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公开(公告)号：CN108018278B
公开(公告)日：2020-05-08
申请号：CN201810060068.7
申请日：2018-01-22
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种催化效率提高的D‑阿洛酮糖3‑差向异构酶突变体，属于酶工程技术领域。本发明提供的一种Dorea sp.DPEase的突变体酶A38E/G105A，其最适催化条件没有发生改变，在最适催化条件下，酶催化底物D‑果糖生成D‑阿洛酮糖的相对酶活则提高了38.6％，这一发现对于工业化制备D‑阿洛酮糖具有重要的研究价值。
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公开(公告)号：CN110684754A
公开(公告)日：2020-01-14
申请号：CN201911024030.5
申请日：2019-10-25
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种真菌毒素ZEN降解酶突变体及其应用，属于生物工程技术领域。本发明公开了来源于Gliocladium roseum MA918的玉米赤霉烯酮降解酶(简称ZENG酶)作为亲本，利用基因突变技术，第134位的组氨酸His和136位的丝氨酸Ser同时替换成苯丙氨酸Phe，得到双突变体H134F/S136F。最适催化条件下，酶在53℃保温2min后残余酶活提高了36％；保温5min后的残余酶活提高了33％；保温7min后残余酶活提高了12％。在58℃保温2min后残余酶活提高了34％，保温5min后的残余酶活提高了13％。
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公开(公告)号：CN110669745A
公开(公告)日：2020-01-10
申请号：CN201911023315.7
申请日：2019-10-25
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种热稳定性提高的玉米赤霉烯酮降解酶突变体及其应用，属于生物工程技术领域。本发明以氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示的玉米赤霉烯酮降解酶为亲本酶，将第134位的组氨酸His和136位的丝氨酸Ser同时替换成亮氨酸Leu，得到双突变体H134L/S136L。H134L/S136L在53℃保温2min后残余酶活提高了45％；保温5min后的残余酶活分别提高了38％；保温7min后残余酶活提高了38％。在58℃保温2min后残余酶活提高了41％，保温5min后的残余酶活提高了32％。这一发现对于制备高热稳定性的工业化玉米赤酶烯酮降解酶具有重要的应用价值。
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公开(公告)号：CN110396512A
公开(公告)日：2019-11-01
申请号：CN201910682366.4
申请日：2019-07-26
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种菊糖蔗糖酶突变体及其应用，属于酶工程领域。本发明首先对微生物Lactobacillus gasseri DSM 20604来源的菊糖蔗糖酶进行截断处理，在5’端和3’端分别截断411和702个核苷酸，得到氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示的中间序列，然后在SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列的基础上，将第288位的天冬氨酸Asp突变为谷氨酸Glu后得到突变体酶D288E，突变体酶D288E的总酶活为326U/mg，与野生菊糖蔗糖酶(248U/mg)相比提高了31.45％，这一发现对于工业化制备菊糖具有重要的研究价值。
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公开(公告)号：CN113652385B
公开(公告)日：2023-10-03
申请号：CN202110900124.5
申请日：2021-08-06
Applicant: 江南大学
IPC: C12N1/21 , C12N9/10 , C12N9/12 , C12N15/61 , C12N15/55 , C12N15/56 , C12N15/70 , C12P19/26 , C12P19/18 , C12R1/19
Abstract: 本发明公开了一种高产乳酰‑N‑四糖的微生物的构建方法及应用，属于微生物基因工程领域。本发明以前期构建完成的高效生产前体物质乳酰‑N‑三糖II的菌株为出发菌株，过表达合成乳酰‑N‑四糖的关键基因，使其拥有生产乳酰‑N‑四糖的合成能力。本发明通过筛选高效的β‑1,3‑半乳糖基转移酶基因，并合理设计在载体pCDFDuet‑1上共表达β‑1,3‑半乳糖基转移酶基因和强化UDP‑半乳糖途径关键基因UDP‑葡萄糖4差向异构酶基因(galE)，从而提高乳酰‑N‑四糖的合成，在摇瓶实验中，大肠杆菌生产乳酰‑N‑四糖的能力为3.04g/L，在3L发酵罐中，乳酰‑N‑四糖的产量达到25.49g/L，具备工业应用的前景。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN116790539A
公开(公告)日：2023-09-22
申请号：CN202310677702.2
申请日：2023-06-08
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种β‑(2,6)果聚糖蔗糖酶突变体的构建及应用，属于酶的基因工程技术领域。本发明将微生物Pseudomonas orientalis来源的β‑(2,6)果聚糖蔗糖酶作为亲本，构建了单点突变体酶R91T。突变体R91T催化蔗糖的聚合能力明显提高，在1h内将20％的蔗糖和20％的乳糖转化为低聚乳果糖的转化率可达40％，同时该突变体将30％蔗糖转化为高分子量果聚糖的转化率达49％。这一发现对于工业化制备低聚乳果糖，以及β‑(2,6)果聚糖蔗糖酶的工业化应用有重要的研究价值。
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公开(公告)号：CN116355819A
公开(公告)日：2023-06-30
申请号：CN202310187376.7
申请日：2023-03-01
Applicant: 江南大学
IPC: C12N1/21 , C12N15/53 , C12N15/61 , C12N15/56 , C12N15/55 , C12N15/54 , C12P19/26 , C12N15/70 , C12R1/19
Abstract: 本发明公开了高效合成乳酰‑N‑四糖的工程大肠杆菌的构建方法及应用，属于微生物代谢工程技术领域。通过CRISPR相关的转座酶系统(CRISPR‑associated transposases,MUCICAT))对大肠杆菌基因组进行多位点的基因编辑，实现大肠杆菌基因组不同拷贝数编码β‑1,3‑乙酰葡萄糖胺转移酶的基因整合，再引入β‑1,3‑半乳糖基转移酶，从而构建了多株生产乳酰‑N‑四糖的工程大肠杆菌，在摇瓶实验过程中，乳酰‑N‑四糖的摇瓶产量可以达到6.07g/L，为进一步工业化生产与合成其他复杂母乳寡糖奠定了基础。
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公开(公告)号：CN113201512B
公开(公告)日：2022-03-15
申请号：CN202110613892.2
申请日：2021-06-02
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种产蔗果三糖的菊糖蔗糖酶突变体，属于酶的基因工程技术领域。本发明将来源于微生物Lactobacillus reuteri 121的部分序列截断的菊糖蔗糖酶作为亲本，构建了单点突变体酶R425W。R425W显著改变了产物链长，使菊糖蔗糖酶失去合成多糖的能力，大量积累低聚果糖，尤其是蔗果三糖。经反应条件优化，R425W生产蔗果三糖的产量最高可达206g/L。生产条件为pH 6.5的磷酸盐缓冲液，45℃，700g/L的蔗糖，15μg/mL的加酶量，反应时间为36h。这一发现对于工业化制备蔗果三糖，以及菊糖蔗糖酶的工业化应用有重要的研究价值。
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公开(公告)号：CN113308456B
公开(公告)日：2022-03-04
申请号：CN202110496246.2
申请日：2021-05-07
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种热稳定性增强的D‑阿洛酮糖3‑差向异构酶突变体，属于酶的基因工程技术领域。本发明公开了以来源于微生物Thermoclostridium caenicola的D‑阿洛酮糖3‑差向异构酶作为亲本，将107位的甘氨酸Gly突变为脯氨酸Pro，155位的苯丙氨酸Phe突变为酪氨酸Tyr，162位的天冬氨酸Asp突变为苏氨酸Thr，70位的丙氨酸Ala突变为脯氨酸Pro，获得单点突变体酶G107P、F155Y、D162T、A70P和四点突变体酶G107P/F155Y/D162T/A70P，热力学和动力学稳定性得到了提高，在工业化制备D‑阿洛酮糖具有重要的应用价值。
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公开(公告)号：CN113512544A
公开(公告)日：2021-10-19
申请号：CN202110797099.2
申请日：2021-07-14
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种热稳定性提高的甘露糖异构酶突变体，属于酶的基因工程技术领域。本发明公开了来源于微生物Deltaproteobacteria bacterium的甘露糖异构酶作为亲本，利用基因突变技术，第37位的精氨酸替换成赖氨酸和第164位的甘氨酸替换成亮氨酸，得到双突变体R37K/G164L。在温度为60℃时，测得野生酶的半衰期为46.27min,突变体酶R37K/G164L的半衰期为185.83min，两点突变体R37K/G164L在60℃的半衰期为野生酶半衰期的4倍，突变体酶相对于野生酶热稳定性明显的提高。这一发现对于研究更多热稳定性甘露糖异构酶具有重要的研究价值。
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