公开(公告)号：CN108774628B

公开(公告)日：2022-03-25

申请号：CN201810705416.1

申请日：2018-07-02

Applicant: 南开大学

Inventor： 王磊 ,  黄笛 ,  江小龙

IPC: C12N1/21 ,  C12N15/70 ,  A61K39/108 ,  A61P31/04 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种合成致新生儿脑膜炎大肠杆菌糖蛋白结合疫苗的大肠杆菌工程菌及用途。涉及构建合成致新生婴儿脑膜炎大肠杆菌O1血清型糖蛋白结合疫苗细胞工厂的方法。它是利用酿酒酵母高效的同源重组效率，基于DNA Assembler的方法，构建O1抗原合成基因簇质粒。在大肠杆菌JM109中转化O1抗原合成基因簇穿梭质粒，通过脂多糖提取，凝胶电泳和银染鉴定质粒；在FLP‑FRT辅助下删除JM109中的waaL和wecA，排除原始不完整O抗原的干扰。改造pET28a(+)质粒，经诱导，合成糖蛋白结合疫苗，借助于AKTA Primeplus蛋白纯化工作站纯化糖蛋白并通过western‑blotting鉴定该糖蛋白。本发明构建的重组大肠杆菌为生物法合成糖蛋白结合疫苗提供了新的思路。

公开(公告)号：CN108774628A

公开(公告)日：2018-11-09

申请号：CN201810705416.1

申请日：2018-07-02

Applicant: 南开大学

Inventor： 王磊 ,  黄笛 ,  江小龙

IPC: C12N1/21 ,  C12N15/70 ,  A61K39/108 ,  A61P31/04 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种合成致新生儿脑膜炎大肠杆菌糖蛋白结合疫苗的大肠杆菌工程菌及用途。涉及构建合成致新生婴儿脑膜炎大肠杆菌O1血清型糖蛋白结合疫苗细胞工厂的方法。它是利用酿酒酵母高效的同源重组效率，基于DNA Assembler的方法，构建O1抗原合成基因簇质粒。在大肠杆菌JM109中转化O1抗原合成基因簇穿梭质粒，通过脂多糖提取，凝胶电泳和银染鉴定质粒；在FLP-FRT辅助下删除JM109中的waaL和wecA，排除原始不完整O抗原的干扰。改造pET28a(+)质粒，经诱导，合成糖蛋白结合疫苗，借助于AKTA Primeplus蛋白纯化工作站纯化糖蛋白并通过western-blotting鉴定该糖蛋白。本发明构建的重组大肠杆菌为生物法合成糖蛋白结合疫苗提供了新的思路。

公开(公告)号：CN112501096A

公开(公告)日：2021-03-16

申请号：CN202011421568.2

申请日：2020-12-08

Applicant: 南开大学

Inventor： 王磊 ,  冯露 ,  黄笛 ,  刘斌 ,  江小龙

IPC: C12N1/21 ,  C12N15/70 ,  C07K14/245 ,  A61K39/108 ,  A61P31/04 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一组肠道外致病大肠杆菌糖蛋白结合疫苗的基因工程大肠杆菌的构建及应用。基于CRISPR‑cas9删除E.coli K‑12 MG1655菌株中zwf、pfkB、lacZ、manA和pykA基因，构建能够协同利用葡萄糖和甘油的菌株，分别用于合成O抗原多糖和维持细菌生理代谢；进一步删除waaL、肠杆科共有抗原（ECA）和O16基因簇，构建底盘细胞为OSLA。分别导入O5和O7抗原合成基因簇，同时导入表达糖基转移酶以及载体蛋白，合成各血清型糖蛋白结合疫苗。纯化的糖蛋白经过动物免疫实验证实能够刺激小鼠产生具有保护性作用的抗体，保护率可以达到90%以上。本发明构建的重组大肠杆菌糖蛋白结合疫苗为抗肠道外致病大肠杆菌感染的免疫治疗提供了新的选择。

公开(公告)号：CN112501096B

公开(公告)日：2023-12-29

申请号：CN202011421568.2

申请日：2020-12-08

Applicant: 南开大学

Inventor： 王磊 ,  冯露 ,  黄笛 ,  刘斌 ,  江小龙

IPC: C12N1/21 ,  C12N15/70 ,  C07K14/245 ,  A61K39/108 ,  A61P31/04 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一组肠道外致病大肠杆菌糖蛋白结合疫苗的基因工程大肠杆菌的构建及应用。基于CRISPR‑cas9删除E.coli K‑12 MG1655菌株中zwf、pfkB、lacZ、manA和pykA基因，构建能够协同利用葡萄糖和甘油的菌株，分别用于合成O抗原多糖和维持细菌生理代谢；进一步删除waaL、肠杆科共有抗原（ECA）和O16基因簇，构建底盘细胞为OSLA。分别导入O5和O7抗原合成基因簇，同时导入表达糖基转移酶以及载体蛋白，合成各血清型糖蛋白结合疫苗。纯化的糖蛋白经过动物免疫实验证实能够刺激小鼠产生具有保护性作用的抗体，保护率可以达到90%以上。本发明构建的重组大肠杆菌糖蛋白结合疫苗为抗肠道外致病大肠杆菌感染的免疫治疗提供了新的选择。