一种高效扩增J亚群禽白血病病毒的方法

    公开(公告)号:CN107603957A

    公开(公告)日:2018-01-19

    申请号:CN201710935163.2

    申请日:2017-10-10

    Applicant: 扬州大学

    Abstract: 本发明涉及一种高效扩增J亚群禽白血病病毒的方法,本发明采用鸡肝细胞可高效扩增J亚群禽白血病病毒,利用鸡肝细胞可以更早产生高滴度病毒的特性,缩短J亚群禽白血病病毒分离检测时间,实现提早检测到病原,提高J亚群禽白血病病毒检测方法的敏感度。在J亚群禽白血病病毒感染MOI为0.001时,ELISA检测感染维持培养3天的鸡肝细胞的效果与感染维持培养7天的DF-1细胞相当。本发明建立发高效扩增方法的将加快J亚群禽白血病病毒的净化进程,节约时间、成本,本发明在J亚群禽白血病病毒净化检测中具有很好的应用价值。

    一种GyV9环形病毒VP3蛋白制备方法

    公开(公告)号:CN106565829A

    公开(公告)日:2017-04-19

    申请号:CN201610937115.2

    申请日:2016-11-01

    Applicant: 扬州大学

    CPC classification number: C07K14/005 C12N15/70 C12N2750/10022 C12N2800/101

    Abstract: 本发明还提供了一种GyV9环形病毒VP3蛋白制备方法,该方法基于重组酶ExnaseTM II将线性化的pGEX‑6p‑1载体与GyV9病毒VP3基因片段PCR产物不经酶切连接反应,直接重组克隆技术;并转化到大肠杆菌,实现VP3蛋白表达;其中,PCR扩增所述的GyV9病毒VP3基因片段时所用引物的核苷酸序列如下:上游引物1:5’‑GTTCCAGGGGCCCATGGATGCGACGGGCAC‑3’;下游引物1:5’‑GTTTTCACCGTCATTACAATCTTGCGCCTT‑3’。该方法简化克隆过程,可快速构建GyV9病毒VP3基因的原核表达载体,实现VP3基因快速克隆表达。本发明获得的GyV9病毒VP3表达及纯化的蛋白,可直接提供VP3蛋白作为GyV9诊断抗原;作为免疫原获得抗VP3多克隆抗体;为开展GyV9流行病学调查提供有效诊断试剂;并为进一步探究VP3生物学功能具有重要意义。

    一种AGV2型环形病毒VP3可溶性蛋白及其制备方法

    公开(公告)号:CN105037503B

    公开(公告)日:2016-12-21

    申请号:CN201510357985.8

    申请日:2015-06-25

    Applicant: 扬州大学

    Abstract: 本发明公开了一种AGV2型环形病毒VP3可溶性蛋白及其制备方法。是利用pGEX-6p-1线性化载体以及AGV2病毒VP3基因片段的引物,利用重组酶ExnaseTM II不经酶切连接反应,直接在体外快速重组克隆VP3,转化大肠杆菌,经IPTG诱导表达、实现AGV2的VP3蛋白与GST的融合可溶性表达,并获得纯化的VP3可溶性蛋白。本发明获得的AGV2病毒VP3可溶性表达及纯化的蛋白,可直接提供VP3可容性蛋白作为AGV2诊断抗原;作为免疫原获得抗VP3多克隆抗体;为开展AGV2血清学流行病学调查及VP3功能研究提供有效免疫学试剂,填补国内外空白;并为进一步探究VP3生物学功能具有重要意义。

    检测布氏杆菌抗体的一种ELISA试剂盒的制备方法与应用

    公开(公告)号:CN103995123B

    公开(公告)日:2016-08-17

    申请号:CN201410266781.9

    申请日:2014-06-16

    Applicant: 扬州大学

    Abstract: 一种竞争ELISA试剂盒检测牛布氏杆菌病的方法,属于生物技术检测领域,将超声裂解处理的牛种布鲁氏菌A99包被ELISA酶标板;再将抗布鲁氏菌特异单克隆抗体bru?5C10和稀释的待检血清样品加入酶标板的板孔中;并同时分别将抗布鲁氏菌特异单克隆抗体bru?5C10分别和已知的阴、阳性血清加入酶标板的板孔中,水浴后用PBST洗涤,再向各板孔中分别加入抗小鼠IgG酶标抗体,孵育洗涤后,进行显色反应,测得各板孔的OD450值,计算各板孔的抑制率。本发明利用建立的cELISA方法对小肠结肠炎耶尔森菌O9和大肠杆菌O157高免阳性血清进行检测,PI值均低于30%,可以有效地排除假阳性结果的发生。

    双夹心ELISA检测禽网状内皮组织增生病病毒抗原试剂盒

    公开(公告)号:CN104330560B

    公开(公告)日:2016-07-06

    申请号:CN201410629638.1

    申请日:2014-11-11

    Applicant: 扬州大学

    Abstract: 双夹心ELISA检测禽网状内皮组织增生病病毒(REV)抗原的试剂盒,属于生物技术检测领域,该试剂盒用于REV P30蛋白抗原检测,最低可以检测到101.82个TCID50的REV HA1101或SNV病毒株所携带的P30抗原。本发明为临床REV抗原的快速检测提供了可靠手段。该试剂盒操作简便、快速,可以用于REV的检测,适用于基层各级兽医部门、出入境检验检疫、疫苗生产企业等REV快速大量检测。该方法所需成本低廉,经济效益显著、应用前景广泛。

    一种多肽抗原检测牛结核分枝杆菌抗体的ELISA试剂盒

    公开(公告)号:CN105527446A

    公开(公告)日:2016-04-27

    申请号:CN201610014747.1

    申请日:2016-01-11

    Applicant: 扬州大学

    CPC classification number: G01N33/68 G01N33/543 G01N33/5695 G01N2333/35

    Abstract: 一种多肽抗原检测牛结核分枝杆菌抗体的ELISA试剂盒,属于生物技术检测领域,本利用牛结核分支杆菌特异性多肽,体外人工合成作为抗原快速检测牛结核分枝杆菌的抗体。采用人工合成5种多肽抗原作为包被液,有效提高多肽与目标抗体的结合效率,从而显著提高可检测灵敏度,同时显著降低非特异背景读值,特异性高。本发明的牛结核分枝杆菌抗体ELISA检测试剂盒具有操作简单、诊断速度快、在进行大规模检测中经济方便等优点,是一种便于普及的好方法,具有广泛的应用前景。采用本发明的ELISA检测试剂盒检测牛结核分枝杆菌抗体,成本低,有利于推广使用。

    具有预防和治疗小鹅瘟作用的单克隆抗体

    公开(公告)号:CN104357402A

    公开(公告)日:2015-02-18

    申请号:CN201410607122.7

    申请日:2014-10-31

    Applicant: 扬州大学

    CPC classification number: Y02A50/407

    Abstract: 本发明公开了一种涉及两株能分泌具有预防和/或治疗作用的抗小鹅瘟病毒单克隆抗体杂交瘤细胞株,细胞株利用纯化的小鹅瘟病毒免疫小鼠制备得到,分别命名为GPV-Mab-6D8和GPV-Mab-4E7,细胞保藏编号分别为CGMCC NO.9577和CGMCC NO.9578。一种具有预防和治疗小鹅瘟作用的单克隆抗体,所述单克隆抗体由保藏编号CGMCC NO.9577和CGMCC NO.9578的杂交瘤细胞株分泌产生。本发明利用两株杂交瘤所制备的单克隆抗体不但可以在体外中和小鹅瘟病毒的感染,在动物实验中还能够预防和/或治疗小鹅瘟。

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