公开(公告)号：CN102392037A

公开(公告)日：2012-03-28

申请号：CN201110410537.1

申请日：2011-12-12

Applicant: 江南大学

Inventor： 李剑芳 ,  赵顺阁 ,  邬敏辰 ,  唐存多 ,  魏喜换

IPC: C12N15/56 ,  C12N9/42 ,  C12N15/10 ,  C12N1/19 ,  C12N15/81 ,  C12R1/685 ,  C12R1/84

Abstract: 本发明提出了一种源自黑曲霉(Aspergillus niger)LW-1菌株的新型的酸性β-甘露聚糖酶基因完整mRNA和DNA序列的克隆方法，其核苷酸序列分别为SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2。生物信息学分析表明该木聚糖酶属于糖苷水解酶第5家族，命名为An Man5A，其氨基酸序列为SEQ ID NO：3，相应的基因命名为An man5A。本发明还公开了An Man5A工程菌的构建以及重组GS115/man5A的高效表达和纯化的方法，制备的重组Man5A的最适作用温度和pH分别为70℃和4.0，在pH 2.5-7.5、60℃以下稳定，具有较大的工业化生产潜力和经济价值。

公开(公告)号：CN102703496A

公开(公告)日：2012-10-03

申请号：CN201210181371.5

申请日：2012-06-05

Applicant: 江南大学

Inventor： 李剑芳 ,  魏喜换 ,  邬敏辰

IPC: C12N15/81 ,  C12N15/64 ,  C12N1/19

Abstract: 本发明的目的是提供一种多克隆位点处包含多个单酶切位点的pPIC9K表达载体，该载体能能够适用于内部含有EcoR I、Avr II等酶切位点基因的表达。所述表达载体的特征在于，该表达载体的多克隆位点处添加了Afl II、BssH II、Spe I和Mlu I四个原pPIC9K载体没有的单酶切位点，pPIC9KD多克隆位点结构如图1所示。

公开(公告)号：CN102994530A

公开(公告)日：2013-03-27

申请号：CN201210562538.2

申请日：2012-12-24

Applicant: 江南大学

Inventor： 李剑芳 ,  胡蝶 ,  汪俊卿 ,  魏喜换 ,  赵梅 ,  邬敏辰

IPC: C12N15/56 ,  C12N9/42 ,  C12N15/10 ,  C12R1/66

Abstract: 一种底物亲和力强的甘露聚糖酶的设计与制备。本发明提出了一种底物亲和力强的AusMan5AY111F与AusMan5AY115F突变酶的设计与构建的方法，通过序列同源性分析、同源建模、结合能的计算等最终确定突变位点，大引物PCR得到的相应的基因命名为Ausman5AY111F、man5AY115F。本发明还公开了突变酶工程菌的构建以及高效表达和纯化的方法，制备的突变酶具有底物亲和力强、催化效率高的特性，具有较大的工业化生产潜力和经济价值。

公开(公告)号：CN102559526A

公开(公告)日：2012-07-11

申请号：CN201110410598.8

申请日：2011-12-12

Applicant: 江南大学

Inventor： 李剑芳 ,  魏喜换 ,  赵顺阁 ,  邬敏辰 ,  殷欣

IPC: C12N1/19 ,  C12N15/81 ,  C12N9/42 ,  C12R1/84

Abstract: 本发明提供了一种新型的共表达源自黑曲霉(Aspergillus niger)LW-1的β-甘露聚糖酶基因和源自宇佐美曲霉(Aspergillus usamii)E001的β-1，4-木聚糖酶基因的工程菌GS115/man5A-xyn II的构建方法。所构建成的毕赤酵母共表达系统可用于的β-甘露聚糖酶和β-1，4-木聚糖酶的工业化生产。所制备的两种酶具有底物亲和力强、催化效率高的特性，具有较大的工业化生产潜力和经济价值。