公开(公告)号：CN118109510A

公开(公告)日：2024-05-31

申请号：CN202410119987.2

申请日：2024-01-29

Applicant: 西北农林科技大学 ,  杨凌职业技术学院

Inventor： 刘军 ,  米晓钰 ,  张涌 ,  罗艳 ,  祝振亮 ,  赵江林 ,  薛姣雄 ,  高丹丹

IPC: C12N15/85 ,  C12N15/113 ,  C12N15/12

Abstract: 本发明涉及基因表达与调控技术领域，公开了一种提高基因表达的奶山羊乳腺特异性增强子及表达载体，首先利用NCBI检索奶山羊四种酪蛋白基因序列，检测奶山羊四种酪蛋白转录结合因子的潜在信号。挖掘及鉴定出奶山羊泌乳期特异性增强酪蛋白基因表达的关键基序，为解决奶山羊乳腺生物反应器外源基因表达低的难题提供天然调控元件，通过筛选出奶山羊泌乳期能特异性提高内源性酪蛋白基因表达的5个超级增强子序列，并在细胞水平上验证了序列的有效性和安全性，是来自于奶山羊的天然基序及调控序列，解决了现有奶山羊乳腺生物反应器缺乏专属于奶山羊泌乳期乳腺显著增强外源基因表达上调的内源性关键基序及调控序列致使外源基因表达水平低下的问题。

公开(公告)号：CN117737091A

公开(公告)日：2024-03-22

申请号：CN202311769731.8

申请日：2023-12-21

Applicant: 西北农林科技大学

Inventor： 高元鹏 ,  汪浩鑫 ,  张涌 ,  韩静 ,  杨婧 ,  祝振亮 ,  樊阿娇 ,  宋颜亮 ,  张新艳

IPC: C12N15/53 ,  C12Q1/02

Abstract: 本发明公开了一种牛CYBB基因的单碱基错义突变及其应用，属于基因工程技术领域。本发明公开的一种牛CYBB基因的单碱基错义突变，单碱基错义突变的牛CYBB基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。牛CYBB功能基因的重要单核苷酸突变，达到了降低结核分支杆菌感染巨噬细胞引发铁死亡的作用，同时，降低了的分支杆菌在细胞内的增殖能力。

公开(公告)号：CN119876039A

公开(公告)日：2025-04-25

申请号：CN202510085252.7

申请日：2025-01-20

Applicant: 西北农林科技大学

Inventor： 刘军 ,  唐姣美 ,  周群莉 ,  张涌 ,  祝振亮 ,  韩静

IPC: C12N5/10 ,  C12N15/867 ,  C12N15/37 ,  C12R1/91

Abstract: 本发明公开了一种提高乳腺上皮细胞系传代次数的方法及其应用，属于乳腺上皮细胞系技术领域。本发明首次发现将绝缘子‑支架附着区外源性片段HS4‑SAR片段，与p‑Ef1a‑SV40LT‑Puro载体或pEF1a‑eGFP载体连接，转染商业化的永生化细胞系和原代细胞系，均可以显著提高乳腺上皮细胞系的传代次数，传代120代细胞形态仍然正常、未恶性转化、基因表达水平仍然未出现降低的现象，实现了永生化；建成的奶山羊乳腺上皮细胞系仍然具有合成和分泌蛋白的能力；提供的提高乳腺上皮细胞系传代次数的方法，简单易操作，对永生化细胞系和原代细胞系均具有显著的效果，有望提高多种乳腺上皮细胞系的稳定传代的传代次数，降低相关研究的细胞成本。

公开(公告)号：CN117778468A

公开(公告)日：2024-03-29

申请号：CN202410141735.X

申请日：2024-02-01

Applicant: 西北农林科技大学

Inventor： 刘军 ,  冯瑞 ,  赵江林 ,  祝振亮 ,  米晓钰 ,  郑小曼 ,  韩静 ,  刘旭 ,  张涌

IPC: C12N15/85 ,  C12N9/22 ,  C12N15/113 ,  C12N5/10 ,  C12N15/12 ,  A61P15/14 ,  A61P29/00 ,  A01K67/0275

Abstract: 本发明公开了一种提高奶山羊抗乳腺炎基因β防御素1表达的基因编辑方法，属于基因表达调控、基因编辑和抗病育种技术领域。本发明公开的一种提高奶山羊抗乳腺炎基因β防御素1表达的基因编辑方法，将Cas9‑SgRNA4和供体载体共转染宿主细胞。本发明公开的一种提高奶山羊抗乳腺炎基因β防御素1表达的基因编辑方法，泌乳时期条件下，可以提高乳腺内β防御素1的含量，从而对乳腺炎致病菌具有拮抗作用。

公开(公告)号：CN115896227A

公开(公告)日：2023-04-04

申请号：CN202211643365.7

申请日：2022-12-20

Applicant: 西北农林科技大学

Inventor： 刘军 ,  张涌 ,  高元鹏 ,  祝振亮 ,  韩静

IPC: C12Q1/02 ,  G01N33/68 ,  C12Q1/6869 ,  C12N5/10 ,  C12N15/85 ,  C12N15/56

Abstract: 本发明公开了一种鉴定外源基因整合位点以增强转基因表达的方法，其方法包括如下步骤：首先从泌乳期和干奶期山羊乳腺组织中分离培养了乳腺上皮细胞，通过免疫染色检测乳腺上皮细胞中角蛋白8的表达，以确定细胞纯度，随后对乳腺上皮细胞进行ATAC‑seq和RNA‑seq；本发明通过筛选出可用于制备乳腺生物反应器的基因整合位点FAM13A，并在细胞水平上验证了该位点的有效性和安全性，将有助于在奶山羊乳腺生物反应器中生产重组蛋白。该增强转基因表达的方法，结合ATAC‑seq和RNA‑seq来筛选奶山羊泌乳期乳腺上皮细胞染色质特异性开放的区域，并利用CRISPR/Cas9将人溶菌酶基因整合到4个不同的开放区域，通过比较在不同打靶位点插入基因的表达水平，筛选出有利于转基因表达的整合位点FAM13A。