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公开(公告)号：CN112458034B
公开(公告)日：2023-01-24
申请号：CN202011420749.3
申请日：2020-12-08
Applicant: 南开大学
Abstract: 本发明公开了一种基因构建的重组大肠杆菌及生物合成6’‑唾液乳糖的方法，属于代谢工程领域。所述重组大肠杆菌是通过代谢工程的方法(包括删除竞争途径基因和表达关键途径基因)对大肠杆菌中6’‑唾液乳糖合成相关基因进行对应改造后得到的。利用该菌株进行摇瓶发酵24 h，可以得到4~5 g/L的6’‑唾液乳糖。该菌株能够协同利用葡萄糖和甘油碳源高效合成6’‑唾液乳糖。本发明构建的重组大肠杆菌具有广阔的应用前景，为生物法生成6’‑唾液乳糖提供了新的思路。
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公开(公告)号：CN112501096A
公开(公告)日：2021-03-16
申请号：CN202011421568.2
申请日：2020-12-08
Applicant: 南开大学
IPC: C12N1/21 , C12N15/70 , C07K14/245 , A61K39/108 , A61P31/04 , C12R1/19
Abstract: 本发明公开了一组肠道外致病大肠杆菌糖蛋白结合疫苗的基因工程大肠杆菌的构建及应用。基于CRISPR‑cas9删除E.coli K‑12 MG1655菌株中zwf、pfkB、lacZ、manA和pykA基因，构建能够协同利用葡萄糖和甘油的菌株，分别用于合成O抗原多糖和维持细菌生理代谢；进一步删除waaL、肠杆科共有抗原（ECA）和O16基因簇，构建底盘细胞为OSLA。分别导入O5和O7抗原合成基因簇，同时导入表达糖基转移酶以及载体蛋白，合成各血清型糖蛋白结合疫苗。纯化的糖蛋白经过动物免疫实验证实能够刺激小鼠产生具有保护性作用的抗体，保护率可以达到90%以上。本发明构建的重组大肠杆菌糖蛋白结合疫苗为抗肠道外致病大肠杆菌感染的免疫治疗提供了新的选择。
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公开(公告)号：CN112458034A
公开(公告)日：2021-03-09
申请号：CN202011420749.3
申请日：2020-12-08
Applicant: 南开大学
Abstract: 本发明公开了一种基因构建的重组大肠杆菌及生物合成6’‑唾液乳糖的方法，属于代谢工程领域。所述重组大肠杆菌是通过代谢工程的方法(包括删除竞争途径基因和表达关键途径基因)对大肠杆菌中6’‑唾液乳糖合成相关基因进行对应改造后得到的。利用该菌株进行摇瓶发酵24 h，可以得到4~5 g/L的6’‑唾液乳糖。该菌株能够协同利用葡萄糖和甘油碳源高效合成6’‑唾液乳糖。本发明构建的重组大肠杆菌具有广阔的应用前景，为生物法生成6’‑唾液乳糖提供了新的思路。
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公开(公告)号：CN106520645B
公开(公告)日：2019-07-16
申请号：CN201610851735.4
申请日：2016-09-27
Applicant: 南开大学
Abstract: 本发明公开了绞股蓝糖基转移酶的工程菌及其构建方法与应用。所述的绞股蓝糖基转移酶，可以催化原人参二醇合成稀有人参皂苷CK。其名称为UGTGp4。本发明同时也公开了合成稀有人参皂苷CK的方法与应用。本发明通过将来自于绞股蓝的糖基转移酶基因在大肠杆菌中异源表达，体外酶促反应进行了功能鉴定。对其产物进行ESI质谱和HPLC检测都显示有较高的信号。本发明所制备的人参皂苷具有得率高，副产物少，容易工业化生产等优点，为绞股蓝皂苷异源生物合成奠定了基础。
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公开(公告)号：CN106190937B
公开(公告)日：2019-05-14
申请号：CN201610562080.9
申请日：2016-07-18
Applicant: 南开大学
Abstract: 本发明公开了一种构建重组大肠杆菌生物合成2'‑岩藻乳糖的方法，其名称为E.coli‑XYY‑1，具有2'‑岩藻乳糖的合成途径，同时也公开了构建的方法。本发明同时克服了现有的技术难题，获得了一个高效的基因敲除方案；原始菌株在通过基因工程改造以后，除了生产2'‑岩藻乳糖外，没有改变菌株的其它特性，不影响发酵生产；该菌株采用的质粒为成熟的大肠杆菌质粒，因此在代谢过程中不影响细菌生长和正常代谢。本发明构建的重组大肠杆菌具有非常大的应用前景，为生物法生成2'‑岩藻乳糖糖提供了新的思路。
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公开(公告)号：CN106544310A
公开(公告)日：2017-03-29
申请号：CN201610851785.2
申请日：2016-09-27
Applicant: 南开大学
CPC classification number: C12N9/1048 , C12N15/70 , C12N2800/101 , C12P33/00 , C12P33/20
Abstract: 本发明公开了一种绞股蓝糖基转移酶的工程菌及其构建方法与应用。本发明公开的绞股蓝糖基转移酶，可以催化原人参二醇合成稀有人参皂苷CK。其名称为UGTGp3。本发明同时也公开了合成稀有人参皂苷CK的方法与应用。本发明通过将来自于绞股蓝的糖基转移酶基因在大肠杆菌中异源表达，体外酶促反应进行了功能鉴定。对其产物进行ESI质谱和HPLC检测都显示有较高的信号。本发明所制备的人参皂苷具有得率高，副产物少，容易工业化生产等优点，为绞股蓝皂苷异源生物合成奠定了基础。
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公开(公告)号：CN112501095B
公开(公告)日：2023-05-26
申请号：CN202011420762.9
申请日：2020-12-08
Applicant: 南开大学
Abstract: 本发明涉及一种生产3‑岩藻乳糖的基因工程菌及其构建方法与应用，所述基因工程菌为经过特定基因改造的大肠杆菌；使用该菌利用葡萄糖发酵生产3‑岩藻乳糖能够克服化学合成法反应条件苛刻、能耗大等不足；能够克服酶催化法存在的工艺复杂、生产成本高等不足。发酵48h后，3‑岩藻乳糖产量达到了5‑7g/L，具有非常大的应用前景，为生物法生成3‑岩藻乳糖糖提供了新的思路。
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公开(公告)号：CN108774628B
公开(公告)日：2022-03-25
申请号：CN201810705416.1
申请日：2018-07-02
Applicant: 南开大学
IPC: C12N1/21 , C12N15/70 , A61K39/108 , A61P31/04 , C12R1/19
Abstract: 本发明公开了一种合成致新生儿脑膜炎大肠杆菌糖蛋白结合疫苗的大肠杆菌工程菌及用途。涉及构建合成致新生婴儿脑膜炎大肠杆菌O1血清型糖蛋白结合疫苗细胞工厂的方法。它是利用酿酒酵母高效的同源重组效率，基于DNA Assembler的方法，构建O1抗原合成基因簇质粒。在大肠杆菌JM109中转化O1抗原合成基因簇穿梭质粒，通过脂多糖提取，凝胶电泳和银染鉴定质粒；在FLP‑FRT辅助下删除JM109中的waaL和wecA，排除原始不完整O抗原的干扰。改造pET28a(+)质粒，经诱导，合成糖蛋白结合疫苗，借助于AKTA Primeplus蛋白纯化工作站纯化糖蛋白并通过western‑blotting鉴定该糖蛋白。本发明构建的重组大肠杆菌为生物法合成糖蛋白结合疫苗提供了新的思路。
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公开(公告)号：CN106190938A
公开(公告)日：2016-12-07
申请号：CN201610562413.8
申请日：2016-07-18
Applicant: 南开大学
CPC classification number: C12N15/70 , C07K14/245 , C12N9/1085 , C12N9/1241 , C12N9/2402 , C12N9/2471 , C12N9/78 , C12N9/88 , C12N9/90 , C12N2800/101 , C12P19/00 , C12Y204/99 , C12Y205/01056 , C12Y207/0106 , C12Y207/07043 , C12Y302/01023 , C12Y305/99006 , C12Y501/03014
Abstract: 本发明公开了一种构建的重组大肠杆菌及生物合成3'-唾液乳糖的方法，其名称为E.coli-XYY，它具有3'-唾液乳糖的合成途径，同时也公开了构建的方法。本发明同时克服了现有的技术难题，获得了一个高效的基因敲除方案；原始菌株在通过基因工程改造以后，除了生产3'-唾液乳糖外，没有改变菌株的其它特性，不影响发酵生产；该菌株采用的质粒为成熟的大肠杆菌质粒，因此在代谢过程中不影响细菌生长和正常代谢。本发明构建的重组大肠杆菌具有很好的应用前景，为生物法生成3'-唾液乳糖提供了新的思路。
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