公开(公告)号：CN118240780A

公开(公告)日：2024-06-25

申请号：CN202410361186.7

申请日：2024-03-27

Applicant: 扬州大学

Inventor： 汤也 ,  武佳妍 ,  蒋蕙如 ,  聂雨晴 ,  叶建强 ,  谢泉 ,  邵红霞 ,  秦爱建 ,  万志敏 ,  李拓凡

IPC: C12N7/01 ,  C12N15/40 ,  C12N15/85 ,  C12N15/90 ,  C12N15/65 ,  C12N15/113 ,  C12R1/93

Abstract: 本发明涉及一种基于CRISPR‑Cas9技术的表达禽传染性法氏囊病毒新型变异株VP2蛋白的重组血清4型禽腺病毒及其构建方法，禽传染性法氏囊病毒新型变异株的VP2蛋白，其序列如SEQ ID NO.1所示；重组血清4型禽腺病毒，使用禽传染性法氏囊病毒新型变异株VP2基因替换血清4型禽腺病毒Fiber‑2基因，替换的是血清4型禽腺病毒Fiber‑2基因的838位核苷酸到1440位核苷酸，FAdV‑4的Fiber‑2基因序列如SEQ ID NO.2所示。本发明利用目前流行的血清4型禽腺病毒作为载体插入禽传染性法氏囊病毒新型变异株VP2基因，成功获得了表达禽传染性法氏囊病毒新型变异株VP2蛋白的重组血清4型禽腺病毒，为研发禽传染性法氏囊病毒和血清4型禽腺病毒的二联疫苗提供了技术支撑。

公开(公告)号：CN117778332A

公开(公告)日：2024-03-29

申请号：CN202311774416.4

申请日：2023-12-22

Applicant: 扬州大学

Inventor： 钱琨 ,  钱昊天 ,  秦爱建 ,  邵红霞 ,  武宗仪 ,  宋睿

IPC: C12N5/20 ,  C07K16/10 ,  G01N33/569 ,  G01N33/577 ,  G01N33/58

Abstract: 本发明公开了一种检测B组鸡星状病毒的双抗夹心ELISA方法，使用重组杆状病毒表达系统表达的B组CAstV的Cap蛋白作为免疫原，细胞融合后以感染B组CAstV的LMH细胞作为抗原用间接免疫荧光（IFA）的方法进行筛选，筛选出可以分泌与B组鸡星状病毒特异性结合的单克隆抗体的杂交瘤细胞。以单克隆抗体6H3作为捕获抗体结合在酶标板上，以HRP酶标的6C7作为二抗，建立了一种检测B组鸡星状病毒的双抗夹心ELISA试剂盒，大幅缩短了检测时间和技术要求，可以用于临床样本的检测，有很好的特异性和稳定性，为B组CAstV的临床诊断和流行病学调查提供了一种新的检测手段。

公开(公告)号：CN117603920A

公开(公告)日：2024-02-27

申请号：CN202311597478.2

申请日：2023-11-28

Applicant: 扬州大学

Inventor： 叶建强 ,  刘时 ,  汤也 ,  谢泉 ,  秦爱建 ,  邵红霞 ,  万志敏 ,  李拓凡

IPC: C12N7/01 ,  C07K14/075 ,  C12N15/85 ,  C12N15/64 ,  C12N15/34 ,  A61K39/235 ,  A61K39/295 ,  A61P31/20 ,  A61P1/16 ,  A61P9/00 ,  C12R1/93

Abstract: 本发明提供了一种表达血清11型禽腺病毒Fiber蛋白的重组血清4型禽腺病毒及其构建方法和应用，属于基因工程技术领域。本发明以FAdV‑4为病毒载体，通过CRISPR/Cas9技术和Cre‑loxP重组系统，构建一株靶向敲除FAdV‑4的Fiber‑2蛋白同时表达血清11型禽腺病毒Fiber蛋白的重组禽腺病毒。该重组禽腺病毒不仅能够稳定表达血清11型禽腺病毒Fiber蛋白，而且通过生长曲线测定较血清4型禽腺病毒复制快，效价高，有望对疫苗的生产减少成本。动物试验还表明灭活的重组禽腺病毒FAdV4‑F11能够有效诱导鸡体内针对血清11型禽腺病毒和FAdV4的中和抗体，为同时免疫防控血清4型禽腺病毒和血清11型禽腺病毒提供技术支撑和疫苗候选。

公开(公告)号：CN117511888A

公开(公告)日：2024-02-06

申请号：CN202311497753.3

申请日：2023-11-12

Applicant: 扬州大学

Inventor： 张俊 ,  叶建强 ,  谢泉 ,  邵红霞 ,  万志敏 ,  李拓凡 ,  秦爱建

IPC: C12N7/01 ,  C12N15/85 ,  C12N15/65 ,  C12N15/34 ,  A61K39/12 ,  A61K39/235 ,  A61K39/295 ,  A61P31/20 ,  C12R1/93

Abstract: 本发明涉及一种基于CRISPR‑Cas9技术的表达鸡传染性贫血病病毒T1P6毒株VP2蛋白的重组血清4型禽腺病毒及其制备方法，鸡传染性贫血病病毒T1P6毒株VP2蛋白，其序列如SEQ ID NO.1所示；重组血清4型禽腺病毒，其中使用鸡传染性贫血病病毒T1P6毒株含VP2基因的全编码区替换FAdV‑4的Fiber‑2基因，替换的是FAdV‑4的Fiber‑2基因的253位核苷酸到1440位核苷酸，FAdV‑4的Fiber‑2基因序列如SEQ ID NO.2所示。通过本发明，在血清4型禽腺病毒中寻找到合适的位置插入外源基因；同时利用CRISPR‑Cas9技术在血清4型禽腺病毒中插入含鸡传染性贫血病病毒VP2基因的全编码以及带有LoxP位点的RFP表达盒，利用RFP蛋白进行病毒的纯化，纯化完成后使用Cre重组酶敲除RFP表达盒，最后获得可以稳定表达鸡传染性贫血病病毒VP2蛋白的重组血清4型禽腺病毒。

公开(公告)号：CN117467620A

公开(公告)日：2024-01-30

申请号：CN202210896040.3

申请日：2022-07-27

Applicant: 扬州大学

Inventor： 秦爱建 ,  刘青 ,  吴少鹏 ,  钱琨 ,  邵红霞 ,  叶建强

IPC: C12N5/20 ,  C07K16/28 ,  A61K39/39 ,  A61K39/17 ,  A61P31/14 ,  A61P37/04

Abstract: 本发明公开了一种抗鸡细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4(CTLA‑4)单克隆抗体及其应用，抗鸡CTLA‑4的单克隆抗体，由保藏编号为CCTCCNO:C2022207的杂交瘤细胞株CTLA‑4‑3D7产生，该单克隆抗体能够特异性地识别pCAGGS‑CTLA‑4‑Flag真核表达系统和Bac‑to‑Bac系统中表达的CTLA‑4蛋白，与鸡的PBMC有较好的结合活性，与CD3+T淋巴细胞的结合率约为16％。本发明抗鸡CTLA‑4单克隆抗体通过干扰CTLA‑4负调节T淋巴细胞活化过程，从而增强机体抗病毒作用和提高疫苗的免疫效果，具有重要的应用价值。

公开(公告)号：CN112760320B

公开(公告)日：2023-11-28

申请号：CN202011394290.4

申请日：2020-12-02

Applicant: 扬州大学

Inventor： 金文杰 ,  朱亭帆 ,  钱金涵 ,  沈子君 ,  秦爱建 ,  邵红霞 ,  钱琨 ,  叶建强 ,  刘金彪 ,  王倩倩 ,  王建 ,  王姣 ,  柴文娴 ,  周小兵 ,  邓建中 ,  郑建高

IPC: C12N15/113 ,  C12N5/10 ,  A61K31/713 ,  A61P31/14

Abstract: 本发明属于基因工程和生物制品研究领域，具体涉及有效抑制猪流行性腹泻病毒(PEDV)复制的外源性人工miRNA，所述外源性人工miRNA是下述1)或2)的双链核苷酸：1)正义链和反义链的序列分别如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示；2)正义链和反义链的序列分别如SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示。与针对PEDV蛋白编码基因的siRNA相比，本发明筛选的针对病毒N基因保守序列的人工miRNA能抑制PEDV复制，不仅可作为抗PEDV的新型生物制剂进行开发，而且可用于抗病猪品系培育。

公开(公告)号：CN116463297A

公开(公告)日：2023-07-21

申请号：CN202310238092.6

申请日：2023-03-09

Applicant: 扬州大学

Inventor： 徐贞琦 ,  叶建强 ,  张俊 ,  谢泉 ,  郭艺文 ,  秦爱建 ,  邵红霞 ,  万志敏 ,  李拓凡

IPC: C12N7/01 ,  C12N15/40 ,  C12N15/85 ,  C12N15/65 ,  C12N15/113 ,  C12N15/90 ,  C12R1/93

Abstract: 本发明涉及一种表达鸡传染性贫血病病毒VP1蛋白的重组血清4型禽腺病毒及其制备方法,属于基因工程技术领域。本发明的关键技术是在血清4型禽腺病毒中寻找到合适的位置插入外源基因；同时利用CRISPR‑Cas9技术在血清4型禽腺病毒中插入鸡传染性贫血病病毒VP1基因以及带有LoxP位点的RFP表达盒，利用RFP蛋白进行病毒的纯化，纯化完成后使用Cre重组酶敲除RFP表达盒，最后获得可以稳定表达鸡传染性贫血病病毒VP1蛋白的重组血清4型禽腺病毒。本发明构建的表达鸡传染性贫血病病毒VP1蛋白的重组血清4型禽腺病毒，为血清4型禽腺病毒和鸡传染性贫血病病毒的联防联控提供了二联候选疫苗。因此，本发明具有良好的市场应用价值。

公开(公告)号：CN113061586B

公开(公告)日：2023-07-21

申请号：CN202110332476.5

申请日：2021-03-29

Applicant: 扬州大学

Inventor： 叶建强 ,  路浩 ,  谢泉 ,  连明君 ,  王伟康 ,  李拓凡 ,  秦爱建 ,  邵红霞

IPC: C12N7/01 ,  C12N15/861 ,  C12N15/113 ,  C12N15/34 ,  C12R1/93

Abstract: 本发明涉及表达血清8型禽腺病毒纤突蛋白重组血清4型禽腺病毒及其制备方法，发明的原理和最核心的关键技术是利用sgRNA，替换EGFP后进行病毒纯化，获得可以稳定扩增血清8型禽腺病的纤突蛋白的重组禽腺病毒。利用当下流行的血清4型禽腺病毒作为载体插入的血清8型禽腺病毒纤突蛋白基因F，成功获得了表达血清8型禽腺病毒纤突蛋白的重组FAdV‑4，在体外实验结果显示，FAdV4‑F1‑F‑F2重组病毒与FAdV‑4野毒的复制能力几乎相同，可作为防控FAdV‑4和FAdV‑8的灭活重组多价苗。

公开(公告)号：CN116359496A

公开(公告)日：2023-06-30

申请号：CN202211601049.3

申请日：2022-12-12

Applicant: 扬州大学

Inventor： 叶建强 ,  林昀 ,  张雯苑 ,  邵红霞 ,  秦爱建 ,  万志敏 ,  李拓凡 ,  谢泉 ,  钱琨 ,  金文杰

IPC: G01N33/569 ,  G01N33/535 ,  G01N33/58 ,  C12N15/70 ,  C12N15/34 ,  C07K16/08 ,  C12N5/20

Abstract: 一种基于Fiber‑2蛋白检测鸭3型腺病毒的双抗体夹心ELISA，包括:1)包被抗体：鸭3型腺病毒Fiber‑2蛋白的单克隆抗体，即捕获抗原的抗体；2)酶标二抗：酶标的鸭3型腺病毒Fiber‑2蛋白的单克隆抗体，即检测抗体；其中，包被抗体与酶标二抗是针对鸭3型腺病毒Fiber‑2蛋白的同一株单克隆抗体，由杂交瘤细胞株DAdV‑3‑Fiber‑2‑3D9分泌获得。通过本发明，建立的鸭3型腺病毒夹心ELISA检测方法快速、稳定、特异性高，使用本发明只需采集泄殖腔分泌物或其它含有鸭3型腺病毒的样品，即可快速准确地检测样品中是否含有鸭3型腺病毒。本发明适合应用于鸭群是否感染鸭3型腺病毒的大批量检测。

公开(公告)号：CN111875679B

公开(公告)日：2022-07-15

申请号：CN202010696824.2

申请日：2020-07-20

Applicant: 扬州大学

Inventor： 钱琨 ,  赵伟 ,  秦爱建 ,  武宗仪 ,  邵红霞

IPC: C07K14/08 ,  C07K16/10 ,  G01N33/569 ,  G01N33/543 ,  G01N33/535

Abstract: 本发明公开了一种CAstV‑Cap特异性多肽抗原、CAstV抗体、ELISA检测试剂盒及其应用，属于生物技术检测领域。本发明利用人工合成的3种CAstV‑Cap特异性偶联多肽抗原作为包被液快速检测CAstV抗体，有效提高多肽与目的抗体的结合效率，从而显著提高检测灵敏度，同时显著降低非特异背景读值，特异性高。本发明的CAstV抗体ELISA检测试剂盒具有操作简单、诊断速度快、成本低、在进行大规模检测中经济方便等优点，具有广泛的应用前景。