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公开(公告)号：CN114634920A
公开(公告)日：2022-06-17
申请号：CN202210300484.6
申请日：2022-03-24
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种产人源透明质酸酶PH20的重组毕赤酵母及其构建方法，属于基因工程技术领域。本发明通过对hPH20的C端结构域优化，结合N端蛋白标签融合策略，构建了一个hPH20突变体AP2‑△491C；利用整合型质粒pPIC9K和强启动子PAOX1实现了hPH20突变体在P.pastoris GS115中的诱导表达，经3‑L发酵罐培养，发酵液中酶活达到258.1U/L，是目前微生物表达系统发酵制备hPH20的最高水平。该突变体能够水解机体组织中的大分子HA，增加组织细胞膜渗透性，在促进药物扩散吸收、增强药效、降低眼压等临床医学方面具有应用价值。
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公开(公告)号：CN111304186B
公开(公告)日：2021-08-24
申请号：CN202010127050.1
申请日：2020-02-28
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种肝素C5异构酶高催化活性菌株的构建方法，属于生物工程技术领域。本方法首先选用大肠杆菌作为宿主菌，然后利用N端融合促溶标签的方法对C5异构酶进行表达优化，将优化后的C5蛋白序列进一步通过分子对接进行蛋白质工程改造，得到高活性的生产菌株。本发明首次采用微生物细胞表达106位氨基酸由缬氨酸突变为精氨酸后的C5，得到的酶催化活性为5.81U/mL，相比未突变前提高了141％，比酶活为145.14U/mg，相比未突变前提高了128％。
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公开(公告)号：CN113186143A
公开(公告)日：2021-07-30
申请号：CN202110400206.3
申请日：2021-04-14
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种产四氢嘧啶工程菌株的构建及优化的方法，属于生物工程技术领域。本发明提供了能够在低盐条件下生产四氢嘧啶的大肠杆菌工程菌ECT‑LA，该菌以大肠杆菌E.coli BL21(DE3)为基础，包含由T7启动子控制的四氢嘧啶合成基因簇ectABC及外源基因lysCC932T和asd，并优化了四氢嘧啶的制备方法。本发明构建的重组大肠杆菌以葡萄糖为底物，分批补料发酵56h后，四氢嘧啶产量可达60g/L。
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公开(公告)号：CN113046402A
公开(公告)日：2021-06-29
申请号：CN202011069389.7
申请日：2020-09-30
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种基于构建双功能酶合成PAPS的方法，属于生物技术领域。本发明首先对不同来源的ATP硫酸化酶和APS激酶进行优选，利用蛋白质融合技术，将优选所得的ATP硫酸化酶和APS激酶之间融合一段不同的蛋白接头(linker)，构建了双功能PAPS合酶。进一步对linker进行理性设计和改造，大大提高了转化效率，并简化了酶催化剂的获取，减少酶催化剂在制备过程中的损失。使得ATP转化率提高了25％，催化时间缩短59％。此外通过突变ATP硫酸化酶P环HRAH序列为HNGH和HAGH，进一步提高其酶活，使得PAPS的转化率可达48％。
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公开(公告)号：CN105802954B
公开(公告)日：2020-12-01
申请号：CN201610214900.5
申请日：2016-04-07
Applicant: 江南大学
IPC: C12N15/10
Abstract: 本发明公开了一种基于耐热DNA聚合酶和连接酶的体外快速无缝组装DNA的方法，属于基因工程技术领域。本发明在需要组装构建的目标片段两末端引入同源臂序列，采用热循环进行变性‑退火‑切割‑连接的方式，实现快速体外DNA组装构建。在2h内一次可以实现2‑6个片段的高效快速的无缝组装。此外，可通过在引物中引入兼并突变序列实现PCR扩增后获得含有不同突变区域的DNA片段，进而通过本组装方法实现对基因DNA的组装突变构建。本发明可用于常规的DNA重组构建，并实现高通量操作，特别适合于对酶基因和合成途径的体外高效进化改造上，引入丰富的组合突变多样性，进行快速定向进化和合成生物学操作。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN111621533A
公开(公告)日：2020-09-04
申请号：CN202010596134.X
申请日：2020-06-28
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种人工酶法高效生产硫酸软骨素A的方法，属于生物工程技术领域。本方法经过微生物异源表达了一个双功能蛋白软骨素4-O-磺基转移酶C4ST和芳基磺基转移酶AST IV，用于催化软骨素合成硫酸软骨素A，结合酶的定点突变和反应体系组分的优化，加速硫酸软骨素的合成效率。
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公开(公告)号：CN111518736A
公开(公告)日：2020-08-11
申请号：CN201911018182.4
申请日：2019-10-24
Applicant: 华熙生物科技股份有限公司 , 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种高效合成高纯度透明质酸及其寡聚糖的重组谷氨酸棒状杆菌，属于生物工程技术领域。本发明构建的重组谷氨酸棒状杆菌生产的透明质酸的产量达到40g/L，粗产品纯度达到95％。通过外源添加透明质酸水解酶并优化发酵条件，可以获得特定分子量的透明质酸寡糖，并实现透明质酸产量的进一步提升，使产量达到72g/L。本发明为微生物高效合成高纯度透明质酸奠定了坚实的基础，构建的重组谷氨酸棒状杆菌适合于工业化生产应用。
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公开(公告)号：CN107227284B
公开(公告)日：2020-06-09
申请号：CN201710390552.1
申请日：2017-05-27
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种发酵小分子透明质酸的重组兽疫链球菌，属于生物工程技术领域。本发明将水蛭来源的透明质酸酶在兽疫链球菌中进行异源表达，选取9种信号肽与透明质酸酶N端融合，并采用Pspac诱导型启动子和链球菌RBS，通过比较酶活，筛选合适的信号肽，实现了透明质酸酶在兽疫链球菌中的高效分泌表达，同时通过降解兽疫链球菌自身所产大分子透明质酸，获得了活性小分子透明质酸，并有一定的产量提升。本发明为微生物系统高效发酵制备小分子透明质酸奠定了基础，适合于工业化生产应用。
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公开(公告)号：CN106434509B
公开(公告)日：2019-10-25
申请号：CN201610890603.2
申请日：2016-10-12
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种提高大肠杆菌合成血红素的方法，属于代谢工程技术领域。本发明通过将来源大肠杆菌的血红素合成途径基因分成两个模块，利用拷贝数不同的质粒，将两个模块随机组合，在过量表达谷氨酰‑tRNA还原酶(hemA编码)、谷氨醛氨基转移酶(hemL编码)的基础上，强化了血红素合成途径。本发明构建的重组大肠杆菌工程菌E.coli DH5α：pUC19‑hemA‑hemL+pACYCDuet‑2‑hemB‑hemC‑hemD‑hemE+pRSFDuet‑2‑hemF‑hemG‑hemH摇瓶发酵培养48h，生产血红素0.56μM/OD细胞。本发明采用代谢工程策略，改造微生物菌株来合成目的产物血红素，为微生物法高效生产血红素奠定了一定基础。
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公开(公告)号：CN106222190B
公开(公告)日：2019-10-25
申请号：CN201610722886.X
申请日：2016-08-25
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种枯草芽孢杆菌对数期表达系统，属于基因工程领域。本发明的表达系统包括一种作为宿主的枯草芽孢杆菌和一种对数期启动的质粒表达载体。重组菌进行培养的过程中，只有进入对数期以后，且在稳定期之前，质粒上携带的目的基因才表达。利用本发明表达系统表达了角蛋白酶基因(ker)，通过发酵培养，与利用传统的强启动系统相比，菌体浓度和角蛋白酶活分别提高10.4～15.2％和27.8～41.5％。
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