公开(公告)号：CN103667334B

公开(公告)日：2015-12-09

申请号：CN201310542901.9

申请日：2013-11-05

Applicant: 华南农业大学

Inventor： 陈金顶 ,  马思思 ,  刘翠翠 ,  吴云燕 ,  王佳莹 ,  赵明秋

IPC: C12N15/74 ,  C12N1/21 ,  A61K39/10 ,  A61P31/04 ,  C12R1/01

Abstract: 本发明公开一株羊布鲁氏菌重组菌株M5-Δbp26-ΔznuA及制备方法与应用。本发明以羊布鲁氏菌M5基因组为模板，PCR得到znuA基因的上、下游同源臂，并将其连接，得到片段ΔznuA；将片段ΔznuA克隆至载体pRE112上，得到重组质粒pRE-ΔznuA；将该质粒导入羊布鲁氏菌M5-Δbp26细胞中，分别通过氯霉素和蔗糖选择培养基筛选，得到同源重组双交换子，为重组菌株M5-Δbp26-ΔznuA。该菌株较M5亲本菌株，生长特性一致，遗传稳定使其不易返祖，毒力小且免疫效果保持良好，并因bp26基因缺失标记可应用于区分检测自然感染或人工免疫。因此，该菌株可作为一种效果更佳的标记疫苗应用于临床。

公开(公告)号：CN103289986B

公开(公告)日：2015-09-30

申请号：CN201310153715.6

申请日：2013-04-27

Applicant: 华南农业大学

Inventor： 陈金顶 ,  王佳莹 ,  常艳 ,  赵明秋 ,  吴云燕

IPC: C12N15/09 ,  C12N1/21 ,  A61K39/10 ,  A61P31/04 ,  C12R1/01

Abstract: 本发明公开一种牛布鲁氏菌重组菌株S19-Δbp26-BL及其制备方法与应用。本发明以牛布鲁氏菌S19基因组DNA为模板，得到bp26基因的上游同源臂，BLS基因、L7/L12基因和bp26基因的下游同源臂；将前述基因片段依次连接，得到片段Δbp26-BL；分别对pRE112和Δbp26-BL双酶切，连接，得到自杀性同源重组质粒；将该质粒导入S19-Δbp26菌株的感受态细胞中，在氯霉素的选择压力下，得到同源重组单交换子，再将同源重组单交换子涂布于选择培养基上培养，获得牛布鲁氏菌重组菌S19-Δbp26-BL。该菌株具有良好的遗传稳定性，生长特性和毒力大小好，可作为一种标记疫苗株用于临床。