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公开(公告)号：CN112710832A
公开(公告)日：2021-04-27
申请号：CN202011533179.9
申请日：2020-12-22
Applicant: 扬州大学
IPC: G01N33/569 , G01N33/558 , G01N33/543
Abstract: 本发明提供了一种基于Fiber2蛋白的检测血清4型禽腺病毒的试纸条，涉及禽类疾病诊断技术领域，包括底板和依次搭建于底板上的样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜、吸收垫，所述金标垫上喷绘有金标抗体，所述硝酸纤维素膜上喷绘有检测线和质控线；所述金标抗体为杂交瘤细胞株5A3制备小鼠腹水后经Protein G柱进行IgG纯化后得到的金标的特异性识别血清4型禽腺病毒Fiber2蛋白的单克隆抗体5A3；所述检测线上喷绘有检测抗体，所述检测抗体为杂交瘤细胞株1D7制备小鼠腹水后经Protein G柱进行IgG纯化后得到的特异性识别血清4型禽腺病毒Fiber2蛋白的单克隆抗体1D7。采用本发明提供的试纸条能够准确地检测禽类是否感染FAdV‑4，准确率达到100％。
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公开(公告)号：CN112522447A
公开(公告)日：2021-03-19
申请号：CN202011574377.X
申请日：2020-12-28
Applicant: 扬州大学
IPC: C12Q1/70 , C12Q1/6851 , C12N15/11 , C12R1/93
Abstract: 本发明涉及一种鸡传染性贫血病病毒绝对荧光定量PCR检测方法，科学地设计特异扩增鸡传染性贫血病病毒病毒VP1基因片段的引物，然后通过使用TaKaRa公司的TB Green™Premix Ex Taq™II试剂来进行绝对荧光定量PCR方法的建立。根据鸡传染性贫血病病毒VP1基因的高度保守区，科学设计并合成了扩增片段大小为140bp的上下游引物，引物序列如下：上游引物为VP1‑F：5′‑GCCCCGGTACGTATAGTGTG‑3′；下游引物为VP1‑R：5′‑CCCGTACATGTGGTCTGCAT‑3′；本发明可用于企业对鸡传染性贫血病病毒疫苗污染残留及临床样品中低含量鸡传染性贫血病病毒的快速且特异的检测；可通过定量检测鸡传染性贫血病病毒含量情况，从而了解鸡传染性贫血病病毒在体内的变化规律等，为进一步探究鸡传染性贫血病病毒的分子生物学特征及制定有效防控策略提供了有效手段。
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公开(公告)号：CN111304172A
公开(公告)日：2020-06-19
申请号：CN202010098971.X
申请日：2020-02-18
Applicant: 扬州大学
Abstract: 本发明涉及到基于CRISPR-Cas9编辑技术的敲除鸡EphA2基因的细胞系的构建方法，本发明的原理和最核心的关键技术是科学合理的构建了靶向鸡EphA2基因的sgRNA，之后转染带有sgRNA和Cas9基因的lentiCRISPR v2质粒，利用CRISPR-Cas9系统达到基因沉默，通过药物筛选杀死阴性细胞，随后通过亚克隆的方法获得单克隆细胞株，从而获得鸡源EphA2敲除的细胞系。通过本发明，构建一种基于CRISPR-Cas9靶向敲除鸡EphA2基因的方法，及其靶向鸡EphA2基因的sgRNA，以期获得鸡源EphA2基因敲除的细胞模型，用于相关疾病的研究。本发明基于CRISPR-Cas9靶向敲除鸡EphA2基因的细胞系构建在相关领域未见报道，本发明将填补国内外相关技术的空白，具有较大的应用研究价值。
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公开(公告)号：CN110951761A
公开(公告)日：2020-04-03
申请号：CN201911343703.3
申请日：2019-12-24
Applicant: 扬州大学
Abstract: 本发明涉及一种检测鸡OASL启动子活性方法，设计扩增出OASL启动子片段的引物，利用限制性内切酶对OASL启动子部分基因片段和pGL3-basic载体进行双酶切，用T4连接酶连接，转化大肠杆菌，经PCR和测序验证后，获得pGL3-basic-OASL报告基因质粒，并用双荧光素酶报告基因试剂盒验证其功能。此发明可检测鸡OASL启动子活性，其具有快速简便、准确灵敏、便于高通量检测等显著优势，对监控禽源病毒对OASL启动子活性影响，以及OASL在不同类型禽源病毒致病过程所起作用具有重要应用价值，填补国内外空白。
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公开(公告)号：CN108107208B
公开(公告)日：2020-03-06
申请号：CN201711372077.1
申请日：2017-12-19
Applicant: 扬州大学
IPC: C07K14/075 , G01N33/569
Abstract: 本发明公开了一种基于F蛋白的检测血清8型禽腺病毒抗体的间接ELISA试剂盒，包括包被有血清8型禽腺病毒纤突蛋白基因F的表达蛋白的ELISA酶标板，阳性、阴性对照，HRP标记的兔抗鸡二抗，稀释液、显色液、洗涤液、终止液。本发明的ELISA试剂盒能特异性的检测出FAdV‑8抗体，而与抗流感病毒血清、抗马立克病毒血清、抗新城疫病毒血清、抗鸡传染性贫血病病毒血清、网状内皮细胞增生病病毒、抗血清4型禽腺病毒血清、抗减蛋综合征病毒血清以及SPF鸡血清不反应。因此，该试剂盒具有良好FAdV‑8的特异性，能用于FAdV‑8感染及免疫状况流行病学调查。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN110607402A
公开(公告)日：2019-12-24
申请号：CN201910961479.8
申请日：2019-10-11
Applicant: 扬州大学
IPC: C12Q1/70 , C12Q1/686 , G01N33/577
Abstract: 本发明涉及一种猪传染性胃肠炎病毒PLA检测试剂盒。所述试剂盒包括(1)两株生物素标记的抗体：抗TGEV抗体1A2、抗TGEV抗体2B1；(2)探针；(3)连接液；(4)PCR mix：Universal PCR Assay、2×Fast Master Mix。将两株生物素标记的针对猪传染性胃肠炎病毒SA蛋白的特异性单克隆抗体稀释到工作浓度、与探针孵育进行连接，最后采用实时定量PCR扩增目的单链DNA，成功检测到猪传染性胃肠炎病毒。本发明解决了现有技术时间长、工作量大、灵敏度低、非特异性、操作复杂等缺陷；具有不涉及放射性物质，试剂与样品消耗量小，灵敏度高，无需特殊设备，操作简单的优点。
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公开(公告)号：CN106995487B
公开(公告)日：2019-12-03
申请号：CN201710248386.1
申请日：2017-04-17
Applicant: 扬州大学
IPC: C07K14/01
Abstract: 本发明涉及一种源于鸡传染性贫血病毒(Chicken anemia virus,CAV)VP1‑aa 23‑43多肽作为高效细胞穿膜肽的应用。所述VP1‑aa 23‑43多肽序列如SEQ ID NO.2所示。该多肽可以携带FITC在30min内进入293T细胞、HCT‑116细胞、3T3细胞、MDCK细胞、MSB1细胞，而且穿膜效率与穿膜肽浓度呈正相关性，关键特点其可高效进入悬浮培养细胞。结合激光共聚焦显微镜和流式细胞术结果显示，鸡传染性贫血病毒VP1‑aa 23‑43多肽在10μM时具有比TAT短肽的穿膜效率高2倍多。
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公开(公告)号：CN109295010A
公开(公告)日：2019-02-01
申请号：CN201811178904.8
申请日：2018-10-10
Applicant: 扬州大学
Abstract: 本发明涉及一种利用鸡肝细胞进行坦布苏病毒高效扩增的方法，包括以下步骤：（1）细胞培养：将鸡肝细胞用含体积浓度为10%胎牛血清的DMEM-F12培养基进行培养，待细胞长满单层后，用PBS洗涤一遍后，以质量浓度为0.25%的胰酶进行消化、传代至细胞培养板中；（2）鸡肝细胞高效扩增坦布苏病毒：将鸡肝细胞接种至细胞培养板内培养，在汇合度为60%到70%时，将坦布苏病毒AHRD2018株接种鸡肝细胞，MOI为0.01，以2ml含体积浓度为2%胎牛血清的培养基培养4天，定时收集200μl上清冻存于-80℃冰箱备用，同时每孔补200μl含体积浓度为2%胎牛血清的培养基。本发明利用鸡肝细胞可以更早产生高滴度病毒的特性，利用病毒复制速率显著高于DF-1细胞和BHK-21细胞的鸡肝细胞来扩增坦布苏病毒。
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公开(公告)号：CN109096376A
公开(公告)日：2018-12-28
申请号：CN201811100656.5
申请日：2018-09-20
Applicant: 扬州大学
Abstract: 本发明涉及一类流感病毒HA多肽及其应用。流感病毒HA多肽，其氨基酸序列为SEQ ID NO.1、3、5、7、9。流感病毒HA蛋白KLH偶联多肽，其氨基酸序列为SEQ ID NO.2、4、6、8、10。多克隆抗体的制备方法，以SEQ ID NO.2、4、6、8、10中的任意一个作为免疫原，通过免疫小鼠获得抗HA蛋白helix A的C端具有交叉反应的多克隆抗体。本发明可直接提供流感病毒HA蛋白KLH偶联多肽作为免疫原获得抗HA蛋白helix A的C端具有交叉反应的多克隆抗体。本发明将为进一步探究基于C端helix-A多肽能否作为有效抗原表位，刺激机体产生中和抗体，评价其广谱流感多肽疫苗打下基础，提供了材料。
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公开(公告)号：CN109055613A
公开(公告)日：2018-12-21
申请号：CN201810981234.7
申请日：2018-08-27
Applicant: 扬州大学
IPC: C12Q1/70 , C12Q1/6844 , C12N15/11 , C12R1/93
CPC classification number: C12Q1/701 , C12Q1/6844 , C12Q2531/119 , C12Q2563/107
Abstract: 本发明属于动物传染病学检测领域，本发明公开了鸡Ⅰ型星状病毒环介导等温扩增检测引物组，根据鸡Ⅰ型星状病毒基因组保守序列设计引物：外引物F3和B3，序列如SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2所列；内引物FIP和BIP，序列如SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4所列。本发明还公开了鸡Ⅰ型星状病毒检测试剂盒，包括鸡Ⅰ型星状病毒环介导等温扩增检测引物组。本发明又公开了鸡Ⅰ型星状病毒环介导等温扩增检测方法：根据所设计的引物建立一种检测鸡Ⅰ型星状病毒的环介导等温扩增方法。本发明的检测方法具有快速、高效、特异性强、准确性好、灵敏度高、无需昂贵仪器设备，便于基层现场使用，方便快速。
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