产潜力和经济价值。
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公开(公告)号：CN103642747A
公开(公告)日：2014-03-19
申请号：CN201310666356.4
申请日：2013-12-10
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种重组大肠杆菌表达羰基还原酶生物制备(R)-2-溴-1-(4-硝基苯基)乙醇的方法，及其在不对称还原制备(R)-2-溴-1-(4-硝基苯基)乙醇中的应用。以表达该羰基还原酶(CBR)基因的大肠杆菌BL21(pET28a-cbr)耦合葡萄糖脱氢酶(GDH)重组大肠杆菌BL21(pET28a-gdh)为催化剂，并添加少量NAD(P)H，在有机溶剂二甲基二甲胺／水两相反应体系中实现了不对称还原2-溴-4-硝基-苯乙酮高效制备(R)-2-溴-1-(4-硝基苯基)乙醇，摩尔转化率高于95％，产物的对映体过量(e.e.)>99％。
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公开(公告)号：CN103014040A
公开(公告)日：2013-04-03
申请号：CN201210562517.0
申请日：2012-12-24
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明提供了一种来源于细菌的耐热β-1，4-内切木聚糖酶(SyXyn11)基因的异源表达、活性测定及分析和酶学性质分析方法。EvXyn11TS是一种来源于细菌的极端耐热木聚糖酶突变体(GenBank登录号EU591743)，它的热稳定性非常好，具有适合于工业应用的理想特性。为实现EvXyn11TS在工业上的应用，将该耐热基因中的稀有密码子进行优化，并命名为Syxyn11，其核苷酸序列为SEQ ID NO：1，其氨基酸序列为SEQ ID NO：2。这为该基因的异源表达和工业化生产奠定了理论基础，有较大的工业化生产和应用潜力及经济价值，也为其它β-1，4-内切木聚糖酶的研究奠定了理论基础。
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公开(公告)号：CN102978224A
公开(公告)日：2013-03-20
申请号：CN201210562636.6
申请日：2012-12-24
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明提出了一种对来源于米曲霉Aspergillus oryzae的11家族的杂合木聚糖酶AEx11A进行耐热分析，通过对AEx11A结构的同源建模及其与AoXyn11A结构的比对，发现在AEx11A的N端引入了一个二硫键(Cys5-Cys32)。利用定点突变法将其5位的半胱氨酸突变为苏氨酸(C5T)，去除该二硫键，以探讨其对AEx11A热稳定性的影响，结果发现突变酶(AEx11AC5T)的Topt由突变前的75℃降为60℃、t1/270和t1/280分别由突变前的197和25min缩短为3.0和1.0min，说明N端二硫键对11家族木聚糖酶热稳定性有一定的影响。能为11家族木聚糖酶的热稳定机制的阐明、热稳定性蛋白工程的改造等奠定理论基础。
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公开(公告)号：CN102978223A
公开(公告)日：2013-03-20
申请号：CN201210562539.7
申请日：2012-12-24
Applicant: 江南大学
Abstract: 通过N端增加二硫键提高米曲霉木聚糖酶热稳定性的方法。本发明提出了一种新型的利用计算机技术与生物信息学方法对常温的木聚糖酶进行定向改造的方法，运用基因工程的方法构建具有高效表达能力的杂合木聚糖酶工程菌。将来源于米曲霉(Aspergillus oryzae)CICC 40186菌株的常温木聚糖酶基因进行热稳定性定向改造，获得了一种杂合木聚糖酶，其热稳定性有了一定的提高，相对于原酶而言活性没有降低，作为一种耐热型的酶制剂，该木聚糖酶具有较大的工业化生产潜力和经济价值。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN102703496A
公开(公告)日：2012-10-03
申请号：CN201210181371.5
申请日：2012-06-05
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明的目的是提供一种多克隆位点处包含多个单酶切位点的pPIC9K表达载体，该载体能能够适用于内部含有EcoR I、Avr II等酶切位点基因的表达。所述表达载体的特征在于，该表达载体的多克隆位点处添加了Afl II、BssH II、Spe I和Mlu I四个原pPIC9K载体没有的单酶切位点，pPIC9KD多克隆位点结构如图1所示。
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公开(公告)号：CN102703481A
公开(公告)日：2012-10-03
申请号：CN201210181374.9
申请日：2012-06-05
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明的目的是提供一种常温的木聚糖酶热稳定性改造、突变木聚糖酶工程菌构建以及突变木聚糖酶的高效表达的方法。根据来源于A.oryzae CICC 40186木聚糖酶AoXyn11A的空间结构设计突变S55R和N155D，得到突变木聚糖酶：AoXyn11AYQ，其成熟肽基因序列为SEQ ID NO：1，S55R和N155D可以形成一个跨二级结构的盐桥。实验结果表明突变后该酶热稳定性有了明显的提高，作为一种耐热型的酶制剂，该木聚糖酶具有较大的工业化生产潜力和经济价值。
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公开(公告)号：CN102690832A
公开(公告)日：2012-09-26
申请号：CN201210181446.X
申请日：2012-06-05
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明的目的是提供一种第10家族木聚糖酶Aus Xyn10A热稳定性改造及重组突变酶的高效表达和纯化方法。依据Aus Xyn10A(源于Aspergillus usamii E001)与耐热木聚糖酶(源于Thermotoga maritima)蛋白质序列比对结果，运用基因工程的方法将耐热酶的C末端序列融合到Aus Xyn10A的C末端。获得的突变酶命名为Aus Xyn10A’。实验结果表明突变后该酶的最适温度有了明显的提高，作为一种耐热型的酶制剂，该木聚糖酶具有较大的工业化生产潜力和经济价值。
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公开(公告)号：CN102559737A
公开(公告)日：2012-07-11
申请号：CN201110413170.9
申请日：2011-12-13
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明提供了一种重组人白细胞介素29(hIL-29)变异体的制备方法及表达重组hIL-29变异体的毕赤酵母工程菌。本发明的具体制备方法包括以下步骤：1)人工合成引物；2)从健康人外周血单个核细胞经反转录PCR得到hIL-29变异体的编码基因；3)构建含有hIL-29变异体编码基因的重组真核表达载体，融合于毕赤酵母表达调控元件获得重组毕赤酵母工程菌；4)培养重组毕赤酵母工程菌，于培养液添加甲醇诱导毕赤酵母工程菌表达重组hIL-29变异体；5)采用离子交换层析和分子筛层析从培养液上清纯化重组hIL-29变异体。本发明构建的重组毕赤酵母工程菌可进行高密度培养并且分泌型表达重组hIL-29变异体，适用于工业化制备重组人白细胞介素29变异体。
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公开(公告)号：CN102492707A
公开(公告)日：2012-06-13
申请号：CN201110410397.8
申请日：2011-12-12
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明提出了一种源自米曲霉(Aspergillus oryzae)CICC 40186的新型10家族木聚糖酶催化域基因cDNA序列的克隆及分析、质粒构建及表达方法，其核苷酸序列为SEQ ID NO：1。生物信息学分析表明该木聚糖酶催化域属于糖苷水解酶第10家族，命名为Aor Xyn10BC，其氨基酸序列为SEQ ID NO：2，相应的基因命名为Aor xyn10BC。这为该基因的异源表达和工业化生产奠定了理论基础。本发明还公开了木聚糖酶工程菌的构建以及重组木聚糖酶的高效表达和纯化的方法。作为一种新型酶制剂，该木聚糖酶具有较大的工业化生产和应用潜力及经济价值，也为其它木聚糖酶的研究奠定了理论基础。
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