公开(公告)号：CN119842793A

公开(公告)日：2025-04-18

申请号：CN202510114450.1

申请日：2025-01-24

Applicant: 江苏大学

Inventor： 吴平 ,  冯勇 ,  刘雨薇

IPC: C12N15/82 ,  C12N15/29 ,  C07K14/415 ,  A01H5/00 ,  A01H5/06 ,  A01H6/54

Abstract: 本发明属于基因工程技术领域，具体涉及LjPUB7蛋白在调控植物根瘤固氮效率和/或调控植物产量的应用。本发明通过CRISPR‑CAS9技术敲除LjPUB7基因，并通过百脉根稳定转化技术获得了LjPUB7突变体植株。在接种根瘤菌之后，与野生型相比，LjPUB7基因突变体植株的侵染线显著提高，说明LjPUB7基因调控了根瘤的发育；通过结瘤实验，结果表明LjPUB7敲除后能够显著提高根瘤数目和根瘤密度说明LjPUB7该基因及其表达的蛋白调控了早期根瘤的形成和豆科植物的固氮效率。抑制该基因的表达，可以提高豆科植物的固氮效率，从而增加植物的生物量和产量，这在豆科作物固氮机制研究以及农业生产上具有应用前景。

公开(公告)号：CN119685295A

公开(公告)日：2025-03-25

申请号：CN202411761345.9

申请日：2024-12-03

Applicant: 江苏大学

Inventor： 陈华友 ,  阎铭晨 ,  许毓丹 ,  陈颖 ,  冯勇 ,  周慧敏 ,  王振 ,  穆罕默德·赛义德 ,  倪忠 ,  方真

IPC: C12N9/56 ,  C12N15/75 ,  C12N15/70 ,  C12N15/66 ,  C12N15/10 ,  C12N1/21 ,  A23K10/26 ,  A23K10/37 ,  A23K10/12 ,  A23K10/14 ,  A23K20/142 ,  C12R1/125 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明属于酶工程和农业废弃物转化领域，具体涉及一种耐酸性高活力角蛋白酶制剂的制备方法及其在羽毛粉发酵饲料中的应用。本发明基于cotG‑KERQ7进行了耐酸性的设计，通过催化中心碱催化残基替换、表面不稳定正电荷氨基酸替换、柔性区域引入这三轮的组合突变策略，兼顾提高了角蛋白酶突变体的酸稳定性与活性。通过使丝氨酸角蛋白酶的酶蛋白表面更适应酸性的环境，增大酸性环境中蛋白酶的底物结合空腔体积，使其可以更好接纳和催化底物，从而有效提升酸稳定性和活性；最终得到一种耐酸性高活力的角蛋白酶制剂B.subtilis cotG‑KERQ7‑M2，为后续羽毛废物绿色转化成酸溶蛋白的产业化、发酵饲料的制备提供了参考。

公开(公告)号：CN119685368A

公开(公告)日：2025-03-25

申请号：CN202411761349.7

申请日：2024-12-03

Applicant: 江苏大学

Inventor： 陈华友 ,  陈彦臻 ,  李苗苗 ,  冯勇 ,  倪忠 ,  郭忠建 ,  穆罕默德·赛义德 ,  胡朝阳 ,  陈永 ,  马毅

IPC: C12N15/75 ,  C12N15/66 ,  C12N15/70 ,  C12N9/52 ,  C12N1/21 ,  C12N15/62 ,  C12Q1/04 ,  A23K10/26 ,  A23K10/37 ,  A23K10/12 ,  A23K10/14 ,  A23K20/142 ,  A23K20/24 ,  C12R1/125 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明属于生物技术和发酵饲料领域，涉及一种高活性角蛋白酶的制备方法及其在羽毛粉降解和发酵饲料制备等领域的应用。本发明构建重组角蛋白酶工程菌并制备粗酶液；通过eq‑PCR扩增获得带有随机突变位点的kerD21eq片段，构建E.coli‑B.subtilis穿梭表达载体质粒文库，通过共转化B.subtilis WB800N获得突变体文库；同时建立了一种结合平板透明圈及96孔板法的高通量筛选方法，基于筛选后的突变菌株，制备得到高活性角蛋白酶，利用该酶完成了羽毛粉的降解，并可应用于发酵饲料的制备；使得羽毛废弃物得以有效利用，带来了显著的经济效益，并有效减少了污染物的产生，具备良好的应用前景。

公开(公告)号：CN118638774A

公开(公告)日：2024-09-13

申请号：CN202410680246.1

申请日：2024-05-29

Applicant: 江苏大学

Inventor： 陈华友 ,  吴正粉 ,  李鹏飞 ,  陈永 ,  冯勇 ,  马毅 ,  倪忠 ,  郭忠健 ,  雍阳春 ,  朱道辰

IPC: C12N11/16 ,  C12N15/75 ,  C12N15/64 ,  C12N15/53 ,  C12N9/04 ,  C12N1/21 ,  B09B3/60 ,  C12R1/125

Abstract: 本发明属于生物技术和生物质转化领域，具体涉及一种纤维二糖脱氢酶固定化酶制剂的制备方法及其在秸秆降解领域中的应用。通过构建重组工程菌，优化筛选衣壳蛋白、连接肽得到最佳展示条件，把CDH展示在芽孢表面；并利用ep‑PCR技术获得携带随机突变位点的cdh基因片段，构建穿梭表达载体cdhep突变质粒文库。结合芽孢表面展示技术操作简单、无需进行蛋白纯化的优点，通过高通量筛选获得高催化活性CDH突变体；在多种酶的混合体系中，所制备的酶制剂均表现出良好的秸秆协同降解能力，且固定化CDH可循环使用。本发明不仅为纤维二糖脱氢酶的制备提供了新途径，还为秸秆降解和生物能源开发提供了更有效的方法，具有广阔的应用前景。

公开(公告)号：CN118685376A

公开(公告)日：2024-09-24

申请号：CN202410939300.X

申请日：2024-07-15

Applicant: 江苏大学

Inventor： 陈华友 ,  陈曦华 ,  李泽阳 ,  冯勇 ,  陈永 ,  郭忠健 ,  雍阳春 ,  卜权 ,  朱道辰

IPC: C12N9/04 ,  C12N15/53 ,  C12N15/75 ,  C12N1/21 ,  A23K10/14 ,  A23K10/12 ,  A23K10/37 ,  C12R1/125

Abstract: 本发明属于生物技术和基因工程领域，涉及一种底物广谱性葡萄糖氧化酶的制作方法及在秸秆降解转化中的应用。本发明利用枯草芽孢表面展示系统，选择CotG作为表面展示的锚定蛋白，优化设计不同类型连接肽，将来源于出芽短梗霉的葡萄糖氧化酶基因与枯草芽孢杆菌的衣壳蛋白基因融合，并在枯草芽孢杆菌表面成功展示该融合蛋白。这种表面展示的葡萄糖氧化酶具有广泛的底物适应性，可与多种酶混合，显著提高秸秆的降解转化效率。本发明不仅简化了酶的生产过程，还提高了酶的稳定性和活性，使得葡萄糖氧化酶的两个亚基能够相对自由地调整位置和构象，以适应不同底物的结合需求，为生物质资源的开发利用提供了新的思路和技术手段，市场应用前景广阔。