公开(公告)号：CN113308449B

公开(公告)日：2022-09-27

申请号：CN202110701935.2

申请日：2021-06-24

Applicant: 江南大学

Inventor： 徐炜 ,  张文立 ,  张振霞 ,  光翠娥 ,  沐万孟

IPC: C12N9/16 ,  C12N15/55 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  A23L5/20 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了热稳定性提高的玉米赤霉烯酮内酯水解酶的突变体S162P及其应用，属于酶工程技术领域。本发明将来源于微生物GliocladiumroseumMA918的玉米赤霉烯酮内酯水解酶酶作为亲本，利用基因突变技术，将162位的丝氨酸(S)突变为脯氨酸(P)，获得单点突变体S162P。与野生酶相比，在原始催化活力未发生明显变化的基础上，突变体酶的热稳定性显著提升：突变体酶在50℃保温2min后残余酶活提高为野生酶的1.52倍；在48℃分别保温10min和20min后，仍具有约80％和58％的残余酶活，在48℃的半衰期也提高为野生酶的3.6倍。为实现ZEN内酯水解酶的工业化应用打下了一定的基础。

公开(公告)号：CN110684754A

公开(公告)日：2020-01-14

申请号：CN201911024030.5

申请日：2019-10-25

Applicant: 江南大学

Inventor： 沐万孟 ,  张文立 ,  徐炜 ,  张振霞

IPC: C12N9/16 ,  C12N15/55 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  A23K20/189 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种真菌毒素ZEN降解酶突变体及其应用，属于生物工程技术领域。本发明公开了来源于Gliocladium roseum MA918的玉米赤霉烯酮降解酶(简称ZENG酶)作为亲本，利用基因突变技术，第134位的组氨酸His和136位的丝氨酸Ser同时替换成苯丙氨酸Phe，得到双突变体H134F/S136F。最适催化条件下，酶在53℃保温2min后残余酶活提高了36％；保温5min后的残余酶活提高了33％；保温7min后残余酶活提高了12％。在58℃保温2min后残余酶活提高了34％，保温5min后的残余酶活提高了13％。

公开(公告)号：CN110669745A

公开(公告)日：2020-01-10

申请号：CN201911023315.7

申请日：2019-10-25

Applicant: 江南大学

Inventor： 沐万孟 ,  张文立 ,  张振霞 ,  徐炜

IPC: C12N9/16 ,  C12N15/55 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  A23L5/20

Abstract: 本发明公开了一种热稳定性提高的玉米赤霉烯酮降解酶突变体及其应用，属于生物工程技术领域。本发明以氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示的玉米赤霉烯酮降解酶为亲本酶，将第134位的组氨酸His和136位的丝氨酸Ser同时替换成亮氨酸Leu，得到双突变体H134L/S136L。H134L/S136L在53℃保温2min后残余酶活提高了45％；保温5min后的残余酶活分别提高了38％；保温7min后残余酶活提高了38％。在58℃保温2min后残余酶活提高了41％，保温5min后的残余酶活提高了32％。这一发现对于制备高热稳定性的工业化玉米赤酶烯酮降解酶具有重要的应用价值。

公开(公告)号：CN110684754B

公开(公告)日：2021-11-23

申请号：CN201911024030.5

申请日：2019-10-25

Applicant: 江南大学

Inventor： 沐万孟 ,  张文立 ,  徐炜 ,  张振霞

IPC: C12N9/16 ,  C12N15/55 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  A23K20/189 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种真菌毒素ZEN降解酶突变体及其应用，属于生物工程技术领域。本发明公开了来源于Gliocladium roseum MA918的玉米赤霉烯酮降解酶(简称ZENG酶)作为亲本，利用基因突变技术，第134位的组氨酸His和136位的丝氨酸Ser同时替换成苯丙氨酸Phe，得到双突变体H134F/S136F。最适催化条件下，酶在53℃保温2min后残余酶活提高了36％；保温5min后的残余酶活提高了33％；保温7min后残余酶活提高了12％。在58℃保温2min后残余酶活提高了34％，保温5min后的残余酶活提高了13％。

公开(公告)号：CN110669745B

公开(公告)日：2021-11-23

申请号：CN201911023315.7

申请日：2019-10-25

Applicant: 江南大学

Inventor： 沐万孟 ,  张文立 ,  张振霞 ,  徐炜

IPC: C12N9/16 ,  C12N15/55 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  A23L5/20

Abstract: 本发明公开了一种热稳定性提高的玉米赤霉烯酮降解酶突变体及其应用，属于生物工程技术领域。本发明以氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示的玉米赤霉烯酮降解酶为亲本酶，将第134位的组氨酸His和136位的丝氨酸Ser同时替换成亮氨酸Leu，得到双突变体H134L/S136L。H134L/S136L在53℃保温2min后残余酶活提高了45％；保温5min后的残余酶活分别提高了38％；保温7min后残余酶活提高了38％。在58℃保温2min后残余酶活提高了41％，保温5min后的残余酶活提高了32％。这一发现对于制备高热稳定性的工业化玉米赤酶烯酮降解酶具有重要的应用价值。

公开(公告)号：CN113308449A

公开(公告)日：2021-08-27

申请号：CN202110701935.2

申请日：2021-06-24

Applicant: 江南大学

Inventor： 徐炜 ,  张文立 ,  张振霞 ,  光翠娥 ,  沐万孟

IPC: C12N9/16 ,  C12N15/55 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  A23L5/20 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了热稳定性提高的玉米赤霉烯酮内酯水解酶的突变体S162P及其应用，属于酶工程技术领域。本发明将来源于微生物GliocladiumroseumMA918的玉米赤霉烯酮内酯水解酶酶作为亲本，利用基因突变技术，将162位的丝氨酸(S)突变为脯氨酸(P)，获得单点突变体S162P。与野生酶相比，在原始催化活力未发生明显变化的基础上，突变体酶的热稳定性显著提升：突变体酶在50℃保温2min后残余酶活提高为野生酶的1.52倍；在48℃分别保温10min和20min后，仍具有约80％和58％的残余酶活，在48℃的半衰期也提高为野生酶的3.6倍。为实现ZEN内酯水解酶的工业化应用打下了一定的基础。