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公开(公告)号：CN102533857B
公开(公告)日：2014-05-07
申请号：CN201210039495.X
申请日：2012-02-21
Applicant: 西北农林科技大学 , 杨凌科元克隆股份有限公司
IPC: C12N15/85 , C12N5/10 , C12N15/873
Abstract: 本发明公开了一种包含HBD3气管上皮细胞异性表达载体的牛胎儿成纤维细胞，构建了一种包含HBD3气管上皮细胞异性表达载体Muc1-loxp-EGFP-HBD3，以及基于该载体的包含HBD3气管上皮细胞异性表达载体的牛胎儿成纤维细胞系，利用该细胞系作为核供体细胞，为解决奶牛结核病的转基因奶牛提供坚实的基础。本发明通过电转染法将外源性表达载体Muc1-loxp-EGFP-HBD3导入牛胎儿成纤维细胞，荧光显微镜观察标记基因EGFP的表达情况，并经G418筛选获得阳性细胞，经PCR鉴定，证实目的基因HBD3整合到牛胎儿成纤维细胞的基因组；最后，将转染HBD3基因的牛胎儿成纤维细胞作为核供体移入牛去核卵母细胞，获得转基因克隆胚。
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公开(公告)号：CN109112159A
公开(公告)日：2019-01-01
申请号：CN201811039181.3
申请日：2018-09-06
Applicant: 西北农林科技大学
IPC: C12N15/85 , C12N15/90 , C12N5/10 , C12N15/877
Abstract: 本发明公开了一种基于Cas9介导的定点整合FABP4基因和MSTN基因点突变打靶载体及重组细胞，本发明利用电穿孔的方法将靶向MSTN基因的Cas9真核表达载体和打靶载体共转染鲁西黄牛胎儿成纤维细胞，实现对鲁西黄牛胎儿成纤维细胞进行基因打靶，获得MSTN位点定点敲入FABP4基因和MSTN基因点突变的牛胎儿成纤维细胞。通过Junction PCR筛选和验证获得了打靶的阳性克隆细胞。以该阳性克隆细胞为供核细胞移入去核的牛卵母细胞中，可获得转基因克隆胚胎，为快速、高效研制优质转基因肉牛新品种提供坚实基础。
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公开(公告)号：CN102747102B
公开(公告)日：2014-02-19
申请号：CN201210269209.9
申请日：2012-07-31
Applicant: 西北农林科技大学 , 杨凌科元克隆股份有限公司
IPC: C12N15/85 , C12N5/10 , C12P21/02 , C12N15/873
Abstract: 本发明公开了一种HSA乳腺特异性表达载体及其构建的重组细胞，该载体包括位于启动子下游的目的基因HSA，在HSA基因的5'端连接BCP5序列，在其3'端连接有BGHpolyA序列；在启动子的上游还设有phiC31整合酶特异性识别位点。通过在HSA基因5'端插入牛β-酪蛋白基因的和3'端插入牛生长激素polyA，牛β-酪蛋白基因的5'调控区和BGHpolyA能够指导目的基因在牛的乳腺组织中特异的高效表达。以包含目的基因HSA的牛胎儿成纤维细胞作为核移植构建转基因克隆胚的核供体细胞，通过SCNT获得转基因克隆胚，将这些胚胎移入受体牛的子宫有望生产出转HSA基因的奶牛。
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公开(公告)号：CN102747102A
公开(公告)日：2012-10-24
申请号：CN201210269209.9
申请日：2012-07-31
Applicant: 西北农林科技大学 , 杨凌科元克隆股份有限公司
IPC: C12N15/85 , C12N5/10 , C12P21/02 , C12N15/873
Abstract: 本发明公开了一种HSA乳腺特异性表达载体及其构建的重组细胞，该载体包括位于启动子下游的目的基因HSA，在HSA基因的5'端连接BCP5序列，在其3'端连接有BGHpolyA序列；在启动子的上游还设有phiC31整合酶特异性识别位点。通过在HSA基因5'端插入牛β-酪蛋白基因的和3'端插入牛生长激素polyA，牛β-酪蛋白基因的5'调控区和BGHpolyA能够指导目的基因在牛的乳腺组织中特异的高效表达。以包含目的基因HSA的牛胎儿成纤维细胞作为核移植构建转基因克隆胚的核供体细胞，通过SCNT获得转基因克隆胚，将这些胚胎移入受体牛的子宫有望生产出转HSA基因的奶牛。
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公开(公告)号：CN102628045A
公开(公告)日：2012-08-08
申请号：CN201210100786.5
申请日：2012-04-09
Applicant: 西北农林科技大学 , 杨凌科元克隆股份有限公司
IPC: C12N15/113 , C12N15/63 , C12N5/10
Abstract: 本发明公开了一种干扰BVDV复制的shRNA表达载体及构建的重组细胞，针对BVDV的不同区域设计了不同的shRNA片段。shRNA在宿主细胞内转录后经剪切加工后形成siRNA，作用于病毒RNA的不同区域，干扰病毒的复制和表达。由于在牛肾脏细胞、睾丸细胞等存在BVDV细胞表面受体，因此BVDV对胎牛肾脏细胞、睾丸细胞最敏感，那么牛胎儿成纤维细胞做为体细胞核移植的供体细胞，进行诱导重编程之后形成的了转基因克隆牛完整的个体，其肾脏等BVDV敏感器官具有抑制该病毒表达的能力。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN101591672B
公开(公告)日：2011-09-07
申请号：CN200910022664.7
申请日：2009-05-22
Applicant: 西北农林科技大学
Abstract: 本发明涉及一种包含hBD3乳腺特异性表达载体的牛胎儿成纤维细胞，包括一种hBD3乳腺特异性表达载体，包含目的基因hBD3，分别在hBD3基因的5′端和3′端插入调控元件；所述的hBD3乳腺特异性表达载体为pEBB表达载体。一种包含目的基因hBD3的牛胎儿成纤维细胞，其宿主细胞为牛胎儿成纤维细胞，通过转染外源性表达载体pEBB，将目的基因hBD3整合到牛胎儿成纤维细胞的基因组。以包含目的基因hBD3的牛胎儿成纤维细胞作为核移植构建转基因克隆胚的核供体细胞，通过SCNT获得转基因克隆胚，将这些胚胎移入受体牛的子宫有望生产出转hBD3基因的奶牛。
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公开(公告)号：CN1896274B
公开(公告)日：2011-05-25
申请号：CN200510096097.1
申请日：2005-09-29
Applicant: 西北农林科技大学生物工程研究所
IPC: C12Q1/68
Abstract: 本发明涉及一种牛胚胎性别简易鉴定方法，其血液基因组鉴定率达100％，胚胎性别鉴定率为99.0％以上，操作简便、灵敏度高、鉴定快速、实用性强、使用设备简单，并可以在1h内鉴定出胚胎性别，形成的胚胎性别鉴定试剂盒完全可以应用于生产，且成本仅为同类产品的1/10。本发明根据牛特异性序列和雄性特异性序列，设计出6条特异性引物，能够识别6个特异位点，反应目的序列形成一个哑铃型结构单元，并以此为核心，短时间内扩增出大量大小不等的DNA片断。反应过程中，仅需要60～65℃恒温水浴即可；结果鉴定采用dNTPs沉淀法(反应管中部出现白色条带为阴性)。
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公开(公告)号：CN116814692A
公开(公告)日：2023-09-29
申请号：CN202310809894.8
申请日：2023-07-04
Applicant: 西北农林科技大学 , 西宁市动物疫病预防控制中心(挂西宁市畜牧兽医站牌子)
Abstract: 本发明公开了一种提高单碱基编辑器运用在藏绵羊成纤维细胞中的编辑效率的方法。属于细胞编辑技术领域。包括使用NexturastatA与RS‑1。本发明发现不同小分子对于编辑器蛋白表达水平与染色质状态的影响是复杂的，且小分子不同的作用特性会导致靶位点编辑效果存在差异，以及作用于不同细胞时这些小分子在编辑编辑过程中发挥的作用也大相径庭，具体的，NexturastatA与RS‑1小分子化合物可提高藏绵羊成纤维细胞FecB基因靶位点的编辑效率，其编辑效率分别提高了61％与39％。
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公开(公告)号：CN109679998B
公开(公告)日：2020-04-28
申请号：CN201910023959.X
申请日：2019-01-10
Applicant: 西北农林科技大学
Abstract: 本发明公开了一种通过miRNA靶向定点突变MSTN基因并同时定点整合PPARγ基因的载体及重组细胞，载体包括Cas9切割表达载体和打靶载体。本发明将Cas9切割表达载体和打靶载体共同转染宿主细胞，构建重组细胞株，可以作为生产转基因克隆胚胎的核移植供体细胞，抑制MSTN的功能发挥，同时实现PPARγ在骨骼肌细胞中特异性表达，进而为快速、高效研制优质转基因肉牛新品种提供支撑。
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公开(公告)号：CN102827873A
公开(公告)日：2012-12-19
申请号：CN201210271661.9
申请日：2012-07-31
Applicant: 西北农林科技大学 , 杨凌科元克隆股份有限公司
Abstract: 本发明公开了一种Cre融合蛋白功能检测细胞及修饰后的Cre融合蛋白。Cre融合蛋白功能检测细胞，宿主细胞为HEK293细胞，将pAcmv-stop-EGFP载体和phiC31整合酶共转染宿主细胞。通过phiC31整合酶的作用，使得携带检测Cre重组酶功能的LoxP元件的载体以单拷贝的形式整合到HEK293细胞系的假attP位点，为研究Cre融合蛋白穿膜效率和生物活性提供稳定可靠的细胞模型。经TAT和NLS多肽修饰的Cre融合蛋白HNTC，其穿膜效率高、生物活性好，可有效地作为哺乳动物细胞染色体水平上基因操作的工具。
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