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公开(公告)号：CN113136382B
公开(公告)日：2023-01-31
申请号：CN202010060152.6
申请日：2020-01-19
Applicant: 河北科技大学
Abstract: 本发明提供了一种基于CRISPRi调控的利用谷氨酸棒状杆菌合成乙醛酸的方法，该方法包括通过dCas9表达盒基因置换谷氨酸棒状杆菌的乙醛脱氢酶编码基因，通过异柠檬酸脱氢酶编码基因与苹果酸合成酶编码基因的sgRNA转录单元置换谷氨酸棒状杆菌的乳酸脱氢酶编码基因，并过表达谷氨酸棒状杆菌的异柠檬酸裂合酶编码基因，得到谷氨酸棒状杆菌工程菌株，且培养所述工程菌株发酵合成乙醛酸。本发明以谷氨酸棒状杆菌为出发菌株，敲除了其支流代谢关键酶乳酸脱氢酶编码基因和乙醛脱氢酶编码基因，建立了CRISPRi调控体系，利用异柠檬酸脱氢酶编码基因和苹果酸合成酶编码基因表达水平下调，同时过表达异柠檬酸裂合酶编码基因，建立了利用谷氨酸棒杆菌生物合成乙醛酸的方法。
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公开(公告)号：CN113136382A
公开(公告)日：2021-07-20
申请号：CN202010060152.6
申请日：2020-01-19
Applicant: 河北科技大学
Abstract: 本发明提供了一种基于CRISPRi调控的利用谷氨酸棒状杆菌合成乙醛酸的方法，该方法包括通过dCas9表达盒基因置换谷氨酸棒状杆菌的乙醛脱氢酶编码基因，通过异柠檬酸脱氢酶编码基因与苹果酸合成酶编码基因的sgRNA转录单元置换谷氨酸棒状杆菌的乳酸脱氢酶编码基因，并过表达谷氨酸棒状杆菌的异柠檬酸裂合酶编码基因，得到谷氨酸棒状杆菌工程菌株，且培养所述工程菌株发酵合成乙醛酸。本发明以谷氨酸棒状杆菌为出发菌株，敲除了其支流代谢关键酶乳酸脱氢酶编码基因和乙醛脱氢酶编码基因，建立了CRISPRi调控体系，利用异柠檬酸脱氢酶编码基因和苹果酸合成酶编码基因表达水平下调，同时过表达异柠檬酸裂合酶编码基因，建立了利用谷氨酸棒杆菌生物合成乙醛酸的方法。
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公开(公告)号：CN106148319A
公开(公告)日：2016-11-23
申请号：CN201610554454.2
申请日：2016-07-14
Applicant: 河北科技大学
Abstract: 本发明公开了一种基于反应吸附法制备固定化酶的方法，涉及生物技术领域。本发明通过在含有酶的水溶液中经过两种或两种以上的化合物反应，在形成磷酸钙、磷酸氢钙、碳酸钙、碳酸氢钙、氢氧化铝、植酸钙、亚铁氰化锌、甲壳素有机物中的一种或多种沉淀物的过程中，完成沉淀物吸附包裹酶分子制得固定化酶。本发明就是一种改进的吸附法，其目的就是加强载体与酶的结合力，克服固定化酶容易脱落的缺点，具备了操作简单、价格低廉、酶活稳定的特点，值得推广应用。
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公开(公告)号：CN101781633A
公开(公告)日：2010-07-21
申请号：CN200910227840.0
申请日：2009-12-23
Applicant: 河北科技大学
Abstract: 本发明涉及一种菌种，同时涉及一种利用该菌种制备β-糖苷酶TtβGLY的方法，以及利用β-糖苷酶TtβGLY制备一种含低聚糖的低乳糖乳的制备方法。大肠埃希氏菌(Escherichia coli)TTBGLYWT CGMCCNo.3078，该制备底乳糖乳的方法方法包括常规的低乳糖乳的制备方法，即将生鲜乳加入酶进行水解，超高温杀菌后，灌装得成品，所述的酶为β-糖苷酶TtβGLY该酶是由基因工程株大肠埃希氏菌TTBGLYWT经发酵、提取制得。采用上述技术方案，能够在降低牛奶中乳糖含量的同时，合成大量的低聚半乳糖，其中，乳糖的水解率最高可达95.24％，低聚半乳糖占牛乳中糖分最高可达37.13％。
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公开(公告)号：CN104946628A
公开(公告)日：2015-09-30
申请号：CN201510364596.8
申请日：2015-06-29
Applicant: 河北科技大学
Abstract: 本发明涉及一种丝状真菌基因组的提取方法，使用蜗牛酶和纤维素酶的混合酶液对产黄青霉菌、黑曲霉菌、里氏木霉菌、桔青霉菌等丝状真菌菌丝进行酶解，并将酶解处理与超声处理、高温加热处理进行有效结合，从而获得供PCR鉴定用含有丝状真菌基因组的上清液。由本发明的提取方法获得的丝状真菌菌丝酶解液，其上清液直接用于PCR反应，无需进行提纯操作，便能够得到丝状真菌18S rDNA基因条带，操作过程简单、安全、稳定，避免了有毒提取试剂的使用，减少对实验人员的伤害。
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公开(公告)号：CN101942494A
公开(公告)日：2011-01-12
申请号：CN201010272408.6
申请日：2010-09-06
Applicant: 河北科技大学 , 河北华荣制药有限公司
Abstract: 本发明涉及一种用于发酵工程领域生产VB12的方法，尤其是一种厌氧发酵法制备VB12的方法。该方法包括对玉米浆进行净化处理；采用经过上述处理的玉米浆配制培养基，接种谢氏丙酸杆菌后，进行厌氧发酵；将所得的发酵液经常规程序进行VB12的提取精制，获得VB12产品。采用该方法，实现了对常规的谢氏丙酸杆菌厌氧发酵工艺的改进，提高了发酵效价。
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公开(公告)号：CN101709268A
公开(公告)日：2010-05-19
申请号：CN200910227839.8
申请日：2009-12-23
Applicant: 河北科技大学
Abstract: 本发明涉及一种用于生物工程、生物技术领域以实现对菌种高通量筛选的菌株培养方法，尤其是一种丝状菌高通量筛选的悬浮培养方法。该方法包括丝状菌选取、获得菌落、设置多孔板培养环境及悬浮培养等步骤，通过使菌落悬浮在液体培养基表面进行静止培养的简单方式，解决微型化培养的供氧难题，实现了丝状菌的高通量培养，配合相应的高通量检测技术，实现了高通量筛选，并且还使菌株的培养过程和孢子形成过程合二为一，进一步缩短菌种选育的流程，达到了高产菌株高通量筛选的目的。其操作简单，效率较高。
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公开(公告)号：CN118581075A
公开(公告)日：2024-09-03
申请号：CN202410834545.6
申请日：2024-06-26
Applicant: 河北科技大学
Abstract: 本发明属于基因工程技术领域，公开了一种D‑阿洛酮糖‑3‑差向异构酶突变体、其相关生物材料、制备方法及其应用。本发明通过理性分子进化，提供了一种安全菌株来源、耐高温、转化率高的D‑阿洛酮糖‑3‑差向异构酶突变体，其氨基酸序列如SEQ ID No.6所示。该酶最适pH为6.0，最适温度为65℃，70℃下半衰期为30min，在pH7.0、65℃条件下果糖转化率达30.6％，较野生型酶果糖转化率的增长率为12.9％。本发明还提供了该酶的编码基因、表达载体、工程菌株及其制备方法，为其工业化生产奠定基础。本发明可应用于阿洛酮糖异构酶或D‑阿洛酮糖的制备，制备所得的D‑阿洛酮糖可用于食品、保健和医疗等领域。
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公开(公告)号：CN112410322A
公开(公告)日：2021-02-26
申请号：CN202011368793.4
申请日：2020-11-30
Applicant: 河北科技大学
Abstract: 本发明选用地衣芽孢杆菌β‑甘露聚糖酶基因，通过易错PCR对该基因进行突变，通过在枯草芽孢杆菌中进行高效分泌表达，筛选得到一个酶活性及pH稳定性提高的突变体。结果表明，β‑甘露聚糖酶及其突变体的最适温度60℃，最适pH 6.0，发酵4天时突变体酶活性达13888±260 U/mL，是野生型的2.2倍，且70℃半衰期为30 min，另外，β‑甘露聚糖酶突变体较野生型具更高的pH稳定性，在pH5.0~10.0范围内37℃保温1h后，残余酶活性均高于80%。该酶在养殖业中展现了良好的应用前景。
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