公开(公告)号：CN110484450A

公开(公告)日：2019-11-22

申请号：CN201910676954.7

申请日：2019-07-25

Applicant: 扬州大学

Inventor： 陶建平 ,  王乐乐 ,  刘丹丹 ,  苏丁泽阳 ,  高阳 ,  候照峰 ,  宿世杰 ,  许金俊

IPC: C12N1/06 ,  C12N1/10 ,  C12R1/90

Abstract: 本发明公开了一种艾美耳球虫未孢子化卵囊壁的制备方法。通过0.5 M蔗糖卵囊壁破碎液和1.1 M蔗糖分离液的梯度离心，将卵囊壁从卵囊破碎液中分离纯化。实验证明，采用本方法可实现快速分离纯化艾美耳球虫未孢子化卵囊壁，回收量是传统方法的2倍以上，且纯度高，卵囊壁蛋白结构完整；另外，本方法还具有试剂配制方法简单，操作步骤简单方便等优点，对开展艾美耳球虫的研究实验具有重要价值和很强的实用性。

公开(公告)号：CN103233017B

公开(公告)日：2014-11-05

申请号：CN201310162739.8

申请日：2013-05-06

Applicant: 扬州大学

Inventor： 陶建平 ,  刘丹丹 ,  曹李琴 ,  许金俊

IPC: C12N15/30 ,  C07K14/455 ,  C12N15/70 ,  A61K48/00 ,  A61P33/02

Abstract: 本发明属于基因工程疫苗领域，具体涉及一种鸡毒害艾美耳球虫配子体抗原基因、表达及其表达产物的应用。该基因的开放阅读框大小为561bp。将其构建为原核表达载体pET28a-Engam22，转化BL21宿主菌后诱导表达。表达产物能被鸡康复血清所识别，显示重组蛋白有免疫原性。该基因构建的重组真核表达质粒pcDNA3.1-Engam22免疫雏鸡，能诱导产生体液免疫与细胞免疫，显示该基因能用于鸡球虫基因工程疫苗的研制。

公开(公告)号：CN106119354A

公开(公告)日：2016-11-16

申请号：CN201610490222.5

申请日：2016-06-28

Applicant: 扬州大学

Inventor： 许金俊 ,  禚振男 ,  陶建平 ,  刘丹丹

IPC: C12Q1/68 ,  C12N15/11

CPC classification number: C12Q1/6844 ,  C12Q1/6893 ,  C12Q2531/119 ,  C12Q2563/107

Abstract: 本发明提供一种猪人住肉孢子虫LAMP检测试剂盒及其检测方法。所述检测试剂盒包括含有上述引物组合的反应液A和包括1000x SYBR Green I的反应液B，所述的引物组合包括内引物1、外引物1、内引物2和外引物2，其核苷酸序列分别为SEQ ID No.1‑4。所述的检测方法包括：1)提取待测样品DNA，制备DNA处理液；2)环介导等温扩增：在反应液A中加入DNA处理液，混匀离心，于60‑65℃恒温中放置45‑60min；3)扩增产物的显色检测：在上述混合液中加入反应液B，反应结束后充分混合，肉眼观察反应液颜色：绿色表明样品中猪人住肉孢子虫，黄色说明待检样品不含有猪人住肉孢子虫。本发明提供的猪人住肉孢子虫LAMP检测试剂盒能够快速、准确、而且更加灵敏、高效地检测猪人住肉孢子虫。

公开(公告)号：CN103233017A

公开(公告)日：2013-08-07

申请号：CN201310162739.8

申请日：2013-05-06

Applicant: 扬州大学

Inventor： 陶建平 ,  刘丹丹 ,  曹李琴 ,  许金俊

IPC: C12N15/30 ,  C07K14/455 ,  C12N15/70 ,  A61K48/00 ,  A61P33/02

Abstract: 本发明属于基因工程疫苗领域，具体涉及一种鸡毒害艾美耳球虫配子体抗原基因、表达及其表达产物的应用。该基因的开放阅读框大小为561bp。将其构建为原核表达载体pET28a-Engam22，转化BL21宿主菌后诱导表达。表达产物能被鸡康复血清所识别，显示重组蛋白有免疫原性。该基因构建的重组真核表达质粒pcDNA3.1-Engam22免疫雏鸡，能诱导产生体液免疫与细胞免疫，显示该基因能用于鸡球虫基因工程疫苗的研制。

公开(公告)号：CN104593385A

公开(公告)日：2015-05-06

申请号：CN201410745229.8

申请日：2014-12-09

Applicant: 扬州大学

Inventor： 陶建平 ,  朱玉兰 ,  刘丹丹 ,  许金俊

IPC: C12N15/30 ,  C07K14/455 ,  C12N15/70 ,  A61K48/00 ,  A61P33/02

Abstract: 本发明属于基因工程疫苗领域，具体涉及一种鸡柔嫩艾美耳球虫配子体抗原基因、表达及其表达产物的应用。该基因的开放阅读框大小为1617bp，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。将其构建为原核表达载体pET28a-Etgam59，转化BL21宿主菌后诱导表达。表达产物能被鸡康复血清所识别，显示重组蛋白有免疫原性。扩增该基因构建重组真核表达质粒pcDNA3.1-Etgam59免疫小鼠，收获的免疫小鼠血清能与pET28a-Etgam59的表达产物特异性结合，显示该基因可用于鸡球虫基因工程疫苗的研制。

公开(公告)号：CN102925584A

公开(公告)日：2013-02-13

申请号：CN201210494834.3

申请日：2012-11-28

Applicant: 扬州大学

Inventor： 许金俊 ,  曲昌宝 ,  陶建平 ,  刘聪 ,  刘丹丹 ,  曹李琴 ,  侯照峰 ,  宿世杰 ,  郭平 ,  李聪 ,  张祖航

IPC: C12Q1/68

Abstract: 本发明涉及一种用环介导等温扩增(LAMP)技术快速检测火鸡组织滴虫的试剂盒。本发明含有10×等温反应缓冲液、BstDNA聚合酶8000U/mL、l0mMdNTP、25mMMgCl2、200µM内引物、200µM内引物2、l00µM外引物1、100µM外引物2、5M甜菜碱和去离子水的反应液A、反应液B（1000X的荧光染料SYBRGreenⅠ）。通过对鸡肝脏组织样品中DNA提取、火鸡组织滴虫的环介导等温扩增、扩增产物的显色检测，从而检测出火鸡组织滴虫。解决了现有技术时间长、工作量大、操作复杂等缺陷。本发明具有特异性强、灵敏度高、快速且成本低、操作方法更简单，适于现场快速检测。

公开(公告)号：CN111978401A

公开(公告)日：2020-11-24

申请号：CN202010799040.2

申请日：2020-08-11

Applicant: 扬州大学

Inventor： 陶建平 ,  李文静 ,  刘丹丹 ,  程振扬 ,  徐向东 ,  候照峰 ,  许金俊

IPC: C07K16/20 ,  C07K14/455 ,  G01N33/68 ,  G01N33/569 ,  G01N33/577 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明属于生物技术领域，具体涉及一种抗毒害艾美耳球虫配子体EnGAM22蛋白单克隆抗体的制备方法，包括EnGAM22重组蛋白的制备、动物免疫、杂交瘤细胞的制备和单克隆抗体的制备，EnGAM22重组蛋白免疫小鼠后可产生高效价抗体，制备的杂交瘤细胞株可稳定分泌高性能抗EnGAM22蛋白单克隆抗体。本发明还公开了一种抗毒害艾美耳球虫配子体EnGAM22蛋白单克隆抗体，亚型分别为IgG2a、IgG2b，结合能力强、特异性好、效价高。本发明还公开了EnGAM22蛋白在毒害艾美耳球虫虫体中的定位，特异性强，准确性好。

公开(公告)号：CN110616149A

公开(公告)日：2019-12-27

申请号：CN201910962687.X

申请日：2019-10-11

Applicant: 扬州大学

Inventor： 许金俊 ,  孔令明 ,  戎杰 ,  陈乔光 ,  王子静 ,  禚振男 ,  郭平 ,  曲昌宝 ,  刘丹丹 ,  侯照峰 ,  陶建平

IPC: C12N1/10 ,  A61K39/002 ,  A61P33/02 ,  C12R1/90

Abstract: 本发明涉及生物技术领域一种鸡源火鸡组织滴虫传代致弱株、其制备方法及用途，提供的鸡源火鸡组织滴虫传代人工致弱株A162具有良好的安全性和免疫原性，其由分离自鸡群的虫株经传代致弱、冻存再经虫株复苏，获得的候选活疫苗成本低，使用方便，使用后无药物残留，不产生耐药性，不会对环境造成污染，免疫原性好，使用安全，能有效抵抗105个强毒虫体的感染。相比火鸡来源虫株所制备的疫苗，该疫苗对鸡群的组织滴虫病的预防更为科学和可靠，有望成为药物控制鸡群组织滴虫病的替代手段，从而有效克服该病防治目前面临的巨大瓶颈和困境。

公开(公告)号：CN118064480A

公开(公告)日：2024-05-24

申请号：CN202410201314.1

申请日：2024-02-23

Applicant: 扬州大学

Inventor： 刘丹丹 ,  冯永翠 ,  陶建平 ,  潘志明 ,  候照峰 ,  许金俊 ,  康喜龙

IPC: C12N15/74 ,  C12N15/30 ,  C12N1/21 ,  C12N15/66 ,  A61K39/012 ,  A61P33/02 ,  C12R1/42

Abstract: 本发明公开了一种鸡球虫配子体抗原活载体疫苗的制备方法：将毒害艾美耳球虫配子体抗原基因Engam59与真核表达载体pVAX1相连，获得重组真核表达载体pVAX1‑Engam59，再将该重组载体电转入减毒肠炎沙门菌Z11Δrfbg，获得重组活载体疫苗Z11Δrfbg(pVAX1‑Engam59)。该重组活载体疫苗的体外稳定性好，对HD‑11细胞的黏附力、侵袭力好，在HD‑11细胞内的增殖力强，且体内定殖力好。本发明还公开了口服上述活载体疫苗，可诱导鸡群的体液免疫反应，产生特异性抗体，该重组活载体疫苗能用于预防鸡球虫病。

公开(公告)号：CN104561047A

公开(公告)日：2015-04-29

申请号：CN201410795026.X

申请日：2014-12-18

Applicant: 扬州大学

Inventor： 陶建平 ,  刘丹丹 ,  曹李琴 ,  朱玉兰 ,  许金俊

IPC: C12N15/30 ,  C07K14/455 ,  C12N15/70 ,  A61K48/00 ,  A61K39/012 ,  A61P33/02

Abstract: 本发明属于基因工程疫苗领域，具体涉及一种鸡毒害艾美耳球虫配子体抗原基因、表达及其表达产物的应用。该基因的开放阅读框大小为1473bp，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。选取编码酪氨酸-丝氨酸和脯氨酸与甲硫氨酸特殊结构域并富含抗原表位的基因片段，构建原核表达载体pET28a(+)-Engam59，转化BL21宿主菌后诱导表达。表达产物能被鸡康复血清识别，显示重组蛋白有免疫原性。用该基因片段构建的重组真核表达质粒pcDNA3.1-Engam59免疫小鼠制备的血清，能与pET28a(+)-Engam59的表达产物特异性结合，显示该基因能用于鸡球虫基因工程疫苗的研制。