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公开(公告)号：CN118109510A
公开(公告)日：2024-05-31
申请号：CN202410119987.2
申请日：2024-01-29
IPC: C12N15/85 , C12N15/113 , C12N15/12
Abstract: 本发明涉及基因表达与调控技术领域，公开了一种提高基因表达的奶山羊乳腺特异性增强子及表达载体，首先利用NCBI检索奶山羊四种酪蛋白基因序列，检测奶山羊四种酪蛋白转录结合因子的潜在信号。挖掘及鉴定出奶山羊泌乳期特异性增强酪蛋白基因表达的关键基序，为解决奶山羊乳腺生物反应器外源基因表达低的难题提供天然调控元件，通过筛选出奶山羊泌乳期能特异性提高内源性酪蛋白基因表达的5个超级增强子序列，并在细胞水平上验证了序列的有效性和安全性，是来自于奶山羊的天然基序及调控序列，解决了现有奶山羊乳腺生物反应器缺乏专属于奶山羊泌乳期乳腺显著增强外源基因表达上调的内源性关键基序及调控序列致使外源基因表达水平低下的问题。
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公开(公告)号：CN117942191A
公开(公告)日：2024-04-30
申请号：CN202410188219.2
申请日：2024-02-20
Abstract: 本发明公开了一种提高奶山羊冷冻精液人工授精效率的方法，S1、同期发情：放置孕酮栓‑注射孕马血清促性腺激素(PMSG)‑注射氯前列醇(PG)‑试情；S2、人工授精：配制溶液‑发情母羊预处理‑解冻精液‑人工授精；S3、B超检测：在人工授精40天左右对奶山羊进行第一次B超检测，在人工授精60天后对奶山羊进行第二次B超检测，记录两次B超检测后对照组、阿托品组、缩宫素组母羊的怀孕率。该发明利用阿托品在奶山羊子宫颈口进行处理，松弛奶山羊子宫颈口，使输精管可以穿透子宫颈口，从而提高了奶山羊冷冻精液的使用效率，降低了养殖业的繁殖成本，增加了奶山羊养殖效益，同时，加快了奶山羊品种的遗传改良进程。
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公开(公告)号：CN119120725A
公开(公告)日：2024-12-13
申请号：CN202411347939.5
申请日：2024-09-26
Applicant: 西北农林科技大学
IPC: C12Q1/6888 , C12N15/12 , C12N15/85 , C12N5/10
Abstract: 本发明涉及基因表达与调控技术领域，公开了一种牛羊胚胎附植关键基因的筛选与鉴定方法，包括以下步骤：生物信息学鉴定，反转录PCR，PCR扩增，荧光定量PCR，细胞系构建，细胞融合试验。该牛羊胚胎附植关键基因的筛选与鉴定方法，通过分析牛羊基因组中的env基因，利用bulk转录组测序分析了正常和克隆动物胎盘之间表达差异，筛选到候选合胞素基因，通过结构与表达分析候选合胞素基因，通过细胞融合与假型病毒试验鉴定牛羊合胞素基因典型功能特征，本方案为首次在牛羊基因组中发现牛羊关键合胞素基因，揭示牛羊合胞素基因介导胎盘促融合功能，验证牛羊合胞素基因所结合的受体为ASCT1与ASCT2，为解决妊娠失败和体细胞克隆效率低问题提供新的理论依据。
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公开(公告)号：CN117778469A
公开(公告)日：2024-03-29
申请号：CN202410141817.4
申请日：2024-02-01
Applicant: 西北农林科技大学
IPC: C12N15/85 , C12N15/56 , C12N9/22 , C12N15/113 , C12N5/10 , A61P15/14 , A61P29/00 , A01K67/0275
Abstract: 本发明公开了一种提高奶山羊抗乳腺炎基因溶菌酶表达的基因编辑方法，属于基因表达调控、基因编辑和抗病育种技术领域。本发明公开的一种提高奶山羊抗乳腺炎基因溶菌酶表达的基因编辑方法，将Cas9‑SgRNA4和供体载体共转染宿主细胞。本发明公开的一种提高奶山羊抗乳腺炎基因溶菌酶表达的基因编辑方法，在炎性条件下，可以提高乳腺内溶菌酶的含量，从而提高自身免疫力以及对乳腺炎致病菌具有拮抗作用。
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公开(公告)号：CN116814692A
公开(公告)日：2023-09-29
申请号：CN202310809894.8
申请日：2023-07-04
Applicant: 西北农林科技大学 , 西宁市动物疫病预防控制中心(挂西宁市畜牧兽医站牌子)
Abstract: 本发明公开了一种提高单碱基编辑器运用在藏绵羊成纤维细胞中的编辑效率的方法。属于细胞编辑技术领域。包括使用NexturastatA与RS‑1。本发明发现不同小分子对于编辑器蛋白表达水平与染色质状态的影响是复杂的，且小分子不同的作用特性会导致靶位点编辑效果存在差异，以及作用于不同细胞时这些小分子在编辑编辑过程中发挥的作用也大相径庭，具体的，NexturastatA与RS‑1小分子化合物可提高藏绵羊成纤维细胞FecB基因靶位点的编辑效率，其编辑效率分别提高了61％与39％。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN102827873A
公开(公告)日：2012-12-19
申请号：CN201210271661.9
申请日：2012-07-31
Applicant: 西北农林科技大学 , 杨凌科元克隆股份有限公司
Abstract: 本发明公开了一种Cre融合蛋白功能检测细胞及修饰后的Cre融合蛋白。Cre融合蛋白功能检测细胞，宿主细胞为HEK293细胞，将pAcmv-stop-EGFP载体和phiC31整合酶共转染宿主细胞。通过phiC31整合酶的作用，使得携带检测Cre重组酶功能的LoxP元件的载体以单拷贝的形式整合到HEK293细胞系的假attP位点，为研究Cre融合蛋白穿膜效率和生物活性提供稳定可靠的细胞模型。经TAT和NLS多肽修饰的Cre融合蛋白HNTC，其穿膜效率高、生物活性好，可有效地作为哺乳动物细胞染色体水平上基因操作的工具。
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公开(公告)号：CN102628061A
公开(公告)日：2012-08-08
申请号：CN201210100590.6
申请日：2012-04-09
Applicant: 西北农林科技大学 , 杨凌科元克隆股份有限公司
IPC: C12N15/85 , C12N5/10 , C12N15/873
Abstract: 本发明公开了一种HBD3乳腺特异性表达载体及构建的重组细胞，该载体包含带有信号转导肽的HBD3基因，分别在HBD3基因的上游和下游设有CSN5和CSN3作为调控元件。所述的重组细胞其宿主细胞为牛胎儿成纤维细胞，将外源性表达载体pARNG-HBD3在φC31整合酶的作用下整合到假attP位点，通过药物筛选取得阳性克隆，再经过Cre重组酶的处理，去除载体上两个同向LoxP序列之间的抗生素筛选标记。以去除抗生素筛选标记的包含HBD3的牛胎儿成纤维细胞作为核移植构建转基因克隆胚的核供体细胞，通过SCNT获得基因克隆胚，将这些胚胎移入受体牛的子宫有望生产出无抗生素筛选标记的转HBD3基因的奶牛。
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公开(公告)号：CN102321655A
公开(公告)日：2012-01-18
申请号：CN201110259942.8
申请日：2011-09-05
Applicant: 西北农林科技大学 , 杨凌科元克隆股份有限公司
Abstract: 本发明公开了一种基于假attP位点整合的通用型表达载体及其构建方法和应用，该表达载体包括attB序列、pUC ori和多克隆位点MCS，CMV组成型启动子与attB序列相连接，CMV组成型启动子下游插入两个同向的LoxP元件，在LoxP元件下游设有第一荧光指示蛋白开放阅读框及其终止子，在两个LoxP元件之间设有第二荧光指示蛋白开放阅读框及其终止子和抗生素表达元件。该载体可应用于筛选稳定表达荧光标记蛋白的无抗生素筛选标记的重组细胞。
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公开(公告)号：CN102206611A
公开(公告)日：2011-10-05
申请号：CN201110107432.9
申请日：2011-04-27
Applicant: 西北农林科技大学
IPC: C12N5/0797
Abstract: 本发明公开了一种羊水源性神经干细胞的分离培养方法，首先分离到羊水细胞，然后再在羊水细胞中添加分离培养基，分离得到的神经干细胞生长形成神经球，将其消化分离为单细胞后进行传代培养。本发明提供的羊水源性神经干细胞的分离培养方法，开辟了分离培养神经干细胞的新途径，应用本发明方法从羊水中分离培养神经干细胞成功率高。所分离到的羊水源性神经干细胞在体外诱导后分化为星形胶质细胞和神经元细胞等功能细胞；所分离到的羊水源性神经干细胞具有可行性和有效性，具有自我更新、增殖和分化潜能。
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公开(公告)号：CN101591672A
公开(公告)日：2009-12-02
申请号：CN200910022664.7
申请日：2009-05-22
Applicant: 西北农林科技大学
Abstract: 本发明涉及一种包含hBD3乳腺特异性表达载体的牛胎儿成纤维细胞，包括一种hBD3乳腺特异性表达载体，包含目的基因hBD3，分别在hBD3基因的5′端和3′端插入调控元件；所述的hBD3乳腺特异性表达载体为pEBB表达载体。一种包含目的基因hBD3的牛胎儿成纤维细胞，其宿主细胞为牛胎儿成纤维细胞，通过转染外源性表达载体pEBB，将目的基因hBD3整合到牛胎儿成纤维细胞的基因组。以包含目的基因hBD3的牛胎儿成纤维细胞作为核移植构建转基因克隆胚的核供体细胞，通过SCNT获得转基因克隆胚，将这些胚胎移入受体牛的子宫有望生产出转hBD3基因的奶牛。
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