公开(公告)号：CN111304186A

公开(公告)日：2020-06-19

申请号：CN202010127050.1

申请日：2020-02-28

Applicant: 江南大学

Inventor： 康振 ,  陈坚 ,  王兵兵 ,  周正雄 ,  金学荣 ,  胥睿睿

IPC: C12N9/90 ,  C12N15/61 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种肝素C5异构酶高催化活性菌株的构建方法，属于生物工程技术领域。本方法首先选用大肠杆菌作为宿主菌，然后利用N端融合促溶标签的方法对C5异构酶进行表达优化，将优化后的C5蛋白序列进一步通过分子对接进行蛋白质工程改造，得到高活性的生产菌株。本发明首次采用微生物细胞表达106位氨基酸由缬氨酸突变为精氨酸后的C5，得到的酶催化活性为5.81U/mL，相比未突变前提高了141％，比酶活为145.14U/mg，相比未突变前提高了128％。

公开(公告)号：CN111304186B

公开(公告)日：2021-08-24

申请号：CN202010127050.1

申请日：2020-02-28

Applicant: 江南大学

Inventor： 康振 ,  陈坚 ,  王兵兵 ,  周正雄 ,  金学荣 ,  胥睿睿

IPC: C12N9/90 ,  C12N15/61 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种肝素C5异构酶高催化活性菌株的构建方法，属于生物工程技术领域。本方法首先选用大肠杆菌作为宿主菌，然后利用N端融合促溶标签的方法对C5异构酶进行表达优化，将优化后的C5蛋白序列进一步通过分子对接进行蛋白质工程改造，得到高活性的生产菌株。本发明首次采用微生物细胞表达106位氨基酸由缬氨酸突变为精氨酸后的C5，得到的酶催化活性为5.81U/mL，相比未突变前提高了141％，比酶活为145.14U/mg，相比未突变前提高了128％。