公开(公告)号：CN111699970A

公开(公告)日：2020-09-25

申请号：CN202010410106.4

申请日：2020-05-15

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 吴巨友 ,  汤超 ,  王鹏 ,  张绍铃 ,  齐开杰 ,  谢智华

IPC: A01H4/00

Abstract: 本发明公开一种梨幼胚培养方法，涉及梨(Pyrus bretschneideri)通过植物细胞培养技术培养离体胚，以破除梨种子休眠，实现较高的种子萌发率。该方法以梨未成熟幼胚或成熟幼胚为外植体，经过外植体消毒、幼胚培养、生根培养、炼苗移栽建立了梨离体幼胚的培养技术体系，以期为建立梨再生体系、利用基因工程和细胞工程改良梨品种奠定基础，该方法可以显著缩短育种进程，提高育种效率，开辟了一种新的育种途径。

公开(公告)号：CN115615785B

公开(公告)日：2024-06-14

申请号：CN202211079148.X

申请日：2022-09-05

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 吴巨友 ,  朱晓璇 ,  汤超 ,  王鹏 ,  张绍铃

IPC: G01N1/30 ,  G01N1/28

Abstract: 本发明公开了一种利用预换液技术提高梨花粉管细胞壁甲酯化果胶染色效果的方法，该方法包括采集花粉、花粉的体外培养、使用预换液技术对花粉进行固定和封闭、抗体孵育、观察及测定等步骤。该方法不涉及传统的染料与多糖共价结合的技术，而是使用预换液技术及抗体——抗原特异结合的原理对梨花粉管细胞壁甲酯化果胶进行染色，具有安全高效、特异性强、破损率低、易于观察等优点。该方法对梨花粉管的甲酯化果胶的检测，有助于梨花粉生活力的测定以及对花粉管生长代谢等生殖生理过程的研究，同时也为其他植物组织或花粉管甲酯化果胶染色提供方法参考。

公开(公告)号：CN117886908A

公开(公告)日：2024-04-16

申请号：CN202410049860.8

申请日：2024-01-13

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 吴巨友 ,  张婷 ,  汤超 ,  王鹏 ,  张绍玲

IPC: C07K14/415 ,  C12N15/29 ,  C12N15/70

Abstract: 本发明公开了一种梨DEFL27蛋白及其体外表达方法和应用，该梨DEFL27蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。设计引物克隆梨DEFL27蛋白的基因PbrDEFL27，构建大肠杆菌重组表达质粒PbrDEFL27‑PET30a；将构建的重组表达质粒PbrDEFL27‑PET30a转入大肠杆菌Rosetta(DE3)中，构建梨DEFL27重组表达菌株；对重组表达菌株进行蛋白诱导表达，用镍柱亲和层析的方法对表达粗蛋白进行初纯化；用蛋白超滤管对初纯化的DEFL27蛋白进行除盐纯化；而后用纯化得到的梨DEFL27蛋白处理梨花粉管。结果表明，该蛋白能够促进花粉管伸长以及花粉管尖端活性氧信号增强。

公开(公告)号：CN114908068A

公开(公告)日：2022-08-16

申请号：CN202210492980.6

申请日：2022-05-07

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 吴巨友 ,  曹鹏 ,  汤超 ,  吴潇 ,  王鹏 ,  张绍铃 ,  齐开杰 ,  谢智华 ,  孔佳君

IPC: C12N9/10 ,  C12N15/54 ,  C12N15/82 ,  C12N15/11 ,  A01H5/02 ,  A01H6/74

Abstract: 本发明属于植物基因工程技术领域，具体涉及梨胼胝质合成酶PbrCalS5及其编码基因和应用；所述胼胝质合成酶PbrCalS5，其为如下a）或b)中的任一种：a）其氨基酸序列如SEQ ID No.2所示；b）将SEQ ID NO.2的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且与植物合成胼胝质相关的蛋白质。本发明提供的梨胼胝质合成酶PbrCalS5基因，经生物学功能验证具有促进花粉管生长的作用；敲低表达所述的PbrCalS5能够显著降低花粉管细胞壁中胼胝质的含量，抑制花粉管生长；本发明提供的PbrCalS5促进植物花粉管生长，为梨的生产指导工作提供理论依据，有利于降低农业生产成本，提高经济效益。

公开(公告)号：CN113215126A

公开(公告)日：2021-08-06

申请号：CN202110539465.4

申请日：2021-05-18

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 张绍铃 ,  王利斌 ,  谢智华 ,  汤超 ,  张苏玲 ,  马敏 ,  张臻

IPC: C12N9/12 ,  C12N15/54 ,  C12N15/84 ,  C12N15/81 ,  C12N1/21 ,  C12N1/19 ,  A01H5/08 ,  A01H6/74 ,  C12R1/865

Abstract: 本发明公开了一种梨果实蔗糖非酵解型蛋白激酶1的β亚基及其应用，该种梨果实蔗糖非酵解型蛋白激酶1的β亚基PbrSnRK1β1是具有如SEQ ID NO.1所示氨基酸序列的蛋白质；本发明的PbrSnRK1β1具有减轻液泡酸性转化酶抑制因子的作用，转入植物中，可提高其对蔗糖利用效率。

公开(公告)号：CN108165539A

公开(公告)日：2018-06-15

申请号：CN201711323194.9

申请日：2017-12-13

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 张绍铃 ,  汤超 ,  吴巨友 ,  王鹏 ,  施冬青

IPC: C12N9/22 ,  C12N15/70 ,  C07K16/40

Abstract: 本发明公布了一种梨S7‑RNase蛋白的体外表达及其多克隆抗体的制备方法。通过设计引物克隆梨S7‑RNase基因；构建大肠杆菌重组表达载体S7‑cutSignalP‑pCold‑TF；将构建的重组表达载体S7‑cutSignalP‑pCold‑TF转化到大肠杆菌Rosetta(DE3)中，构建表达梨S7‑RNase蛋白的重组菌株；对重组菌株进行表达，并用镍柱亲和层析发纯化重组梨S7‑RNase蛋白；以纯化的重组梨S7‑RNase蛋白为抗原，采用常规多克隆抗体制备方法制备梨S7‑RNase多克隆抗体。通过本发明的方法，实现了梨S7‑RNase蛋白的体外表达并制备出了效价高、特异性好的梨S7‑RNase多克隆抗体，完全可以满足相关实验的需求。