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公开(公告)号：CN110396512A
公开(公告)日：2019-11-01
申请号：CN201910682366.4
申请日：2019-07-26
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种菊糖蔗糖酶突变体及其应用，属于酶工程领域。本发明首先对微生物Lactobacillus gasseri DSM 20604来源的菊糖蔗糖酶进行截断处理，在5’端和3’端分别截断411和702个核苷酸，得到氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示的中间序列，然后在SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列的基础上，将第288位的天冬氨酸Asp突变为谷氨酸Glu后得到突变体酶D288E，突变体酶D288E的总酶活为326U/mg，与野生菊糖蔗糖酶(248U/mg)相比提高了31.45％，这一发现对于工业化制备菊糖具有重要的研究价值。
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公开(公告)号：CN118792274A
公开(公告)日：2024-10-18
申请号：CN202411060047.7
申请日：2024-08-05
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明涉及一种酶活和热稳定性提高的菊糖蔗糖酶突变体及其应用，其菊糖蔗糖酶突变体是以来源于微生物Lactobacillus.mulieris UMB7800的菊糖蔗糖酶作为亲本，利用基因突变技术，将其250位的丙氨酸Ala替换成缬氨酸Val、将344位的丝氨酸Ser替换成天冬氨酸Asp、将434位的组氨酸替换成脯氨酸、将526位的谷氨酸替换成天冬氨酸、将531位的甘氨酸替换成脯氨酸而获得的，其氨基酸序列如SEQ ID No:1所示；本发明获得的菊糖蔗糖酶突变体在最适催化条件下催化底物蔗糖合成菊糖过程中，相对总酶活相较于未突变前提升了66％，55℃下半衰期约提高了4倍。
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公开(公告)号：CN116083409A
公开(公告)日：2023-05-09
申请号：CN202310160691.0
申请日：2023-02-23
Applicant: 江南大学 , 中国科学院天津工业生物技术研究所
Abstract: 本发明公开了一种酮糖3‑差向异构酶固定化酶的制备方法及其应用，属于固定化酶制备技术领域，本发明分为以下步骤：第一步，对阴离子交换树脂进行预处理；第二步，离子交换树脂吸附蛋白酶；第三步，加入戊二醛进行交联。本发明制备的固定化酶制备简单，价格低廉，反应条件简单温和。固定化提高了酶的相对活性和稳定性，制备得到的固定化酶结合牢靠，可进行多次酶催化反应。这一发现对于工业化制备D‑阿洛酮糖具有重要的研究价值。
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公开(公告)号：CN115960879A
公开(公告)日：2023-04-14
申请号：CN202310086878.0
申请日：2023-01-30
Applicant: 江南大学
IPC: C12N9/90 , C12N15/61 , C12N15/70 , C12N1/21 , C12P19/24 , C12P19/02 , C12Q1/533 , G01N21/35 , C12R1/19
Abstract: 本发明公开了一种D‑阿洛酮糖3‑差向异构酶突变体文库的高通量筛选方法及获得的突变体，属于酶工程技术领域。本发明所提供的高通量筛选方法是基于在酸性Si(IV)–Mo(Ⅵ)显色液中，D‑果糖可将黄色钼酸盐Mo(Ⅵ)还原，生成蓝色钼酸盐Mo(V/Ⅵ)，其颜色深浅在一定范围内与D‑果糖的含量成正比，且在相同浓度水平下，D‑阿洛酮糖不会干扰D‑果糖的测定。同时，本发明还提供了D‑阿洛酮糖3‑差向异构酶四点突变体，与该酶野生型相比，其在60℃下孵育1h后的残余酶活提升69.8％，最适温度提高5℃，在60℃下的半衰期值由0.64h增加到7.30h，因此其工业应用潜力得到明显提升。
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公开(公告)号：CN113215125B
公开(公告)日：2022-03-15
申请号：CN202110615300.0
申请日：2021-06-02
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种热稳定性和酶活提高的菊糖蔗糖酶突变体，属于酶的基因工程技术领域。本发明将来源于微生物Lactobacillus gasseri DSM 20604的菊糖蔗糖酶的截断酶作为亲本，构建了四点突变体酶A310E/S346A/I478M/A491S(简称M4)，并进一步截断N‑端33个氨基酸的突变体M4N‑33。M4N‑33在55℃的半衰期由原来的不足5min提高到大约10h，熔融温度由原来的55.00℃提高到61.27℃，最适反应温度由原来的55℃提高到60℃，在最适催化条件下的酶活提高了52％。这一发现对于工业化制备微生物菊糖及转糖苷酶的工业化应用有重要的研究价值。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN116790539A
公开(公告)日：2023-09-22
申请号：CN202310677702.2
申请日：2023-06-08
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种β‑(2,6)果聚糖蔗糖酶突变体的构建及应用，属于酶的基因工程技术领域。本发明将微生物Pseudomonas orientalis来源的β‑(2,6)果聚糖蔗糖酶作为亲本，构建了单点突变体酶R91T。突变体R91T催化蔗糖的聚合能力明显提高，在1h内将20％的蔗糖和20％的乳糖转化为低聚乳果糖的转化率可达40％，同时该突变体将30％蔗糖转化为高分子量果聚糖的转化率达49％。这一发现对于工业化制备低聚乳果糖，以及β‑(2,6)果聚糖蔗糖酶的工业化应用有重要的研究价值。
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公开(公告)号：CN113201512B
公开(公告)日：2022-03-15
申请号：CN202110613892.2
申请日：2021-06-02
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种产蔗果三糖的菊糖蔗糖酶突变体，属于酶的基因工程技术领域。本发明将来源于微生物Lactobacillus reuteri 121的部分序列截断的菊糖蔗糖酶作为亲本，构建了单点突变体酶R425W。R425W显著改变了产物链长，使菊糖蔗糖酶失去合成多糖的能力，大量积累低聚果糖，尤其是蔗果三糖。经反应条件优化，R425W生产蔗果三糖的产量最高可达206g/L。生产条件为pH 6.5的磷酸盐缓冲液，45℃，700g/L的蔗糖，15μg/mL的加酶量，反应时间为36h。这一发现对于工业化制备蔗果三糖，以及菊糖蔗糖酶的工业化应用有重要的研究价值。
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公开(公告)号：CN113215125A
公开(公告)日：2021-08-06
申请号：CN202110615300.0
申请日：2021-06-02
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种热稳定性和酶活提高的菊糖蔗糖酶突变体，属于酶的基因工程技术领域。本发明将来源于微生物Lactobacillus gasseri DSM 20604的菊糖蔗糖酶的截断酶作为亲本，构建了四点突变体酶A310E/S346A/I478M/A491S(简称M4)，并进一步截断N‑端33个氨基酸的突变体M4N‑33。M4N‑33在55℃的半衰期由原来的不足5min提高到大约10h，熔融温度由原来的55.00℃提高到61.27℃，最适反应温度由原来的55℃提高到60℃，在最适催化条件下的酶活提高了52％。这一发现对于工业化制备微生物菊糖及转糖苷酶的工业化应用有重要的研究价值。
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公开(公告)号：CN110396512B
公开(公告)日：2021-03-02
申请号：CN201910682366.4
申请日：2019-07-26
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种菊糖蔗糖酶突变体及其应用，属于酶工程领域。本发明首先对微生物Lactobacillus gasseri DSM 20604来源的菊糖蔗糖酶进行截断处理，在5’端和3’端分别截断411和702个核苷酸，得到氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示的中间序列，然后在SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列的基础上，将第288位的天冬氨酸Asp突变为谷氨酸Glu后得到突变体酶D288E，突变体酶D288E的总酶活为326U/mg，与野生菊糖蔗糖酶(248U/mg)相比提高了31.45％，这一发现对于工业化制备菊糖具有重要的研究价值。
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公开(公告)号：CN116376887A
公开(公告)日：2023-07-04
申请号：CN202310155281.7
申请日：2023-02-22
Applicant: 江南大学 , 中国科学院天津工业生物技术研究所
IPC: C12N9/90 , A23L33/125 , A21D2/18 , A21D13/062 , C12N15/61 , C12N15/70 , C12N1/21 , A61K38/52 , C12R1/19
Abstract: 本发明公开了一种高酶活D‑阿洛酮糖3‑差向异构酶突变体及其应用，属于酶的基因工程技术领域。本发明以来源于Thermoclostridium caenicola的D‑阿洛酮糖3‑差向异构酶作为亲本，利用基因突变技术，将第258位的半胱氨酸突变为组氨酸，获得单点突变体C258H，其酶活得到了提高，由野生型酶的242.4U/mg提高到387.8U/mg，增加了60.0％。这一发现对于工业化制备D‑阿洛酮糖具有重要的研究价值。
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