公开(公告)号：CN111978401A

公开(公告)日：2020-11-24

申请号：CN202010799040.2

申请日：2020-08-11

Applicant: 扬州大学

Inventor： 陶建平 ,  李文静 ,  刘丹丹 ,  程振扬 ,  徐向东 ,  候照峰 ,  许金俊

IPC: C07K16/20 ,  C07K14/455 ,  G01N33/68 ,  G01N33/569 ,  G01N33/577 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明属于生物技术领域，具体涉及一种抗毒害艾美耳球虫配子体EnGAM22蛋白单克隆抗体的制备方法，包括EnGAM22重组蛋白的制备、动物免疫、杂交瘤细胞的制备和单克隆抗体的制备，EnGAM22重组蛋白免疫小鼠后可产生高效价抗体，制备的杂交瘤细胞株可稳定分泌高性能抗EnGAM22蛋白单克隆抗体。本发明还公开了一种抗毒害艾美耳球虫配子体EnGAM22蛋白单克隆抗体，亚型分别为IgG2a、IgG2b，结合能力强、特异性好、效价高。本发明还公开了EnGAM22蛋白在毒害艾美耳球虫虫体中的定位，特异性强，准确性好。

公开(公告)号：CN110616149A

公开(公告)日：2019-12-27

申请号：CN201910962687.X

申请日：2019-10-11

Applicant: 扬州大学

Inventor： 许金俊 ,  孔令明 ,  戎杰 ,  陈乔光 ,  王子静 ,  禚振男 ,  郭平 ,  曲昌宝 ,  刘丹丹 ,  侯照峰 ,  陶建平

IPC: C12N1/10 ,  A61K39/002 ,  A61P33/02 ,  C12R1/90

Abstract: 本发明涉及生物技术领域一种鸡源火鸡组织滴虫传代致弱株、其制备方法及用途，提供的鸡源火鸡组织滴虫传代人工致弱株A162具有良好的安全性和免疫原性，其由分离自鸡群的虫株经传代致弱、冻存再经虫株复苏，获得的候选活疫苗成本低，使用方便，使用后无药物残留，不产生耐药性，不会对环境造成污染，免疫原性好，使用安全，能有效抵抗105个强毒虫体的感染。相比火鸡来源虫株所制备的疫苗，该疫苗对鸡群的组织滴虫病的预防更为科学和可靠，有望成为药物控制鸡群组织滴虫病的替代手段，从而有效克服该病防治目前面临的巨大瓶颈和困境。

公开(公告)号：CN1657616A

公开(公告)日：2005-08-24

申请号：CN200510038289.7

申请日：2005-01-25

Applicant: 扬州大学

Inventor： 秦爱建 ,  许金俊 ,  孔桂美 ,  刘岳龙 ,  金文杰

IPC: C12N15/09 ,  C12N15/63 ,  C12N15/23 ,  A61K38/21

Abstract: 高抗病毒活性重组鸡γ－干扰素的制取方法及用途，涉及一种广谱高效抗病毒基因工程产品的制取方法。将ChIFN－γ基因从真核质粒中经双酶切后克隆到转移载体中，获得重组转移质粒pFASTBAC1－ChIFN－γ；取DH10Bac感受态细胞，加入1ng pFASTBAC1－ChIFN－γ，转座后，用SOC培养基稀释培养物，涂布Luria平板，培养后，挑取白色菌落，Luria平板进行纯化，阳性质粒命名为Bacmid－ChIFN－γ，提取阳性质粒DNA；取上述重组DNA质粒转染Sf9细胞，制得高抗病毒活性重组鸡γ－干扰素。本发明还在于将该干扰素用于抑制MDV GA对CEF的致病变作用、抑制NDV F48E8在细胞上的增殖、抗AIV(H5N1)病毒对细胞的致病作用。

公开(公告)号：CN106119354A

公开(公告)日：2016-11-16

申请号：CN201610490222.5

申请日：2016-06-28

Applicant: 扬州大学

Inventor： 许金俊 ,  禚振男 ,  陶建平 ,  刘丹丹

IPC: C12Q1/68 ,  C12N15/11

CPC classification number: C12Q1/6844 ,  C12Q1/6893 ,  C12Q2531/119 ,  C12Q2563/107

Abstract: 本发明提供一种猪人住肉孢子虫LAMP检测试剂盒及其检测方法。所述检测试剂盒包括含有上述引物组合的反应液A和包括1000x SYBR Green I的反应液B，所述的引物组合包括内引物1、外引物1、内引物2和外引物2，其核苷酸序列分别为SEQ ID No.1‑4。所述的检测方法包括：1)提取待测样品DNA，制备DNA处理液；2)环介导等温扩增：在反应液A中加入DNA处理液，混匀离心，于60‑65℃恒温中放置45‑60min；3)扩增产物的显色检测：在上述混合液中加入反应液B，反应结束后充分混合，肉眼观察反应液颜色：绿色表明样品中猪人住肉孢子虫，黄色说明待检样品不含有猪人住肉孢子虫。本发明提供的猪人住肉孢子虫LAMP检测试剂盒能够快速、准确、而且更加灵敏、高效地检测猪人住肉孢子虫。

公开(公告)号：CN103233017A

公开(公告)日：2013-08-07

申请号：CN201310162739.8

申请日：2013-05-06

Applicant: 扬州大学

Inventor： 陶建平 ,  刘丹丹 ,  曹李琴 ,  许金俊

IPC: C12N15/30 ,  C07K14/455 ,  C12N15/70 ,  A61K48/00 ,  A61P33/02

Abstract: 本发明属于基因工程疫苗领域，具体涉及一种鸡毒害艾美耳球虫配子体抗原基因、表达及其表达产物的应用。该基因的开放阅读框大小为561bp。将其构建为原核表达载体pET28a-Engam22，转化BL21宿主菌后诱导表达。表达产物能被鸡康复血清所识别，显示重组蛋白有免疫原性。该基因构建的重组真核表达质粒pcDNA3.1-Engam22免疫雏鸡，能诱导产生体液免疫与细胞免疫，显示该基因能用于鸡球虫基因工程疫苗的研制。

公开(公告)号：CN1181887C

公开(公告)日：2004-12-29

申请号：CN02138397.9

申请日：2002-10-08

Applicant: 扬州大学

Inventor： 秦爱建 ,  许金俊 ,  金文杰 ,  刘岳龙

IPC: A61K38/21 ,  C12N15/81 ,  C07K14/555 ,  A61P15/14

Abstract: 本发明属于生物技术制药工业中的基因工程生产多肽药物的技术领域。应用一步法逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)技术对奶牛γ-干扰素(BovIFN-γ)基因的cDNA序列进行扩增，从奶牛脾淋巴细胞的总RNA中扩增出特异性片段。将BovIFN-γ基因克隆到大肠杆菌表达载体PGEX-6P-1谷光甘肽-S-转移酶的下游，经IPTG诱导后，表达融合蛋白；或将BovIFN-γ基因克隆到酵母高效表达载体，通过转化酵母细胞，获得阳性克隆，并大量表达基因产物；通过亲和层析纯化，大量制备表达产物，通过细胞病变抑制试验证实，表达产物有极好的抑制VSV病毒的活性。或将BovIFN-γ基因插入到pcDNA3，通过大量制备质粒DNA，以质粒DNA直接注射奶牛乳腔，使其BovIFN-γ基因在乳腺中大量表达，从而达到预防或治疗奶牛隐性乳房炎的目的。

公开(公告)号：CN104593385A

公开(公告)日：2015-05-06

申请号：CN201410745229.8

申请日：2014-12-09

Applicant: 扬州大学

Inventor： 陶建平 ,  朱玉兰 ,  刘丹丹 ,  许金俊

IPC: C12N15/30 ,  C07K14/455 ,  C12N15/70 ,  A61K48/00 ,  A61P33/02

Abstract: 本发明属于基因工程疫苗领域，具体涉及一种鸡柔嫩艾美耳球虫配子体抗原基因、表达及其表达产物的应用。该基因的开放阅读框大小为1617bp，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。将其构建为原核表达载体pET28a-Etgam59，转化BL21宿主菌后诱导表达。表达产物能被鸡康复血清所识别，显示重组蛋白有免疫原性。扩增该基因构建重组真核表达质粒pcDNA3.1-Etgam59免疫小鼠，收获的免疫小鼠血清能与pET28a-Etgam59的表达产物特异性结合，显示该基因可用于鸡球虫基因工程疫苗的研制。

公开(公告)号：CN102925584A

公开(公告)日：2013-02-13

申请号：CN201210494834.3

申请日：2012-11-28

Applicant: 扬州大学

Inventor： 许金俊 ,  曲昌宝 ,  陶建平 ,  刘聪 ,  刘丹丹 ,  曹李琴 ,  侯照峰 ,  宿世杰 ,  郭平 ,  李聪 ,  张祖航

IPC: C12Q1/68

Abstract: 本发明涉及一种用环介导等温扩增(LAMP)技术快速检测火鸡组织滴虫的试剂盒。本发明含有10×等温反应缓冲液、BstDNA聚合酶8000U/mL、l0mMdNTP、25mMMgCl2、200µM内引物、200µM内引物2、l00µM外引物1、100µM外引物2、5M甜菜碱和去离子水的反应液A、反应液B（1000X的荧光染料SYBRGreenⅠ）。通过对鸡肝脏组织样品中DNA提取、火鸡组织滴虫的环介导等温扩增、扩增产物的显色检测，从而检测出火鸡组织滴虫。解决了现有技术时间长、工作量大、操作复杂等缺陷。本发明具有特异性强、灵敏度高、快速且成本低、操作方法更简单，适于现场快速检测。

公开(公告)号：CN118064480A

公开(公告)日：2024-05-24

申请号：CN202410201314.1

申请日：2024-02-23

Applicant: 扬州大学

Inventor： 刘丹丹 ,  冯永翠 ,  陶建平 ,  潘志明 ,  候照峰 ,  许金俊 ,  康喜龙

IPC: C12N15/74 ,  C12N15/30 ,  C12N1/21 ,  C12N15/66 ,  A61K39/012 ,  A61P33/02 ,  C12R1/42

Abstract: 本发明公开了一种鸡球虫配子体抗原活载体疫苗的制备方法：将毒害艾美耳球虫配子体抗原基因Engam59与真核表达载体pVAX1相连，获得重组真核表达载体pVAX1‑Engam59，再将该重组载体电转入减毒肠炎沙门菌Z11Δrfbg，获得重组活载体疫苗Z11Δrfbg(pVAX1‑Engam59)。该重组活载体疫苗的体外稳定性好，对HD‑11细胞的黏附力、侵袭力好，在HD‑11细胞内的增殖力强，且体内定殖力好。本发明还公开了口服上述活载体疫苗，可诱导鸡群的体液免疫反应，产生特异性抗体，该重组活载体疫苗能用于预防鸡球虫病。

公开(公告)号：CN104561047A

公开(公告)日：2015-04-29

申请号：CN201410795026.X

申请日：2014-12-18

Applicant: 扬州大学

Inventor： 陶建平 ,  刘丹丹 ,  曹李琴 ,  朱玉兰 ,  许金俊

IPC: C12N15/30 ,  C07K14/455 ,  C12N15/70 ,  A61K48/00 ,  A61K39/012 ,  A61P33/02

Abstract: 本发明属于基因工程疫苗领域，具体涉及一种鸡毒害艾美耳球虫配子体抗原基因、表达及其表达产物的应用。该基因的开放阅读框大小为1473bp，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。选取编码酪氨酸-丝氨酸和脯氨酸与甲硫氨酸特殊结构域并富含抗原表位的基因片段，构建原核表达载体pET28a(+)-Engam59，转化BL21宿主菌后诱导表达。表达产物能被鸡康复血清识别，显示重组蛋白有免疫原性。用该基因片段构建的重组真核表达质粒pcDNA3.1-Engam59免疫小鼠制备的血清，能与pET28a(+)-Engam59的表达产物特异性结合，显示该基因能用于鸡球虫基因工程疫苗的研制。