公开(公告)号：CN118006690A

公开(公告)日：2024-05-10

申请号：CN202410035165.6

申请日：2024-01-10

Applicant: 扬州大学

Inventor： 金文杰 ,  马陈淑 ,  周洪善 ,  朱亭帆 ,  秦爱建 ,  邵红霞 ,  羊扬 ,  闫彩虹 ,  王倩倩 ,  刘金彪 ,  王建 ,  邓建中 ,  单玉平 ,  洪枫

IPC: C12N15/866 ,  A61K39/295 ,  A61K39/215 ,  A61P31/14 ,  C12N15/62 ,  C07K19/00 ,  G01N33/569

Abstract: 本发明属于基因工程和疫苗开发技术领域，公开了三种猪致病性冠状病毒主要保护性蛋白串联表达载体的构建及应用，选取PEDV、PDCoV、TGEV的中和抗原表位基因，按一定顺序与pFastBacHTA昆虫表达载体连接，通过对不同位点的酶切及测序验证是否串联成功；而后通过重组杆状病毒真核表达系统对串联基因进行融合蛋白表达，以间接免疫荧光、Western Blot验证融合蛋白表达效果；将表达融合蛋白的重组病毒免疫小鼠并通过间接免疫荧光验证其免疫原性；并以串联重组病毒感染Sf9细胞后获得的病变细胞的破碎上清作为包被抗原，建立了针对三种冠状病毒主要保护性蛋白的ELISA检测方法。本发明为预防致猪腹泻的三种冠状病毒提供了一种行之有效的方法，为冠状病毒新型疫苗的开发提供了新思路。