-
公开(公告)号：CN105638645B
公开(公告)日：2017-12-01
申请号：CN201511022867.8
申请日：2015-12-30
Applicant: 湖南农业大学
Abstract: 本发明公开了一种红豆杉悬浮细胞包埋玻璃化超低温保存方法。包括：(1)红豆杉愈伤组织的悬浮培养：挑取培养15d的白色或者淡黄色的愈伤组织，使用改良的MS‑I号培养基；(2)红豆杉细胞系悬浮预培养：使用改良的MS‑II号培养基预培养1天；(3)包埋；(4)预处理：用预装载液LB7处理胶球30～60分钟；(5)装载：用PVS3对胶球处理30～60分钟；(6)冷冻保存；(7)解冻：用45℃恒温水浴1分钟左右化冻；(8)恢复培养，在6周左右可以恢复生长。本发明方法操作简单易行，且恢复生长时间短，适合大规模的红豆杉种质资源的保存，方法适合多种红豆杉细胞系的保存，具有广谱的适应性。
-
公开(公告)号：CN102715086B
公开(公告)日：2014-04-16
申请号：CN201210201777.5
申请日：2012-06-19
Applicant: 湖南农业大学
IPC: A01H4/00
Abstract: 本发明公开了一种红豆杉试管苗诱导获得愈伤组织和悬浮细胞的方法。包括：（1）种子外种皮剥离：利用机械破壳，手工剥离外种皮；（2）外植体消毒：依次经70%酒精消毒90s和0.1%氯化汞消毒12min，无菌水冲洗5次后备用；（3）种子预处理：用无菌水密封常温浸种1-5天；（4）分离合子胚；（5）试管苗的诱导：将种胚接种到试管苗诱导培养基上；（6）愈伤组织的诱导；（7）愈伤组织的继代培养；（8）愈伤组织的悬浮培养。本发明具有简便、快速获取红豆杉愈伤组织以及利用该愈伤组织给红豆杉的细胞悬浮培养提供原料或者进一步筛选高产紫杉醇细胞株提供优质筛选材料的特点，能节省大量的人力、物力、提高劳动效率。
-
公开(公告)号：CN102726292B
公开(公告)日：2014-02-05
申请号：CN201210201360.9
申请日：2012-06-19
Applicant: 湖南农业大学
Abstract: 本发明公开了一种快速打破南方红豆杉种子休眠的方法。包括：（1）种子外种皮剥离：利用机械破壳，手工剥离外种皮；（2）外植体消毒：依次经70%酒精消毒90s和0.1%氯化汞消毒12min，无菌水冲洗5次后备用；（3）种子预处理：用无菌水密封常温浸种1-5天；（4）分离合子胚；（5）试管苗的离体培养：将种胚接种到试管苗诱导培养基上，可以获得99.9%的种子萌发率。本发明提供了一种简便、快速打破南方红豆杉种子休眠的方法，为获取整齐一致的南方红豆杉种苗打下基础，能节省大量的人力、物力、提高劳动效率。
-
公开(公告)号：CN102726292A
公开(公告)日：2012-10-17
申请号：CN201210201360.9
申请日：2012-06-19
Applicant: 湖南农业大学
IPC: A01H4/00
Abstract: 本发明公开了一种快速打破南方红豆杉种子休眠的方法。包括：（1）种子外种皮剥离：利用机械破壳，手工剥离外种皮；（2）外植体消毒：依次经70%酒精消毒90s和0.1%氯化汞消毒12min，无菌水冲洗5次后备用；（3）种子预处理：用无菌水密封常温浸种1-5天；（4）分离合子胚；（5）试管苗的离体培养：将种胚接种到试管苗诱导培养基上，可以获得99.9%的种子萌发率。本发明提供了一种简便、快速打破南方红豆杉种子休眠的方法，为获取整齐一致的南方红豆杉种苗打下基础，能节省大量的人力、物力、提高劳动效率。
-
公开(公告)号：CN102715085A
公开(公告)日：2012-10-10
申请号：CN201210201775.6
申请日：2012-06-19
Applicant: 湖南农业大学
IPC: A01H4/00
Abstract: 本发明公开了一种诱导红豆杉种子种胚获得愈伤组织和悬浮细胞的方法。包括：（1）种子外种皮剥离；（2）外植体消毒；（3）种子预处理：用无菌水密封常温浸种1-5天；（4）分离合子胚；（5）愈伤组织的诱导；（6）愈伤组织的继代培养；（7）愈伤组织的悬浮培养：挑取生长势好的淡黄色合子胚细胞系，转入液体培养基中进行悬浮培养，获得红豆杉合子胚愈伤组织悬浮细胞。本发明具有简便、快速获取红豆杉愈伤组织以及利用该愈伤组织给红豆杉的细胞悬浮培养提供原料或者进一步筛选高产紫杉醇细胞株提供优质筛选材料的特点，能节省大量的人力、物力、提高劳动效率。
-
Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN101250549B
公开(公告)日：2011-08-10
申请号：CN200810030963.0
申请日：2008-04-01
Applicant: 湖南农业大学
Abstract: 一种柑橘成年态节间茎段遗传转化方法，其包括如下步骤：(1)成年态材料消毒，在温室中选取半木质化的新梢，在采枝梢前一周，每隔一天用5wt％的次氯酸钠溶液擦拭枝梢一遍，共擦拭3～4次，然后再将次氯酸钠溶液擦拭过的枝梢剪下，在无菌条件下切割成4～5cm的茎段，用10wt％的次氯酸钠溶液加2～3滴吐温浸泡20～35min，无菌水冲洗3～4次，切割成1～1.5cm的节间茎段备用；(2)转化；(3)抗性芽再生；(5)温室二次嫁接；(6)抗性芽和抗性植株鉴定，采用公知的PCR分析法进行鉴定。本发明柑橘成年态材料消毒效果好，污染率低；不定芽诱导率达48％；抗性芽嫁接成活率达80％以上；再生转化植株没有嵌合现象。特别适合于冰糖橙、脐橙、椪柑等柑橘主栽品种的成年态节间茎段遗传转化。
-
公开(公告)号：CN102715085B
公开(公告)日：2014-04-16
申请号：CN201210201775.6
申请日：2012-06-19
Applicant: 湖南农业大学
IPC: A01H4/00
Abstract: 本发明公开了一种诱导红豆杉种子种胚获得愈伤组织和悬浮细胞的方法。包括：（1）种子外种皮剥离；（2）外植体消毒；（3）种子预处理：用无菌水密封常温浸种1-5天；（4）分离合子胚；（5）愈伤组织的诱导；（6）愈伤组织的继代培养；（7）愈伤组织的悬浮培养：挑取生长势好的淡黄色合子胚细胞系，转入液体培养基中进行悬浮培养，获得红豆杉合子胚愈伤组织悬浮细胞。本发明具有简便、快速获取红豆杉愈伤组织以及利用该愈伤组织给红豆杉的细胞悬浮培养提供原料或者进一步筛选高产紫杉醇细胞株提供优质筛选材料的特点，能节省大量的人力、物力、提高劳动效率。
-
公开(公告)号：CN102687667B
公开(公告)日：2013-09-04
申请号：CN201210203083.5
申请日：2012-06-19
Applicant: 湖南农业大学
IPC: A01H4/00
Abstract: 本发明公开了一种红豆杉成熟胚乳诱导单倍体胚乳愈伤组织的方法。包括：（1）种子外种皮剥离：利用机械破壳，手工剥离外种皮；（2）外植体消毒：依次经70%酒精消毒90s和0.1%氯化汞消毒12min，无菌水冲洗5次后备用；（3）种子预处理：用无菌水密封常温浸种1-5天；（4）胚乳组织的分离；（5）胚乳愈伤组织的离体诱导：将种子胚乳接种到愈伤组织诱导培养基上，30天后可以获得97.92%的诱导率。本发明能简便、快速获得红豆杉成熟胚乳愈伤组织，为简化遗传分析、染色体操作、作为转基因材料以及基因组学研究材料打下基础。
-
公开(公告)号：CN101260399B
公开(公告)日：2011-08-10
申请号：CN200810030803.6
申请日：2008-03-13
Applicant: 湖南农业大学
Abstract: 抗柑橘溃疡病pthA-nls基因及其构建方法与应用。本发明利用柑橘溃疡病的致病基因pthA介导广谱抗性原理，构建了抗柑橘溃疡病的新基因pthA-nls。其构建方法包括以下步骤：(1)引物设计；(2)NLS序列的克隆；(3)PCR产物回收及酶切；(4)植物表达载体双酶切；(5)将pBI121酶切产物用T4DNA连接酶与相应的NLS序列的PCR酶切产物连接；(6)将连接产物转化大肠杆菌DH5α，获得阳性克隆基因pthA-nls。基因pthA-nls可进一步对柑橘的感病品种进行遗传转化，获得抗柑橘溃疡病的新种质。本发明之抗柑橘溃疡病pthA-nls基因为柑橘抗溃疡病育种提供了有效工具。
-
公开(公告)号：CN102715086A
公开(公告)日：2012-10-10
申请号：CN201210201777.5
申请日：2012-06-19
Applicant: 湖南农业大学
IPC: A01H4/00
Abstract: 本发明公开了一种红豆杉试管苗诱导获得愈伤组织和悬浮细胞的方法。包括：（1）种子外种皮剥离：利用机械破壳，手工剥离外种皮；（2）外植体消毒：依次经70%酒精消毒90s和0.1%氯化汞消毒12min，无菌水冲洗5次后备用；（3）种子预处理：用无菌水密封常温浸种1-5天；（4）分离合子胚；（5）试管苗的诱导：将种胚接种到试管苗诱导培养基上；（6）愈伤组织的诱导；（7）愈伤组织的继代培养；（8）愈伤组织的悬浮培养。本发明具有简便、快速获取红豆杉愈伤组织以及利用该愈伤组织给红豆杉的细胞悬浮培养提供原料或者进一步筛选高产紫杉醇细胞株提供优质筛选材料的特点，能节省大量的人力、物力、提高劳动效率。
-
-
-
-
-
-
-
-
-
Search Results
12
records
(took 0.025 seconds)
